劉耀天,席茂盛,趙陽,李月嬋,羅學(xué)剛*

1(天津科技大學(xué) 生物工程學(xué)院,天津,300457) 2(工業(yè)發(fā)酵微生物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨天津市工業(yè)微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(天津科技大學(xué)),天津,300457)

我國海域遼闊，總面積達(dá)473 km2，海洋生物資源極為豐富。其中，我國的藻類養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模目前已是全球第一，其中尤以經(jīng)濟(jì)藻類養(yǎng)殖最為典型[1]。據(jù)《2019中國漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒》記錄，2018年我國海水藻類總產(chǎn)量達(dá)234.4萬t。因此，對(duì)藻類資源的深度開發(fā)利用對(duì)我國海洋經(jīng)濟(jì)的發(fā)展有著至關(guān)重要的意義。

褐藻膠是從海帶、昆布、馬尾藻等褐藻綱植物的細(xì)胞壁及細(xì)胞間質(zhì)中提取得到的一種線性多糖,由β-D-甘露糖醛酸及其C5差向異構(gòu)體α-L-古羅糖醛酸通過α/β-1,4糖苷鍵隨機(jī)排列而成，這兩種糖單元相互聚合形成三種不同的結(jié)構(gòu)單元，分別是聚甘露糖醛酸(PolyM)、聚古羅糖醛酸(PolyG)及M和G隨機(jī)組合形成的雜聚物(PolyMG)[2]。褐藻膠的降解產(chǎn)物褐藻寡糖在醫(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域都具有巨大的利用潛力。褐藻寡糖在抗氧化[3]、抗腫瘤[4]、抗凝血[5]、抗真菌[6]、神經(jīng)保護(hù)[7]、腸道消化吸收[8]及植物的生長及保鮮[9]等方面具有良好的生物活性。

相比于酸堿化學(xué)降解法、電離輻射和高溫高壓物理降解法等傳統(tǒng)褐藻寡糖制備方法，利用褐藻膠裂解酶制備褐藻寡糖的生物酶解法具有反應(yīng)條件溫和、降解效率高、產(chǎn)物分離容易等優(yōu)勢。而目前已報(bào)道的產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株相對(duì)較少，因此篩選生長周期短、產(chǎn)酶量高、酶學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)等展開深入研究，具有很好的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值[10]。

目前已知的產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株主要來源于海水、土壤和海洋藻類等環(huán)境中[11]。此外，在皺紋盤鮑、黑斑海兔等主要以褐藻和紅藻為食的海生動(dòng)物的各種消化器官中也發(fā)現(xiàn)有褐藻膠裂解酶的存在[12-14]。螺類作為海洋生態(tài)系統(tǒng)中的一類龐大的群體，主要以藻類為食，因此其腸道中理論上有可能存在具有良好生理性質(zhì)的產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株。單齒螺(Monodontalabio)是一種大量生活在我國南北潮間帶的經(jīng)濟(jì)螺類，常年以褐藻為食，具有較強(qiáng)的耐受環(huán)境變化的能力[15]。本研究從單齒螺的腸道中篩選得到了一株生長周期短、性質(zhì)穩(wěn)定,且產(chǎn)生熱穩(wěn)定性較好的褐藻膠裂解酶的海生弧菌，并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)及應(yīng)用情況進(jìn)行了分析。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料及主要試劑

本實(shí)驗(yàn)所研究的單齒螺(Monodontalabio)來自山東省青島市某漁場。

2216E培養(yǎng)基：海藻酸鈉5 g,硫酸銨5 g,人工海水1 L,用于菌株的富集、種子液和發(fā)酵液的培養(yǎng)。在2216E培養(yǎng)基中加瓊脂粉15 g即為2216E固體培養(yǎng)基,用于菌株的篩選。

我妻氏血瓊脂平板,青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司。

酶解反應(yīng)底物：海藻酸鈉,上海源葉生物科技有限公司。5 g/L海藻酸鈉,溶于10 mmol/L Tris-HCl緩沖液。

1.1.2 主要儀器

超凈工作臺(tái),蘇州凈化設(shè)備有限公司；電熱恒溫水浴鍋,北京市永光明醫(yī)療儀器廠；普通冰箱,TCL集團(tuán)；UV-3200紫外可見分光光度計(jì),上海美譜達(dá)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株的富集培養(yǎng)

