李國(guó)坤，董嘉華，肖健海，白思曉，陳驍熠，蘇立杰

（廣州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，廣東廣州 511436）

慢性便秘（Chronic Constipation, CC）是臨床最常見(jiàn)的胃腸道病癥之一，表現(xiàn)為持續(xù)2周或更長(zhǎng)時(shí)間排便困難，在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率為15%[1,2]，我國(guó)的便秘發(fā)病率大概在3%～17%[3]。慢傳輸型便秘（Slow Transit Constipation，STC）是慢性便秘的一種主要類型，其特點(diǎn)是腸道運(yùn)輸時(shí)間顯著增加、腸道運(yùn)動(dòng)功能障礙[4]。大部分STC患者會(huì)有惡心、腹脹、食欲不振、情緒低落等癥狀，嚴(yán)重者可能還出現(xiàn)結(jié)腸癌、直腸癌等病癥[5]。導(dǎo)致STC的結(jié)腸動(dòng)力障礙的潛在機(jī)制尚不清楚。大量研究表明，STC患者會(huì)發(fā)生多種生理變化，包括結(jié)腸Cajal的間質(zhì)細(xì)胞（Interstitial cells of Cajals，ICC）減少、腸神經(jīng)系統(tǒng)異常、腸道平滑肌收縮功能異常等[6]?，F(xiàn)有的治療方法主要有瀉藥、抗炎藥等藥物治療和結(jié)腸切除術(shù)與回腸直腸吻合術(shù)等手術(shù)治療，但都有著嚴(yán)重的副作用和不良反應(yīng)[7]。

腸道菌群是一個(gè)復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)，在維持宿主的健康和生理功能方面起著關(guān)鍵作用[8]。根據(jù)近些年的研究，STC患者的腸道菌群生態(tài)系統(tǒng)與健康人群相比均出現(xiàn)不同程度的破壞。其中STC患者腸道菌群的組成相較于健康人群出現(xiàn)了較大的不同：糞便中的雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌、腸桿菌等出現(xiàn)了異常變化[9]。在動(dòng)物研究中發(fā)現(xiàn)，可以通過(guò)增加腸道內(nèi)有益菌、減少腸道內(nèi)有害菌來(lái)改善STC小鼠的便秘情況[10-14]。這提示我們可以通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群來(lái)干預(yù)STC[15,16]。

代糖是低熱量的甜味劑，具有甜度高、熱量低、不易發(fā)生齲齒、安全性高等特性。研究不同代糖的功能特性是如今食品研究的熱點(diǎn)之一[17]。一種代糖常存在功能單一、口感不好等缺陷，因此市面上常采用多種代糖復(fù)合。本研究所采用的復(fù)合代糖由赤蘚糖醇、菊粉、甜菊糖苷、羅漢果苷組成。研究表明，菊粉、羅漢果苷具有潤(rùn)腸通便效果[18]，菊粉可有效的改善腸道菌群紊亂[19-22]，甜菊糖苷可促進(jìn)雙歧桿菌和乳酸桿菌生長(zhǎng)[23]。這提示復(fù)合代糖可能有通便作用和調(diào)節(jié)腸道菌群作用。所以本研究擬通過(guò)小鼠實(shí)驗(yàn)和菌群體外增殖實(shí)驗(yàn)，探究該復(fù)合代糖是否能顯著改善小鼠的便秘情況和探究其對(duì)小鼠腸道菌群的影響。本研究探究復(fù)合代糖的通便效果及其對(duì)腸道菌群的作用，為STC患者的治療和功能型食品的開(kāi)發(fā)提供了新的思路和方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

