杜卓，葉泉英，林潔誠，鄺翠瓊，莫玉芳，余小姚，李海儀，郭嘉亮

(1.佛山科學技術學院醫(yī)學院藥學系，佛山 528000；2.廣東省佛山市第一人民醫(yī)院藥學部，佛山 528000)

中藥材丁香是桃金娘科植物丁香樹的干燥花蕾，丁香花蕾被水蒸汽蒸餾出無色或淡黃色揮發(fā)油即為丁香油。丁香油主要活性成分為丁香酚[1]，具有抗氧化、抗缺氧、抗血栓形成、鎮(zhèn)痛等多方面作用[2-6]。冠心病是由冠狀動脈粥樣硬化使血管腔阻塞，導致心肌缺血缺氧而引起的臨床常見心臟疾病[7]。丁香酚具有針對冠心病的抗血栓止痛等藥理活性，可將其制備成快速釋放的丁香酚滴丸[8]。本研究通過正交設計優(yōu)選抗冠心病丁香酚滴丸的最佳制備工藝，并對滴丸產(chǎn)品的外觀性狀、質量差異度、丁香酚含量等進行評價，為進一步開展藥理藥效實驗奠定較好的制劑研究基礎。

1 試劑與儀器

單硬脂酸甘油酯(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20171218)；Polyethylene glycol 4000(PEG4000，廣東光華化學廠有限公司，批號：20090420)；Polyethylene glycol 6000(PEG6000，廣州市醫(yī)藥公司化學試劑玻璃儀器批發(fā)部，批號：990825)；丁香酚(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20180622，含量：≥98.5%)；無水乙醇(分析純，廣東光華科技股份有限公司，批號：2016220)，80%乙醇(用無水乙醇制備)；二甲基硅油(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20181010)；液體石蠟(廣州化學試劑廠，化學純，批號：200304043)；輕質液體石蠟(江西德成制藥有限公司，批號：050801)。

Panasonic制冰機[松下冷鏈(大連)有限公司，SIM-F140AY65-PC型，編號：850021]；Tankpro純水機(浙江銘泉水暖設備有限公司，RO-2236P型，編號：1101003150)；eppendorf移液槍(德國艾爾德股份公司)；電子天平[感量：0.1 mg，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司，AL204型]；電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科學儀器有限公司，HWS-12)；片劑硬度儀(上海黃海藥檢儀器有限公司，YPD-30A型)；片劑脆碎度測定儀(上海黃海藥檢儀器有限公司，CJY-300D型)；醫(yī)用低溫箱(中科美菱低溫科技股份有限公司，編號：170833520)；醫(yī)用冷藏箱(中科美菱低溫科技股份有限公司，編號：170834423)

2 方法與結果

2.1制備方法 將以處方配比的基質置于75 ℃水浴中加熱至基質熔化，再加入處方量的丁香酚，攪拌均勻。將所得藥液以正交實驗安排表中所示藥液溫度在水浴中保溫，用1000 μL移液器吸取藥液后，以每分鐘30滴的滴速滴入冷凝液。待滴丸冷凝靜置后收集藥丸并瀝干。用濾紙吸去滴丸表面冷凝液，藥丸自然晾干，過夜即得丁香酚滴丸。

2.2實驗條件篩選方法 根據(jù)預實驗數(shù)據(jù)，采用80 ℃藥液溫度，13 cm冷凝液下落距離，6 cm藥液滴距作為實驗條件。依次進行無藥物的基質篩選，藥物含量的初步篩選，添加藥物基質篩選，冷凝液篩選，冷凝溫度篩選。

2.2.1基質篩選方法 水溶性基質：以1：0，2：1，1：1，1：2，1：3，1：4，0：1的比例混合PEG4000和PEG6000作為基質[9]。非水溶性基質：以單硬脂酸甘油酯為基質，單因素改變基量制備滴丸。以二甲基硅油為冷凝液，5 ℃為冷凝溫度，將基質的總量固定為2.4 g，調整各個基質的用量，結果見表1。

表1 不加丁香酚的基質用量篩選情況

處方編號8是使用單硬脂酸甘油酯作為基質，基質冷凝速度極快。滴制過程中已有部分基質凝固，且滴入后浮于冷凝液的表面不沉降，無法形成滴丸。處方編號5，6，7這3個處方制備的丁香油滴丸圓整度較差，而處方編號1，2，3三個處方制備滴丸硬度不足。綜合考慮選擇處方編號4基質配比(PEG4000：PEG6000=1：2)進行下一步藥物含量的初步篩選。