在無菌條件下,用小錘將單齒螺外殼敲碎,取出螺體,用剪子挑出腸道部分,短暫浸入75%的乙醇中將表面消毒,噴灑無菌水去除表面殘留乙醇,加入裝有100 mL 2216E培養(yǎng)基的三角瓶中,28 ℃培養(yǎng)48 h。

1.2.2 產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株的篩選

將富集后的樣品梯度稀釋至10-7,分別取各梯度下的樣品100 μL均勻涂布至以海藻酸鈉為唯一碳源的2216E培養(yǎng)平板上,28 ℃培養(yǎng)48 h。用95%的乙醇處理10 min顯示透明圈,挑取其中具有明顯凹陷透明圈的菌落,以透明圈直徑與菌落直徑的比值(D/d)為標(biāo)準(zhǔn),初步篩選得到可產(chǎn)褐藻膠裂解酶的目標(biāo)菌株。為了分離得到單一的菌落,將初篩的菌落在2216E平板上進(jìn)行劃線分離純化3次,觀察菌落生長狀況及菌落形態(tài),并將得到的目標(biāo)菌株進(jìn)行編號(hào)整理。并進(jìn)一步通過革蘭氏染色法和掃描電子顯微鏡觀察菌株的生長形態(tài)。

1.2.3 褐藻膠裂解酶活性的檢測

將1.2.2中純化后的單菌落點(diǎn)接種于以海藻酸鈉為唯一碳源的2216E培養(yǎng)平板上,30 ℃培養(yǎng)48 h,觀察透明圈大小。

將純化后的單菌落分別接種于2216E種子培養(yǎng)基中30 ℃培養(yǎng)12 h,再將種子液以1%(體積分?jǐn)?shù))的接種量接種于2216E發(fā)酵培養(yǎng)基中,在30 ℃條件下培養(yǎng)24 h。將菌液在4 ℃條件下8 000 r/min離心30 min后,取上清液作為粗酶液,通過3,5-二硝基水楊酸法(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS法)測定粗酶活力。

本實(shí)驗(yàn)所使用的酶活力測定體系為：在400 μL含15 g/L NaCl的5 g/L的海藻酸鈉溶液(溶劑為10 mmol/L Tris-HCl緩沖液)中,加入100 μL粗酶液,在40 ℃條件下振蕩反應(yīng)20 min,加入500 μL DNS終止液終止酶學(xué)反應(yīng),混勻,沸水浴10 min,流水冷卻,在540 nm處檢測光吸收值,測定還原糖的生成量。以加入100 μL熱失活酶液為對(duì)照組,每個(gè)實(shí)驗(yàn)組重復(fù)3次。酶活力單位(U)定義為:在一定的溫度下,單位時(shí)間內(nèi)將底物降解生成1 μg還原糖所需的酶量。

1.2.4 16S rDNA序列分析法鑒定菌種種屬來源

采用菌落PCR的方法對(duì)目標(biāo)菌株16S rDNA進(jìn)行驗(yàn)證,取40 μL裂解液加入10 μL菌液,沸水浴15 min,混勻,以此為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。以正向引物27(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和反向引物1492R(5′-GGTTACCTTGTTAGGACTT-3′)為引物,反應(yīng)條件為：94 ℃預(yù)變性1 min,95 ℃變性45 s,56 ℃下退火1 min,72 ℃延伸1 min,共進(jìn)行30個(gè)循環(huán)；再在72 ℃下延伸10 min。將擴(kuò)增成功的PCR產(chǎn)物測序后拼接得到DNA序列,使用NCBI的BLAST在線軟件對(duì)序列進(jìn)行比對(duì)分析。使用MEGA 7.0軟件中的鄰接法(neighbor-joining,NJ)建立系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.5 神奈川現(xiàn)象試驗(yàn)