復(fù)合代糖，廣州萊品健康科技有限公司（產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：GB26687；生產(chǎn)許可證編號(hào)：SC1244419014023）；阿拉伯樹(shù)膠，天津市福晨化學(xué)試劑廠；酚酞，亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司；羧甲基纖維素鈉，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；鹽酸洛哌丁胺膠囊，西安楊森制藥有限公司；氯化鈉，無(wú)錫市亞泰聯(lián)合化工有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SPX-250B微機(jī)生化培養(yǎng)箱，上海悅豐儀器儀表有限公司；FE20pH計(jì)，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；T6773電子天平，普利賽斯科學(xué)儀器有限公司（瑞士）；ZHJH-C1106B超凈工作臺(tái)，上海智城分析儀器制造有限公司；MULTISKAN GO全自動(dòng)酶標(biāo)儀，廣東丹利科技有限公司；MLS-3750高壓蒸汽滅菌機(jī)，日本三洋；純水機(jī)，南京貝登醫(yī)療股份有限公司；DZF-6050真空干燥，上海-恒科學(xué)儀器有限公司。

1.3 動(dòng)物及動(dòng)物糞便

SPF級(jí)Balb/c小鼠，雄性，體質(zhì)量22±2 g，合格證號(hào)：NO. 44007200049595，許可證號(hào)：SCXK(粵)2013-0002，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 試劑的配制

取9 g氯化鈉粉末溶于1 L純水，高溫滅菌，即得0.9%的生理鹽水。

取32 mg洛哌丁胺粉末溶于32 mL生理鹽水，配成1 mg/mL的洛哌丁胺溶液。

取20 mg酚酞粉末溶于4 mL生理鹽水，配成5 mg/mL的酚酞溶液。

分別取0.25 g、0.45 g、0.675 g、0.9 g、1.125 g復(fù)合代糖溶于3 mL生理鹽水中，分別配成0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL復(fù)合代糖溶液。分別作為小鼠G1、G2、G3、G4、G5組的干預(yù)試劑。

取10 g阿拉伯樹(shù)膠溶于100 mL純水中，煮沸至透明后，加入5 g碳粉，混勻再煮沸即可得。

1.4.2 小鼠灌胃實(shí)驗(yàn)

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后隨機(jī)分成8組，每組8只，分別為空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和復(fù)合代糖干預(yù)G1組（0.75 g/kg·BW）、G2組（1.5 g/kg·BW）、G3組（2.25 g/kg·BW）、G4組（3 g/kg·BW）、G5組（3.75 g/kg·BW）。根據(jù)各組小鼠體重按量給藥，模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和G1組（0.75 g/kg·BW）、G2組（1.5 g/kg·BW）、G3組（2.25 g/kg·BW）、G4組（3 g/kg·BW）、G5組（3.75 g/kg·BW）分別給予10 mg/kg·BW的鹽酸洛哌丁胺溶液，空白對(duì)照組給予相應(yīng)的生理鹽水。0.5 h后，按照體重給予空白對(duì)照組、模型組生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組給予50 mg/kg·BW的酚酞溶液，復(fù)合代糖組給予相應(yīng)濃度的復(fù)合代糖。按時(shí)對(duì)其進(jìn)行14 d的灌胃實(shí)驗(yàn)。

1.4.3 小鼠黑便實(shí)驗(yàn)

灌胃實(shí)驗(yàn)進(jìn)行14 d后，各組小鼠禁食不禁水12 h?？瞻讓?duì)照組灌胃給予生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組、模型組和復(fù)合代糖組灌胃給予10 mg/kg·BW的鹽酸洛哌丁胺溶液。在0.5 h后，按照體重給予空白對(duì)照組、模型組生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組給予50 mg/kg·BW的酚酞溶液，復(fù)合代糖組給予不同濃度的代糖溶液，并給予0.2 mL的墨汁。從每只小鼠的墨汁灌胃時(shí)間開(kāi)始，記錄每只動(dòng)物首粒排黑便時(shí)間、在6 h內(nèi)排糞便粒數(shù)和糞便重量。

1.4.4 墨汁推進(jìn)率實(shí)驗(yàn)