2.2.2藥物含量百分比初步篩選方法 藥物丁香酚占總量的百分比設置為5%～50%六個梯度，篩選數(shù)據(jù)結果見表2。

表2 丁香酚不同含量的初步篩選情況

由表2可知：加入丁香酚后基質黏度下降且所制備滴丸硬度下降，擬提高PEG6000所占比例，以便在丁香酚10%含量的制備滴丸能有較好圓整度及硬度。采用丁香酚含量10%，選擇表1中處方4，5，6，7進行添加藥物的基質篩選，實驗表明：增加PEG6000比例而所得滴丸硬度仍較小，且PEG4000：PEG6000比例為1：4時滴丸成型開始降低。故丁香酚含量應控制在10%以下，即選擇表1中處方4，5，6，且丁香酚含量控制為5%，進行添加藥物基質篩選，結果見表3。

表3 添加丁香酚(5%)后基質用量篩選情況

由表3可知：處方4，5所制滴丸均能得到好圓整度，并且處方5所得滴丸硬度較大。因此選擇丁香酚5%含量，且基質PEG4000：PEG6000配比為1：3時制成滴丸為較佳比例。

2.2.3冷凝液篩選方法 以PEG4000：PEG6000為1：3，丁香酚含量為5%待滴，以二甲基硅油、液體石蠟、輕質液體石蠟為冷凝液分別制備滴丸，進行不同冷凝液篩選，結果見表4。

表4 冷凝液篩選情況

由表4結果可知，3種冷凝液所制備滴丸硬度無明顯差異，而以液體石蠟為冷凝液所得滴丸的圓整度最好且無拖尾，沉降速度合適，故選擇液體石蠟為丁香酚滴丸的冷凝液。

2.2.4冷凝溫度篩選方法 以液體石蠟為冷凝液，選擇3，5 ，7 ℃為冷凝液溫度[10]，采用單因素法篩選冷凝液溫度。結果見表5。

表5 冷凝溫度篩選情況

由表5結果可知，冷凝溫度在3 ℃和5 ℃時滴丸成型好，故以3 ℃～5 ℃為冷凝溫度。

2.3正交實驗篩選制備工藝的方法 采用L9(34)正交實驗設計[10-11]方法，選擇藥物占總量的百分比、藥液溫度、冷凝液的下落距離、藥液滴距4個因素。優(yōu)選這些因素最佳水平。以滴丸的圓整度、質量差異和硬度大小為指標，對滴丸的制備工藝進行篩選。因素水平見表6、正交試驗安排見表7。

表6 正交實驗因素水平表

正交實驗中將滴丸成形情況、滴丸重量差異及硬度的大小，綜合得分作為評價標準。

滴丸成形情況評分[10]標準為：有氣孔(1分)、有拖尾(2分)、橢圓形或扁圓形(3分)、表面粗糙不光潔(4分)、圓整度良好(5分)。共分成5個級別，分數(shù)越高即表明滴丸的成形圓整度的情況越好。

表7 滴丸制備正交實驗安排表

質量差異評分標準：由于正交制備滴丸的質量差異均未超出2015年版《中華人民共和國藥典》對滴丸的質量差異規(guī)定，故質量差異的評分以相對標準偏差(Relative standard deviation，RSD) 值為標準。RSD值越小，即差異越小，即分數(shù)越高。正交制備滴丸質量差異的具體值見表8。

表8 不同工藝丁香酚滴丸質量差異和硬度大小

質量差異設置總分為5分，即質量差異RSD在2%以下評為5分，2%～3%評為4分，3%～4%評為3分，4%～5%評為2分，5%以上評為1分。硬度大小評分標準：正交制備滴丸硬度大小的具體值見表8。

硬度大小設置總分為5分，即硬度大小以2.0 kg及以上評為5分，1.7～1.9 kg評為4分，1.4～1.6 kg評為3分，1.1～1.3 kg評為2分，1.0 kg及以下評為1分。

綜合得分：以滴丸成型情況，硬度差異，質量差異三者評分相加的總分作為綜合得分。結果見表9，方差分析見表10。

由表9和表10可知：在本正交實驗設定各因素水平中，影響制作滴丸的最大因素為冷凝液的下落距離，其次為藥物占總量的百分比、藥液溫度，而藥液滴距對滴丸制作影響最小。四個因素的極差值R：冷凝液的下落距離>藥物占總量的百分比>藥液溫度>藥液滴距。各因素對滴丸制作影響順序為：C>A>B>D。在不考慮因素間的交互作用情況下，綜合工藝篩選制作丁香酚滴丸的最優(yōu)工藝為A3B2C3D2。即藥物占總量的百分比為2.5%，藥液溫度為80 ℃，冷凝液下落距離為18 cm，藥液滴距為6 cm。