將在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)12 h的目標(biāo)菌株點(diǎn)種于我妻氏血瓊脂平板,在37 ℃培養(yǎng)18 h,通過觀察平板是否出現(xiàn)β溶血現(xiàn)象,判斷目標(biāo)菌株是否具有溶血性。

1.2.6 實(shí)驗(yàn)菌株單因素發(fā)酵優(yōu)化

將菌株活化后以1%(體積分?jǐn)?shù))的接種量接種于不同條件的2216E液體培養(yǎng)基中,30 ℃,220 r/min培養(yǎng)12 h,在單因素試驗(yàn)中,控制單一變量,研究不同的碳源(海藻酸鈉、葡萄糖、蔗糖、淀粉、木糖)、氮源(酵母提取物、胰蛋白胨、(NH4)2SO4、NH4Cl)、培養(yǎng)溫度(15、20、25、30、35、40 ℃)、培養(yǎng)基的初始pH值(5、6、7、8、9)、初始NaCl質(zhì)量濃度(10、20、30、40、50、60 g/L)等培養(yǎng)條件對(duì)菌株生長狀況和產(chǎn)酶量的影響。

1.2.7 生長曲線與產(chǎn)酶曲線繪制

在發(fā)酵培養(yǎng)基中接種3次傳代后的菌株,在最優(yōu)發(fā)酵條件下以1%的接種量培養(yǎng),在菌株生長過程中每2 h取樣測定OD600值及酶活力,繪制菌株生長曲線與產(chǎn)酶曲線。

1.2.8 菌株酶學(xué)性質(zhì)測定

在pH 7.5的條件下,分別在25、30、35、40、45、50、55、60 ℃下研究粗酶液的最適溫度。

在40 ℃的條件下,分別在pH 5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5的Tris-HCl緩沖液中確定粗酶液的最適pH。

本研究對(duì)照組患者行急診內(nèi)科的常規(guī)護(hù)理。觀察組在對(duì)照組常規(guī)護(hù)理的基礎(chǔ)上行急診救治模式的護(hù)理干預(yù),結(jié)果表明,觀察組患者至急救室后靜脈通道開放時(shí)間、急救室停留時(shí)間顯著較短,且入院10分鐘后FPSR評(píng)分明顯較低,P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明觀察組患者采用急診救治模式護(hù)理進(jìn)行干預(yù)治療后,提高了急診救治的效果,緩解了患者的疼痛。兩組患者干預(yù)前后SAS、SDS評(píng)分均明顯降低,且觀察組患者干預(yù)后的SAS、SDS評(píng)分較對(duì)照組明顯要低,觀察組家屬的滿意度比對(duì)照組明顯要高,P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明急診救治模式的護(hù)理干預(yù)對(duì)心絞痛患者的負(fù)面情緒起到了良好的調(diào)節(jié)作用,提高了患者家屬對(duì)護(hù)理的滿意度。

在pH 7.5,40 ℃的條件下,分別加入5 mmol/L的Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Zn2+、Cu2+、Fe2+、Fe3+,對(duì)不同金屬離子對(duì)粗酶液的影響進(jìn)行測定,對(duì)照組為不加金屬離子組。

在40、45、50、55 ℃的條件下,分別對(duì)粗酶液處理5、15、30、60、90、120 min,研究粗酶液在不同溫度下的熱穩(wěn)定性。

1.2.9 褐藻降解效果測定

取新鮮海帶和馬尾藻,在75%的乙醇中浸泡消毒10 min,用無菌水反復(fù)清洗至無乙醇味。分別在100 mL發(fā)酵培養(yǎng)基中加入0.5 g海帶和馬尾藻,在最適菌株生長條件下(加入具體條件)培養(yǎng)72 h,用100目濾網(wǎng)過濾處理后的樣品,取殘?jiān)?干燥,測定海帶和馬尾藻的干重變化。對(duì)照組分別為未處理組和人工海水處理組。