黑便實(shí)驗(yàn)后，各組小鼠禁食不禁水12 h。陽(yáng)性對(duì)照組、模型組和復(fù)合代糖組給予0.2 g/mL的鹽酸洛哌丁胺溶液，空白對(duì)照組給予蒸餾水灌胃。給予洛哌丁胺0.5 h后，按照體重給予空白對(duì)照組、模型組生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組給予3 mg/mL的酚酞溶液，復(fù)合代糖組給予不同濃度的代糖溶液，并給予0.2 mL的墨汁。在每只小鼠灌墨汁30 min后立即脫頸椎處死，用鑷子剪開(kāi)腹腔，將幽門(mén)至盲腸的腸管剪取，置于潔凈實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，將其拉成直線測(cè)量長(zhǎng)度，記為小腸總長(zhǎng)度，將幽門(mén)至墨汁前沿處記為墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度。按下列公式計(jì)算墨汁推進(jìn)率：

墨汁推進(jìn)率/%=墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度（cm）÷小腸總長(zhǎng)度（cm）×100%

1.5 菌群體外增殖實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 培養(yǎng)基的制備

分別用TPY瓊脂培養(yǎng)基、EBM培養(yǎng)基、BEA瓊脂培養(yǎng)基、BBL瓊脂培養(yǎng)基作為乳酸桿菌、腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌的選擇培養(yǎng)基。稱取復(fù)合代糖10 g于離心管中，加入10 mL水，混合均勻，紫外線照射30 min滅菌，即得1 g/mL的代糖溶液。用1 g/mL的代糖溶液和營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基配制成0.075、0.15、0.225、0.3、0.375 g/mL的代糖培養(yǎng)基。

1.5.2 試驗(yàn)用菌種分離

準(zhǔn)備一個(gè)5 mL無(wú)菌EP管，使用無(wú)菌棉簽接取小鼠排出的新鮮糞便，轉(zhuǎn)入管內(nèi)稱重，記錄下糞便的質(zhì)量為m。加入99倍m的無(wú)菌生理鹽水，與小鼠的糞便混勻。得10-2糞便稀釋液，依次用生理鹽水稀釋成10-3、10-4和10-5。將濃度為10-3、10-4和10-5的糞便稀釋液涂布于四種不同的選擇培養(yǎng)基上，放入37 ℃的微生物培養(yǎng)箱里，培養(yǎng)的時(shí)間為24～48 h。參考《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》第九版，在單菌落明顯以及菌落數(shù)在20～30 CFU的平板里進(jìn)行菌種鑒定和分離。將密度為108 CFU/mL的目標(biāo)菌接種在0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL的代糖培養(yǎng)基上，37 ℃下培養(yǎng)24 h。在600 nm的波長(zhǎng)下，每2 h測(cè)定一次菌液的OD值。

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均獨(dú)立平行測(cè)定，數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，采用SPSS 24.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，通過(guò)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和單因素方差檢驗(yàn)做顯著性分析，p＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合代糖對(duì)小鼠體重的影響

將實(shí)驗(yàn)前各組小鼠的體重與模型組進(jìn)行比較，如表1所示，沒(méi)有出現(xiàn)顯著差異（p＞0.05），說(shuō)明實(shí)驗(yàn)前小鼠的分組具有一定的科學(xué)合理性。比較實(shí)驗(yàn)后各組小鼠與空白組的體重，體重沒(méi)有出現(xiàn)顯著的差異（p＞0.05），說(shuō)明灌胃10 mg/kg·BW洛哌丁胺14 d對(duì)小鼠來(lái)說(shuō)不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。姚一博等在洛哌丁胺給藥劑量和造模時(shí)間對(duì)小鼠慢傳輸型便秘模型建立的研究中，0.5 mg/kg·BW～50 mg/kg·BW給藥濃度和3 d～14 d的造模時(shí)間都未出現(xiàn)小鼠體重下降的情況[24]。這也與Ren X和Li C等研究中洛哌丁胺對(duì)體重?zé)o太大影響的結(jié)果研究一致[10,12]。

表1 小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重Table 1 Weight of mice before and after the experiment

