武月園，邵穎利，張可源，周金蓮，湯曉麗

(魯東大學(xué)農(nóng)學(xué)院，山東煙臺(tái) 264025)

獼猴桃是雌雄異株植物，利用獼猴桃種子苗嫁接生產(chǎn)雌株苗周期長(zhǎng)[1]，且實(shí)生苗的性狀不穩(wěn)定，準(zhǔn)確辨別幼株的性別較難，且實(shí)生苗嫁接雌株后差異較大。經(jīng)組織培養(yǎng)得到的雌株性狀穩(wěn)定，生長(zhǎng)整齊，結(jié)果一致，繁殖速度快，是目前迅速繁育良種的方式[2-5]。

紅陽(yáng)獼猴桃是由四川省自然資源研究所選育的中華獼猴桃優(yōu)良紅肉型品種，果肉黃綠色，果心呈紅色放射狀，肉質(zhì)細(xì)滑，每100 g鮮果維生素C含量135 mg，總糖含量13.45%，超出海沃德近5%[6]，深受消費(fèi)者的喜愛(ài)[7]。筆者以紅陽(yáng)獼猴桃為試材進(jìn)行組培繁育，研究不停種類(lèi)、不同濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)其增殖和生根的影響，以篩選各階段最適的培養(yǎng)條件，為建立紅陽(yáng)獼猴桃組培快速繁育技術(shù)體系提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為魯東大學(xué)農(nóng)學(xué)院農(nóng)林遺傳改良中心實(shí)驗(yàn)基地栽植的紅陽(yáng)獼猴桃，剪取2年生植株的新梢幼嫩莖段做組培材料，于4 ℃低溫保存24 h。

1.2 試驗(yàn)方法

組培苗增殖用MS為基本培養(yǎng)基，生根用1/2 MS為基本培養(yǎng)基。培養(yǎng)基蔗糖濃度30 g/L，瓊脂濃度7 g/L，pH值5.80～5.85。組培室培養(yǎng)條件：采用日光燈管模擬光照，培養(yǎng)溫度 (25±2) ℃，空氣相對(duì)濕度50%～60%，光周期為12 h光照、12 h黑暗。

初代無(wú)菌苗的培養(yǎng)。將4 ℃低溫保存的幼嫩新梢剪成3.0～5.0 cm的帶芽莖段，先用流水沖洗2 h；將莖段轉(zhuǎn)移到無(wú)菌超凈工作臺(tái)上，無(wú)菌水浸泡莖段，搖晃1 min左右，倒掉水；然后用75%乙醇浸泡30 s；無(wú)菌水沖洗3～4遍；0.1%的氯化汞消毒10 min；無(wú)菌水沖洗5～6次，最后用無(wú)菌濾紙吸干莖段表面水分。將單芽莖段剪成1.5～2.0 cm，接種于初代培養(yǎng)基上，每瓶接種3個(gè)莖段。1周后察看外植體的污染情況，2周后察看外植體是否成活，成活的莖段會(huì)從腋芽處冒出新芽。

繼代增殖培養(yǎng)。當(dāng)初代培養(yǎng)基莖段上的腋芽生長(zhǎng)至3 cm時(shí)，用解剖刀或剪刀從新發(fā)腋芽的基部切下或剪下，接種到以MS為基本培養(yǎng)基、添加不同濃度6-BA(0.3、0.4、0.5 mg/L)和GA3(0.3、0.4、0.5 mg/L)配合的9種繼代培養(yǎng)基上(表1)，每種培養(yǎng)基接種20瓶、每瓶接種3株，每處理重復(fù)3次。30 d統(tǒng)計(jì)增殖情況，計(jì)算單株的平均增殖數(shù)。研究不同成分培養(yǎng)基對(duì)紅陽(yáng)獼猴桃增殖的影響。

平均增殖數(shù)=增殖的新幼苗總株數(shù)/接種苗株數(shù)

表1 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合的增殖培養(yǎng)基配方

生根培養(yǎng)。將繼代培養(yǎng)所得叢生苗中生長(zhǎng)健壯，高4～6 cm的組培苗移栽到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的IBA(0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mg/L)，計(jì)5個(gè)處理，分別記作B1、B2、B3、B4、B5。每處理接入20瓶，每瓶3株，每處理重復(fù)3次。45 d后調(diào)查生根情況，統(tǒng)計(jì)獲得單株的平均生根數(shù)量，計(jì)算生根率。

生根率(%)=生根苗株數(shù)/接種苗總株數(shù)×100

煉苗與移栽。將組培瓶擰開(kāi)瓶蓋但不敞開(kāi)，使生長(zhǎng)健壯、生根良好的組培苗煉苗1周左右，慢慢適應(yīng)外界環(huán)境，提高移栽成活率。煉苗完成后，將組培苗小心取出，去除根部殘留的培養(yǎng)基，移栽至裝有無(wú)菌基質(zhì)(100%蛭石)的營(yíng)養(yǎng)缽中，置于溫度和濕度恒定的溫室中，基質(zhì)中澆灌Hoagland營(yíng)養(yǎng)液。3周統(tǒng)計(jì)移栽苗成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)紅陽(yáng)獼猴桃增殖的影響