2 結(jié)果與分析

2.1 產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株的篩選

從20個(gè)單齒螺樣品中共篩選得到165株生長狀況良好且在平板上形成明顯凹陷透明圈的菌株,通過對(duì)其透明圈直徑與菌落直徑的比值(D/d)的比較,篩選出20株D/d>6的目標(biāo)菌株進(jìn)行復(fù)篩,在3次純化后篩選出活性穩(wěn)定的12株菌株進(jìn)行單獨(dú)點(diǎn)接和粗酶活力測定。如圖1所示,菌株ML17的D/d值最大同時(shí)粗酶活力最高(表1)。

圖1 菌株ML17在以海藻酸鈉為唯一碳源培養(yǎng)平板上的透明圈情況

表1 單齒螺腸道來源的不同菌株的活性比較

2.2 菌種的鑒定

將菌株ML17在添加海藻酸鈉唯一碳源的2216E培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h,菌落呈白色,不透明,菌落突起,濕潤,邊緣光滑,有光澤,菌落直徑為0.6～0.8 mm,培養(yǎng)基有明顯凹陷圈和透明圈,通過光學(xué)顯微鏡下觀察,革蘭氏染色呈G-,菌體呈近球狀。掃描電子顯微鏡30 000倍觀察其細(xì)胞形態(tài)如圖2所示,菌體呈短桿狀或橢圓狀,兩端鈍圓。

圖2 掃描電子顯微鏡觀察菌株ML17細(xì)胞形態(tài)(30 000×)

通過分子生物學(xué)手段,測定菌株ML17的16S rDNA序列為1 452 bp,通過BLAST序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)其16S rDNA與海生弧菌Vibriomaritimusstrain KP37A1的相似性達(dá)到99.29%。依據(jù)16S rRNA序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹聚類分析(圖3),并結(jié)合菌株的形態(tài)學(xué)特征,鑒定該菌為弧菌屬菌株,并命名為Vibriosp.ML17,將該菌株保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心,保藏編號(hào)為CGMCC No.20377。

圖3 菌株ML17的系統(tǒng)發(fā)育樹

副溶血性弧菌等一些具有溶血致病性的菌株會(huì)在我妻氏血瓊脂平板上出現(xiàn)β溶血現(xiàn)象,形成透明溶血圈,這一現(xiàn)象即神奈川現(xiàn)象(Kanagawa phenomenon,KP)。為了確定Vibriosp. ML17是否也會(huì)存在溶血性安全隱患,本研究通過我妻氏血瓊脂平板對(duì)Vibriosp. ML17進(jìn)行培養(yǎng)分析。實(shí)驗(yàn)中未觀察到β溶血現(xiàn)象的發(fā)生,初步表明Vibriosp. ML17沒有溶血致病性,具有較好的安全性。

2.3 菌種生長條件優(yōu)化

對(duì)不同碳源、氮源、生長溫度、pH、NaCl濃度的生長條件下的相對(duì)生物量和相對(duì)酶活力進(jìn)行測定。在質(zhì)量濃度均為5 g/L的海藻酸鈉、葡萄糖、蔗糖、淀粉、木糖5種不同的碳源條件下,將Vibriosp. ML17在30 ℃培養(yǎng)12 h,海藻酸鈉是Vibriosp.ML17的生長和產(chǎn)酶的最佳碳源,但基本無法利用木糖作為碳源(圖4-a)。而在質(zhì)量濃度均為5 g/L的酵母提取物、胰蛋白胨、(NH4)2SO4、NH4Cl 四種不同的氮源條件下,Vibriosp. ML17對(duì)復(fù)合氮源的利用率要優(yōu)于單一的無機(jī)氮源,其中在胰蛋白胨的條件下生長和產(chǎn)酶最佳(圖4-b)。