世界衛(wèi)生組織建議蔗糖的攝入量應(yīng)該在總熱量的10%以內(nèi)[25]，而美國(guó)醫(yī)學(xué)研究所建議蔗糖的能量占總熱量的比應(yīng)小于25%[26]。在美國(guó)2003～2006年的流行病學(xué)調(diào)查中，攝入蔗糖的占能比大于25%的人口達(dá)到了13%[27]；在南非，攝入蔗糖的占能比大于10%的人口超過(guò)了10%[28]。在瑞典，攝入蔗糖的占能比大于15%的人群超過(guò)了10.56%[29]。過(guò)量蔗糖攝入可能會(huì)導(dǎo)致齲齒、肥胖、2型糖尿病和心血管疾病等健康問(wèn)題[30,31]，因此尋找能夠代替蔗糖的功能性代糖是當(dāng)今食品研究的熱點(diǎn)之一。但一種代糖常存在功能單一、口感不好等缺陷，因此常采用多種代糖復(fù)合。本研究所用的復(fù)合代糖由赤蘚糖醇、菊粉、甜菊糖苷、羅漢果苷組成。赤蘚糖醇作為糖替代品廣泛用于各種食品和口腔護(hù)理產(chǎn)品中，具有抗糖尿病、降血糖作用、抗齲齒作用[32]；菊粉是一種可溶性膳食纖維，具有促進(jìn)消化，促進(jìn)脂質(zhì)代謝和維持葡萄糖和胰島素水平功效[33]；甜菊糖苷是從甜葉菊植物的葉中提取的一種天然甜味劑，在Ili? V的研究中，低劑量甜菊糖苷對(duì)糖尿病小鼠有著維持血糖的功效[34]；羅漢果苷是從羅漢果果實(shí)中分離出的天然化合物，具有通便、降血糖、抗炎等功效[35]。由此可知，由赤蘚糖醇、菊粉、甜菊糖苷、羅漢果苷混合的復(fù)合代糖可能會(huì)具有抗糖尿病、降血糖、通便、抗齲齒作用等功效。而在此次實(shí)驗(yàn)中，復(fù)合代糖干預(yù)組體重實(shí)驗(yàn)前后與空白組前后體重?zé)o顯著性差異（p＞0.05），說(shuō)明0.75 g/kg·BW、1.5 g/kg·BW、2.25 g/kg·BW、3 g/kg·BW、3.75 g/kg·BW劑量的復(fù)合代糖在灌胃14 d不會(huì)顯著地引起小鼠的體重變化。

2.2 小鼠便秘模型的建立結(jié)果

將實(shí)驗(yàn)后空白對(duì)照組和模型組的各排便指標(biāo)進(jìn)行比較，如表2所示，模型組的首粒黑便時(shí)間（156.63 min）相對(duì)于空白對(duì)照組（63.75 min）顯著增加（p＜0.05）；6 h排便粒數(shù)（11.75 n）相對(duì)于空白對(duì)照組（21.63 n）顯著減少（p＜0.05）；6 h糞便重量（0.19 g）相對(duì)于空白對(duì)照組（0.29 g）顯著減少（p＜0.05）；墨汁推進(jìn)率（38.45%）相對(duì)于空白對(duì)照組（70.58%）顯著減少（p＜0.05）。國(guó)內(nèi)外研究表明洛哌丁胺劑量在2 mg/kg·BW～20 mg/kg·BW、給藥時(shí)間在4 d～42 d均有成功建立小鼠便秘模型的案例[24,36]。根據(jù)小鼠便秘模型建立的判定：干預(yù)組首粒黑便時(shí)間、6 h排便粒數(shù)、6 h糞便重量、墨汁推進(jìn)率與空白組具有顯著性差異，可說(shuō)明該小鼠便秘模型成功建立[37,38]。所以可判定此次用10 mg/kg·BW的鹽酸洛哌丁胺溶液灌胃14 d的小鼠便秘模型成功建立。

表2 洛哌丁胺對(duì)小鼠各排便指標(biāo)的影響Table 2 Effects of loperamide on various defecation indexes in mice