2.4質量評價方法

2.4.1最優(yōu)工藝制備供試品 按以上優(yōu)選出工藝來制備丁香酚滴丸，精密稱取滴丸基質19.5 070 g(PEG4000：PEG6000=1：3)置于75 ℃中水浴加熱至熔化。加入0.5 004 g丁香酚混勻后，置于80 ℃水浴中，用1000 μL移液槍移取藥液。以6 cm的藥液滴距滴入5 ℃的冷凝液，冷凝液下落距離為18 cm。待滴丸冷凝靜置后，收集滴丸瀝干。用濾紙吸去滴丸表面的冷凝液，滴丸自然晾干一晚，即得供試品丁香酚滴丸1000粒。

2.4.2外觀檢查 由最優(yōu)工藝所制備的丁香酚滴丸外觀完整光潔，硬度適宜且一致，有良好的圓整度，無拖尾或氣孔，符合《中華人民共和國藥典》2015年版對滴丸的外觀要求。

2.4.3質量差異檢查 從最優(yōu)工藝所制備的丁香酚滴丸中隨機取20粒。精密稱定總質量，求得平均丸重，然后精確稱重每粒滴丸，計算RSD值。

實驗結果：20粒丁香酚滴丸總重量為0.2 938 g，平均粒重為0.01 469 g，RSD為2.71%。根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015年版對低于0.03 g滴丸質量差異限度要求(±15%)，最佳工藝制備丁香酚滴丸的質量差異符合《中華人民共和國藥典》2015年版的要求。

2.4.4硬度檢查及脆碎度檢查 從最佳工藝制備丁香酚滴丸中隨機取6粒，使用片劑硬度測試儀分別測定每丸硬度。

實驗結果：該滴丸硬度平均值為2.0 kg，RSD值為2.63%，故該滴丸硬度差異小。

從最優(yōu)處方制備的丁香酚滴丸中隨機取3份(每份10粒)，精密稱每份總重。使用片劑脆碎度儀測定每份滴丸的脆碎度：設置脆碎度測試參數(shù)為100 r·(4 min)-1進行，待測定結束轉動后，再取出未破損的滴丸精密稱重。平行測定3份。實驗結果：用片劑脆碎度儀測試丁香酚滴丸，3份測試樣品減重均為零。

3 討論

在滴丸基質篩選實驗中，若基質較為黏稠則滴制獲得滴丸的成型情況較差。不添加丁香酚的空白基質即便滿足滴丸成型的硬度及圓整度，再加入丁香酚則出現(xiàn)藥液黏稠狀態(tài)明顯降低。雖藥液的黏度下降有利于改善滴丸成型，但所制得的含藥滴丸的硬度顯著下降。制備丁香酚滴丸藥物含量應控制在10%以下，故正交實驗中設置2.5%、5%、7.5%三個水平。

升高溫度能使滴丸基質的黏度降低，有利提高滴丸圓整度。而主藥丁香酚具有揮發(fā)性和易氧化性，高溫對丁香酚損耗量就大，故不宜采用升溫方式降低藥液黏度。在制備滴丸過程中，可采用先將空白基質加熱到規(guī)定溫度，而后再加入丁香酚方法縮短藥液受熱時間，從而減少藥物損失。

表9 滴丸工藝篩選正交實驗結果

表10 綜合得分方差分析表

制備滴丸中曾采用加冰塊的冰水浴方式控制冷凝液溫度，發(fā)現(xiàn)冰水浴溫度下降較慢，且長時間控制3℃～5 ℃困難。改為提前將冷凝液放置冷藏柜過夜，滴制時再臨時取出使用，這樣不僅使用方便，且保持低溫的時間較長。

在《中華人民共和國藥典》2015年版中對滴丸劑沒有規(guī)定硬度和脆碎度，而實際生產(chǎn)運輸及貯存滴丸中，硬度和脆碎度對保證臨床用藥準確性等方面均有重要的指導意義。本研究采用片劑硬度測試儀與片劑脆碎度測定儀測試最佳工藝下制得的滴丸，測得滴丸的硬度數(shù)值RSD值小且滴丸的脆碎度為零。這將為下一步開展丁香酚滴丸的藥理藥效實驗奠定較好制劑學基礎。