將組培成活的無(wú)菌苗接種在含有不同濃度6-BA和GA3組合的繼代增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)10 d后腋芽開(kāi)始萌生。30 d后平均增殖數(shù)如表2。 不同濃度的6-BA和GA3組合對(duì)紅陽(yáng)獼猴桃組培增殖情況不同，平均增殖數(shù)為處理A9(3.76)>A1(3.00)=A5(3.00)>A8(2.94)>A4(2.77)>A6(2.59)>A7(2.31)>A3(2.14)>A2(2.07)?？芍?-BA與GA3濃度相等(同為0.3、0.4、0.5 mg/L)時(shí)，增殖效果好。

6-BA濃度為0.3 mg/L時(shí)，增大GA3濃度，平均增殖數(shù)減少；6-BA濃度為0.4 mg/L時(shí)，增大GA3濃度，平均增殖數(shù)先增加后減少；6-BA濃度為0.5 mg/L時(shí)，增大GA3濃度，平均增殖數(shù)增大。由此可見(jiàn)，6-BA濃度一定，GA3濃度與平均增殖數(shù)無(wú)線性關(guān)系。紅陽(yáng)獼猴桃莖段增殖培養(yǎng)所用培養(yǎng)基的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配方以MS+0.5 mg/L GA3+0.5 mg/L 6-BA為佳。

表2 紅陽(yáng)獼猴桃在9種增殖培養(yǎng)基上的增殖數(shù)

2.2 不同濃度IBA對(duì)接種后生根的影響

如表3，IBA對(duì)獼猴桃組培苗的生根作用明顯。平均生根數(shù)：處理B1(1/2 MS+0.3 mg/L IBA，8.81條)<處理B2(1/2MS+0.4 mg/L IBA，10.41條)<處理B3(1/2 MS+0.5 mg/L IBA，10.61條)<處理B5(1/2MS+0.7 mg/L IBA，11.25條)<處理B4(1/2MS+0.6 mg/L IBA，12.00條)。IBA濃度增大，有利于根的分化，生根數(shù)增多。但I(xiàn)BA濃度達(dá)到0.7 mg/L時(shí)，生根數(shù)減少。

生根率：處理B2(1/2 MS+0.4 mg/L IBA，63.33%)<處理B5(1/2MS+0.7mg/L IBA，66.67%)<處理B4(1/2MS+0.6mg/L IBA，68.33%)<處理B3(1/2MS+0.5mg/L IBA，78.33%)<處理B1(1/2MS+0.3 mg/L IBA，86.67%)。表明IBA濃度與生根率無(wú)線性關(guān)系。IBA濃度為0.3 mg/L時(shí)，平均生根數(shù)較低，但生根率最高；IBA濃度0.4 mg/L和0.5 mg/L的平均生根數(shù)相近，生根率63.33%、78.33%；IBA濃度0.6 mg/L和0.7 mg/L時(shí)，生根率分別為68.33%和66.67%，平均生根數(shù)分別為12.00和11.25。隨著IBA濃度的升高，雖然生根數(shù)有所增加，但生根率開(kāi)始下降，表明獼猴桃對(duì)IBA較敏感，濃度超過(guò)0.5 mg/L生根率開(kāi)始降低。綜合考慮獼猴桃的生根數(shù)和生根率，最適的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.5 mg/L IBA。

表3 不同濃度IBA對(duì)紅陽(yáng)獼猴桃組培苗生根的影響

2.3 組培苗的移栽

將在生根培養(yǎng)基中生根良好的幼苗經(jīng)1周左右的開(kāi)蓋煉苗后，移栽至100%蛭石基質(zhì)中，通過(guò)澆灌營(yíng)養(yǎng)液，提供幼苗生長(zhǎng)所需的養(yǎng)分，同時(shí)保證合適的溫度和濕度，幼苗的成活率可達(dá)95%以上，長(zhǎng)勢(shì)良好，葉片鮮綠(圖1)。

圖1 移栽60 d的獼猴桃幼苗

3 小結(jié)與討論

不同的獼猴桃品種所需的組織培養(yǎng)條件不同，培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑不同配比、培養(yǎng)環(huán)境對(duì)于外植體的增殖和根分化發(fā)育等都有重要影響[8]。對(duì)紅陽(yáng)獼猴桃組培增殖和生根的研究表明，6-BA與GA3濃度相等時(shí)增殖效果好。當(dāng)6-BA濃度一定時(shí)，GA3濃度與平均增殖數(shù)并未表現(xiàn)出線性關(guān)系。當(dāng)6-BA和GA3各為0.5 mg/L時(shí)，增殖效果顯著優(yōu)于其它處理，平均增殖數(shù)最大。不同IBA濃度對(duì)健壯叢生苗生根培養(yǎng)的影響為：IBA濃度在(0.3～0.6 mg/L)范圍內(nèi)，濃度升高，平均生根數(shù)隨之增加，但生根率逐漸降低。在0.6 mg/L IBA濃度下平均生根數(shù)最多，但生根率較低；0.5 mg/L IBA濃度下，生根數(shù)較多，生根率也較高，莖基部愈傷組織最小，根較長(zhǎng)。所以紅陽(yáng)獼猴桃適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.5 mg/L IBA。

通過(guò)正交試驗(yàn)和單因素試驗(yàn)獲得了紅陽(yáng)獼猴桃增殖和生根培養(yǎng)的最優(yōu)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類(lèi)和配比濃度，可為紅陽(yáng)獼猴桃組培苗的增殖，提供技術(shù)支持。