2.3 復(fù)合代糖對(duì)小鼠小腸墨汁推進(jìn)率、首次黑便時(shí)間、排便粒數(shù)、6 h糞便重量的影響

比較各組與模型組的墨汁推進(jìn)率，如表3所示，五組復(fù)合代糖干預(yù)組的墨汁推進(jìn)率相對(duì)于模型組均顯著增加（p＜0.05）。其中代糖G3組的墨汁推進(jìn)率相對(duì)于模型組（38.45%）增加了49.41%，其次是代糖G5組增加了48.47%、代糖G4組增加了47.77%。將模型組與陽(yáng)性對(duì)照組、代糖各組的各排便指標(biāo)進(jìn)行比較，如表4所示，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性對(duì)照組和代糖各組的首粒黑便時(shí)間相對(duì)于模型組均顯著減少，其中代糖G5組的首粒黑便時(shí)間相對(duì)于模型組（156.63 min）減少了67.25 min，其次是代糖G3組減少了57.50 min、代糖G4組減少了50.25 min。比較各組與模型組的6 h排便粒數(shù)，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性對(duì)照組和代糖各組的6 h排便粒數(shù)相對(duì)于模型組均顯著增加，其中代糖G2組的6 h排便粒數(shù)相對(duì)于模型組（11.75 n）增加了9.38 n，其次是代糖G5組增加了8.75 n、代糖G1組增加了8.38 n。比較各組與模型組的6 h糞便重量，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性對(duì)照組和代糖各組的6 h糞便重量相對(duì)于模型組均顯著增加，其中代糖G5組的6 h糞便重量相對(duì)于模型組（0.19 g）增加了0.20 g，其次是代糖G1組增加了0.14 g、代糖G2組增加了0.12 g。

表3 復(fù)合代糖對(duì)便秘小鼠小腸推進(jìn)的影響Table 3 Effects of complex substitute sugar on intestinal propulsion in constipated mice

表4 復(fù)合代糖對(duì)小鼠各排便指標(biāo)的影響Table 4 Influence of complex substitute sugar on various defecation indexes in mice

根據(jù)保健食品的通便功能檢驗(yàn)方法：6 h排便粒數(shù)和6 h糞便重量任一項(xiàng)結(jié)果顯著，同時(shí)墨汁推進(jìn)率和首粒黑便時(shí)間任一項(xiàng)結(jié)果顯著，可判定該受試樣品對(duì)便秘小鼠具有通便功效[39]，所以可判定0.75 g/kg·BW、1.5 g/kg·BW、2.25 g/kg·BW、3 g/kg·BW、3.75 g/kg·BW劑量的復(fù)合代糖可顯著的改善小鼠的便秘情況，不同劑量復(fù)合代糖的通便效果無(wú)顯著的線性關(guān)系。比較五組復(fù)合代糖干預(yù)組通便結(jié)果，發(fā)現(xiàn)代糖G5組（3.75 g/kg·BW）的通便功效最為顯著，相對(duì)于模型組，墨汁推進(jìn)率增加了48.47%、首粒黑便時(shí)間減少了67.25 min、6 h排便粒數(shù)增加了8.75 n、6 h糞便重量增加了0.20 g。

菊粉是一種可溶性膳食纖維，在臨床研究中，每天食用12～20 g的菊粉可通過(guò)增加慢性便秘患者的排便頻率、降低糞便稠度有效地改善患者的病情[40-42]，而在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，1.0 g/kg·BW的菊粉未能有效地改善小鼠便秘情況，其陰性結(jié)果的原因可能是劑量太小[43]。羅漢果苷是羅漢果的主要成分，在陳瑤的研究中，300 mg/kg·BW、900 mg/kg·BW的羅漢果苷可通過(guò)減少首次排便時(shí)間和增加6 h糞便重量等來(lái)改善小鼠便秘情況[18]，其機(jī)制可能是通過(guò)減少血液中LPS內(nèi)毒素的含量，從而修復(fù)腸屏障[44]。這提示我們?cè)搹?fù)合代糖中的菊粉和羅漢果苷可能是其通便作用的有效成分。