在15、20、25、30、35、40 ℃不同溫度的條件下,Vibriosp.ML17在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)12 h后,結(jié)果顯示(圖4-c)：Vibriosp.ML17在30 ℃生長能力和產(chǎn)酶量最佳。菌株超過30 ℃時(shí)生長能力會(huì)迅速下降,在40 ℃時(shí)基本已無法生長。將Vibriosp. ML17分別置于pH 5、6、7、8、9的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)12 h后,結(jié)果顯示(圖4-d),Vibriosp.ML17在pH 7的條件下酶活力最高,而在pH 8時(shí)生長狀態(tài)最佳。在pH 5、6、9的條件下菌株生長狀態(tài)和產(chǎn)酶量均較低。由于Vibriosp. ML17來源于海洋生物體內(nèi),因此在含NaCl的條件下可能有利于其生長,對(duì)Vibriosp.ML17在含NaCl 10、20、30、40、50、60 g/L的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)12 h后,結(jié)果顯示(圖4-e)：Vibriosp. ML17在30 g/L的NaCl質(zhì)量濃度條件下生長狀態(tài)和產(chǎn)酶量達(dá)到最佳。當(dāng)NaCl質(zhì)量濃度達(dá)到60 g/L時(shí)菌株基本無法生長。

a-碳源；b-氮源；c-溫度；d-pH；e-NaCl質(zhì)量濃度

2.4 菌株生長及產(chǎn)酶情況

通過對(duì)Vibriosp.ML17的生長曲線及產(chǎn)酶曲線的分析表明,在最適生長條件下,菌株在10 h即可達(dá)到平臺(tái)期,在14 h達(dá)到最高產(chǎn)酶量(圖5)。這一結(jié)果證明Vibriosp.ML17具有較快的生長速度,發(fā)酵周期短,有利于工業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用。

圖5 Vibrio sp.ML17的生長曲線和產(chǎn)酶曲線

2.5 褐藻膠裂解酶酶學(xué)性質(zhì)分析

2.5.1 褐藻膠裂解酶的最適反應(yīng)溫度和熱穩(wěn)定性

對(duì)不同溫度下Vibriosp.M17所產(chǎn)褐藻膠裂解酶的活性測定結(jié)果顯示(圖6-a)：在25～40 ℃時(shí),酶活力逐漸上升,40 ℃達(dá)到最大值,在45和50 ℃仍能保持90%和70%以上活性,從50 ℃之后開始迅速下降,60 ℃基本失活。將粗酶液在40、45、50、55 ℃分別處理5、15、30、60、90、120 min后測定活性,發(fā)現(xiàn)粗酶液在40和45 ℃具有良好的熱穩(wěn)定性,如圖6-b所示。

圖6 褐藻膠裂解酶最適反應(yīng)溫度與熱穩(wěn)定性

在40和45 ℃條件下處理60 min后活性分別剩余87.4%和66.4%,處理120 min后活性分別剩余65.9%和32.7%。

2.5.2 褐藻膠裂解酶的最適pH

對(duì)不同pH環(huán)境下Vibriosp. M17所產(chǎn)褐藻膠裂解酶活性的檢測結(jié)果表明(圖7),該菌株所產(chǎn)褐藻膠裂解酶最適pH值為7.5,在pH 6.5～8.0的偏酸和偏堿條件下均能保持80%以上的活性,過酸和過堿條件都會(huì)導(dǎo)致酶活力迅速下降。

圖7 褐藻膠裂解酶最適反應(yīng)pH

2.5.3 金屬離子對(duì)褐藻膠裂解酶的影響

對(duì)多種金屬離子的作用研究如圖8所示。Na+、K+、Ca2+對(duì)酶活力都有促進(jìn)作用,其中Na+、Ca2+最為顯著,分別可以提高39.4%和32.6%。Cu2+、Zn2+、Fe2+、Fe3+有抑制作用,其中Zn2+、Cu2+、Fe2+可完全抑制活性。Mg2+對(duì)酶活力無明顯影響。由于褐藻膠裂解酶主要來源于海洋當(dāng)中,所以海水中含量較高的Na+、K+、Ca2+等離子都會(huì)對(duì)其活性產(chǎn)生促進(jìn)效果。

圖8 不同金屬離子對(duì)褐藻膠裂解酶的影響

2.6 菌株Vibrio sp.ML17對(duì)褐藻屬植物的降解作用

海帶和馬尾藻均屬于典型的褐藻門植物,褐藻膠是其細(xì)胞壁的主要成分之一。通過對(duì)2種不同綱的褐藻降解作用的測定,結(jié)果顯示(圖9),與未經(jīng)處理或僅用單純?nèi)斯ずＫ幚砗蟮臉悠方M相比,經(jīng)Vibriosp. ML17處理72 h后,海帶和馬尾藻干重分別減少了44.0%和38.9%,證明Vibriosp. ML17可有效實(shí)現(xiàn)對(duì)褐藻植物的降解作用。