2.4 復(fù)合代糖對(duì)小鼠有益菌（雙歧桿菌、乳酸桿菌）的影響

將小鼠糞便中分離出的雙歧桿菌和乳酸桿菌接種在0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL復(fù)合代糖濃度的培養(yǎng)基，在600 nm的波長(zhǎng)下OD值。由圖1可得，對(duì)照組和5組不同濃度的復(fù)合代糖組在前8 h內(nèi)雙歧桿菌的數(shù)量相差不大。在8 h之后，0.375 g/mL代糖濃度組呈現(xiàn)近對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的趨勢(shì)。另外，在8 h后，5組不同濃度的復(fù)合代糖組雙歧桿菌數(shù)量均高于對(duì)照組，并有高濃度的復(fù)合代糖組雙歧桿菌數(shù)量高于低濃度復(fù)合代糖組的趨勢(shì)。由圖2可得，對(duì)照組和5組不同濃度的復(fù)合代糖組在前6 h內(nèi)乳酸桿菌的數(shù)量相差不大，在6 h之后，0.375 g/mL和0.3 g/mL代糖濃度組均呈現(xiàn)近對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的趨勢(shì)，且5組不同濃度的復(fù)合代糖組在6 h后乳酸桿菌的數(shù)量均高于對(duì)照組，并有高濃度的復(fù)合代糖組乳酸桿菌的數(shù)量高于低濃度復(fù)合代糖組的趨勢(shì)。這說(shuō)明0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL濃度的復(fù)合代糖組均可促進(jìn)雙歧桿菌和乳酸桿菌的增殖，相較于雙歧桿菌，復(fù)合代糖能更早地促進(jìn)乳酸桿菌的增殖。并在0.075 g/mL至0.375 g/mL濃度內(nèi)，復(fù)合代糖濃度越大，促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌增殖的趨勢(shì)越明顯。

圖1 復(fù)合代糖對(duì)雙歧桿菌增殖的影響Fig.1 Effects of complex glucosubstitutes on the proliferation of bifidobacterial

圖2 復(fù)合代糖對(duì)乳酸桿菌增殖的影響Fig.2 Effects of complex glucose on lactobacillus proliferation

人類的腸道微生物群非常復(fù)雜，其數(shù)量是宿主細(xì)胞的10倍，可幫助腸道吸收、分解和代謝各類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是維持機(jī)體正常運(yùn)轉(zhuǎn)的重要因素[45]。其中雙歧桿菌、乳酸桿菌是人類和動(dòng)物胃腸道中重要的益生菌。目前研究認(rèn)為體內(nèi)雙歧桿菌與保護(hù)腸道粘膜、增加IgA數(shù)量、抑制腫瘤、改善便秘等密切相關(guān)[46]。而乳酸桿菌有著預(yù)防和改善便秘、治療腹瀉等功效，可通過(guò)飲食提高腸道內(nèi)數(shù)量[47]。飲食是影響結(jié)腸微生物群組成和代謝的主要因素，飲食中的營(yíng)養(yǎng)素?cái)?shù)量、種類對(duì)腸道微生物群有很大影響[45]。菊粉是由重復(fù)果糖基單元組成的纖維，易被腸內(nèi)細(xì)菌發(fā)酵，并產(chǎn)生大量短鏈脂肪酸（SCFA）。在每日的飲食外補(bǔ)充5 g～20 g菊粉，可檢測(cè)到腸道內(nèi)雙歧桿菌和乳酸桿菌的增加[48]。Wu X的研究表明，往小雞的飲食中添加100～3200 mg/kg的甜菊糖苷，可檢測(cè)到其腸道內(nèi)雙歧桿菌顯著增加，并有促進(jìn)乳酸桿菌生長(zhǎng)的趨勢(shì)[49]。這提示我們?cè)搹?fù)合代糖中的菊粉和甜菊糖苷可能是其扶植作用的有效成分。

2.5 復(fù)合代糖對(duì)小鼠有害菌（腸桿菌、腸球菌）的影響

腸桿菌和腸球菌是人和動(dòng)物腸道內(nèi)一類常見(jiàn)的致病菌，具有生殖力強(qiáng)、分布廣等特點(diǎn)，常引起各類感染，研究其抑制方法是當(dāng)今研究熱點(diǎn)之一[50,51]。將腸桿菌和腸球菌接種在5種不同復(fù)合代糖濃度的培養(yǎng)基，在600 nm的波長(zhǎng)下OD值。由圖3可得，對(duì)照組和5組不同濃度的復(fù)合代糖組在前4 h內(nèi)腸桿菌的數(shù)量相差不大。在4 h之后，0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL濃度的復(fù)合代糖組腸桿菌的數(shù)量均低于對(duì)照組。由圖4可得，0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL濃度的復(fù)合代糖組腸球菌數(shù)量在24 h內(nèi)均低于對(duì)照組。

圖3 復(fù)合代糖對(duì)腸桿菌增殖的影響Fig.3 Effects of complex glucosubstitutes on the proliferation of Enterobacteriaceae

圖4 復(fù)合代糖對(duì)腸球菌增殖的影響Fig.4 Effects of complex glucosubstitutes on enterococcus proliferation

腸桿菌適宜pH值在4.5～8.0之間，腸球菌喜在高鹽高堿的環(huán)境生長(zhǎng)，而菊粉、甜菊糖苷在進(jìn)入腸道后會(huì)被益生菌分解，進(jìn)而降低腸道內(nèi)的pH值，從而抑制腸桿菌和腸球菌等有害菌的增殖。復(fù)合代糖對(duì)腸球菌的增殖抑制效果比腸桿菌明顯，腸桿菌數(shù)量在4 h后才逐漸呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì)，這可能與腸桿菌不能在酸性環(huán)境中長(zhǎng)時(shí)間存活，但可以在適度的酸性環(huán)境下生長(zhǎng)有關(guān)。這與陳櫻萌研究中槲皮素酸奶對(duì)小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用基本一致[52]。上述結(jié)果說(shuō)明0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL濃度的復(fù)合代糖組均可抑制腸桿菌和腸球菌的增殖的增殖，而菊粉和甜菊糖苷可能是該復(fù)合代糖抑制其增殖作用的有效成分。

3 結(jié)論

本研究所采用的復(fù)合代糖由赤蘚糖醇、菊粉、甜菊糖苷、羅漢果苷組成。通過(guò)小鼠實(shí)驗(yàn)，用洛哌丁胺建立便秘模型，酚酞和復(fù)合代糖進(jìn)行干預(yù)，14 d后觀察墨汁推進(jìn)率、首粒黑便時(shí)間、6 h的排便粒數(shù)和6 h糞便重量等指標(biāo)，評(píng)價(jià)復(fù)合代糖的通便效果。發(fā)現(xiàn)0.75 g/kg·BW、1.5 g/kg·BW、2.25 g/kg·BW、3 g/kg·BW、3.75 g/kg·BW劑量的復(fù)合代糖具有通便效果，可有效改善小鼠的便秘情況。其中3.75 g/kg·BW的通便功效最為顯著，相對(duì)于模型組，墨汁推進(jìn)率增加了48.47%、首粒黑便時(shí)間減少了67.25 min、6 h排便粒數(shù)增加了8.75 n、6 h糞便重量增加了0.20 g。而復(fù)合代糖中的菊粉和羅漢果苷可能是其通便作用的有效成分。另外，通過(guò)體外菌群增殖實(shí)驗(yàn)，動(dòng)態(tài)觀察空白組和復(fù)合代糖干預(yù)組雙歧桿菌、乳酸桿菌和腸桿菌、腸球菌的數(shù)量變化，發(fā)現(xiàn)0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL濃度的復(fù)合代糖可促進(jìn)腸道內(nèi)有益菌雙歧桿菌、乳酸桿菌的增殖和抑制有害菌腸桿菌、腸球菌的增殖。并在0.075 g/mL至0.375 g/mL濃度內(nèi)，復(fù)合代糖濃度越大，促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌增殖的趨勢(shì)越明顯。復(fù)合代糖中的菊粉和甜菊糖苷可能是其促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌增殖和抑制有害菌腸桿菌、腸球菌增殖的有效成分。綜上所述，該復(fù)合代糖口感良好，具有通便功效，可調(diào)節(jié)腸道菌群，作為一種新型甜味劑，應(yīng)用前景廣闊。