圖9 褐藻膠裂解酶對(duì)不同褐藻的降解效果

3 討論

與其他來源的褐藻膠裂解酶相比,來源于微生物的褐藻膠裂解酶存在多種優(yōu)勢,如酶產(chǎn)量高、相對(duì)酶活力較高、專一性強(qiáng)、反應(yīng)條件溫和等[16]。在之前的報(bào)道中,MICHIHIRO等[17]通過改變海螺和海兔的飼料構(gòu)成,在腸道內(nèi)篩選得到了多種可降解褐藻膠的菌株。本研究從生活在我國南北潮間帶的單齒螺的腸道中發(fā)現(xiàn)了1株具有較高褐藻膠裂解酶活性的弧菌Vibriosp.ML17。受單齒螺長期的生存高鹽海洋環(huán)境影響,Vibriosp.ML17對(duì)抵御不利環(huán)境具有一定優(yōu)勢。

目前已報(bào)道的大多數(shù)產(chǎn)褐藻膠裂解酶的菌株,由于活力低、發(fā)酵周期長等不足[18],導(dǎo)致其無法應(yīng)用于實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)中,例如源自Hydrogenopahagasp.的褐藻膠裂解酶在40 ℃處理30 min后只能殘留10%活性[19],源自皺紋盤鮑的海洋弧菌褐藻膠裂解酶在40 ℃處理2 h后活性低于40%[20]。而本研究中,Vibriosp.ML17的褐藻膠裂解酶活性具有較好的熱穩(wěn)定性,在40和45 ℃處理2 h后相對(duì)活力仍能保持65.9%和32.7%。同時(shí),不同的金屬離子也會(huì)對(duì)褐藻膠裂解酶的活性產(chǎn)生影響,研究表明Na+、K+對(duì)本研究中的褐藻膠裂解酶酶活性有促進(jìn)作用,且Na+產(chǎn)生影響最大,這一結(jié)果與李云濤等[20]研究中褐藻膠裂解酶性質(zhì)相似,這可能與相關(guān)金屬離子參與褐藻膠裂解酶催化位點(diǎn)的結(jié)合及原本的生存環(huán)境有關(guān)[21]。

有文獻(xiàn)報(bào)道部分弧菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域有一定的生物防治作用,可改良水質(zhì),防控疾病等。李學(xué)智[22]通過蛭弧菌在草魚池塘的應(yīng)用性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其對(duì)草魚爛鰓病、腸炎病等細(xì)菌性病害有一定的預(yù)防作用。同時(shí),姚艷艷等[23]還通過無溶血性及具有蛋白酶和淀粉酶活性推斷其從鮑魚腸道篩得的弧菌屬菌株YY7為潛在的益生菌。之前研究表明弧菌的致病力與毒力因子溶血素相關(guān)[24],而本研究篩選得到的菌株并無β溶血現(xiàn)象發(fā)生,不具有潛在致病性,可用于水產(chǎn)養(yǎng)殖等方面。

4 結(jié)論

本文以海藻酸鈉為唯一碳源對(duì)海洋螺類單齒螺的腸道菌進(jìn)行篩選,獲得1株具有較高褐藻膠裂解酶活性的菌株Vibriosp.ML17(CGMCC NO.20377)。該菌株具有生長發(fā)酵周期短、菌種安全的特點(diǎn),同時(shí)其分泌的胞外褐藻膠裂解酶具有較高的熱穩(wěn)定性,應(yīng)用試驗(yàn)表明其可以對(duì)褐藻進(jìn)行有效的降解,在72 h對(duì)海帶和馬尾藻的降解率分別達(dá)44.0%和38.9%,綜合上述研究表明Vibriosp.ML17在褐藻寡糖制備、水產(chǎn)養(yǎng)殖中的褐藻防治去除等領(lǐng)域具有良好工業(yè)應(yīng)用前景。