麻景梅，麻朝朝，高樂，田宇柔，牛麗穎

中藥研究與開發(fā)

一測多評法用于茵梔黃傳統(tǒng)湯劑12種成分含量測定的適用性研究

麻景梅1，2，3，麻朝朝2，3，4，高樂1，2，3，田宇柔1，2，3，牛麗穎1，2，3

1.河北中醫(yī)學(xué)院，河北 石家莊 050091；2.河北省中藥配方顆粒技術(shù)創(chuàng)新中心，河北 石家莊 050091；3.河北省中藥材品質(zhì)評價(jià)與標(biāo)準(zhǔn)化工程研究中心，河北 石家莊 050091；4.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025

建立一測多評法同時(shí)測定茵梔黃傳統(tǒng)湯劑12種成分含量的方法，驗(yàn)證該方法在其質(zhì)量控制中應(yīng)用的可行性與適用性。采用Agilent Eclipse plus C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動相，梯度洗脫，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C檢測波長為327 nm，梔子苷檢測波長為238 nm，對羥基苯乙酮檢測波長為275 nm，黃芩苷、千層紙素A苷、漢黃芩苷、黃芩素檢測波長為280 nm，以黃芩苷為內(nèi)參物，建立黃芩苷與新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、梔子苷、對羥基苯乙酮、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、千層紙素A苷、漢黃芩苷、黃芩素的相對校正因子，計(jì)算12種成分含量。將一測多評法測定結(jié)果與外標(biāo)法測定結(jié)果對比，驗(yàn)證一測多評法的準(zhǔn)確性。12種成分的平均加樣回收率為96.86%～103.69%；黃芩苷與新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、梔子苷、對羥基苯乙酮、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、千層紙素A苷、漢黃芩苷、黃芩素的相對校正因子平均值分別為0.916、1.107、0.962、2.297、3.714、3.294、0.183、0.795、1.798、1.021、5.679；15批樣品中12種成分一測多評法的計(jì)算值與外標(biāo)法實(shí)測值無明顯差異（＞0.05）。本研究建立的一測多評方法簡便、穩(wěn)定，可用于茵梔黃傳統(tǒng)湯劑中12種指標(biāo)成分的同步質(zhì)量控制。

茵梔黃傳統(tǒng)湯劑；一測多評法；相對校正因子；黃芩苷

茵梔黃由茵陳蒿湯加減而成，含茵陳、梔子、黃芩、金銀花4味藥，具有清熱解毒、利濕退黃功效[1]。茵梔黃主要含黃酮類、環(huán)烯醚萜類、有機(jī)酸類、香豆素類等化學(xué)成分，常用于治療肝膽濕熱所致黃疸，是臨床治療黃疸的首選藥物，對急慢性肝炎、肝硬化、膽汁淤積等也有很好的治療作用[2-6]。

一測多評法（quantitative analysis of multi- components by single marker，QAMS）利用中藥各成分之間的內(nèi)在關(guān)系，通過測定某個代表性成分（易得、廉價(jià)、有效）并建立相對校正因子，計(jì)算出其他待測成分的含量，實(shí)現(xiàn)多種成分同時(shí)測定，以節(jié)約成本，提高檢測效率[7]。目前，茵梔黃化學(xué)成分研究主要集中在成藥劑型上[8-18]，對于茵梔黃傳統(tǒng)湯劑，由于提取溶媒不同，所含化學(xué)成分與成藥存在一定差別，且針對其一測多評方法的建立未見報(bào)道。本研究以黃芩苷為內(nèi)參物，建立同時(shí)測定茵梔黃傳統(tǒng)湯劑12種化學(xué)成分的一測多評方法，并驗(yàn)證該方法的可行性與適用性，為茵梔黃傳統(tǒng)湯劑全面質(zhì)量控制提供有效方法，從而實(shí)現(xiàn)其多指標(biāo)質(zhì)量評價(jià)模式。

1 儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜儀，美國沃特世公司；Agilent 1260高效液相色譜儀，美國安捷倫科技公司；島津LC-15C高效液相色譜儀，日本島津公司；Pilot5-8L真空冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；BSA224S-CW十萬分之一分析天平，北京賽多利斯有限公司；FA2204B萬分之一分析天平，上海精科儀器有限公司；KQ-250型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

對照品黃芩苷（批號110715-201318，純度≥93.3%）、漢黃芩苷（批號112002-201702，純度≥98.5%）、綠原酸（批號110753-201415，純度≥96.2%）、對羥基苯乙酮（批號111897-201001，純度≥99.9%），中國食品藥品檢定研究院；梔子苷（批號MUST-16020401，純度≥99.03%）、新綠原酸（批號MUST-12113001，純度≥98%）、隱綠原酸（批號MUST-13013002，純度≥98%）、異綠原酸A（批號MUST-18040105，純度≥99.29%）、異綠原酸B（批號MUST-18031602，純度≥99.05%）、異綠原酸C（批號MUST-18031603，純度≥99.84%）、黃芩素（批號MUST-16031618，純度≥99.58%），成都曼斯特生物科技有限公司；千層紙素A苷（批號PS-011092，純度≥98.0%），成都普思生物科技有限公司。乙腈、甲醇、磷酸為色譜級，F(xiàn)isher化學(xué)試劑公司；超純水為自制，其他試劑均為分析純。

茵梔黃傳統(tǒng)湯劑15批，自制。制備方法：取茵陳18 g、梔子12 g、黃芩8 g、金銀花8 g，煎煮2次，一煎加12倍量水，浸泡30 min，微沸煎煮30 min，二煎加10倍量水，微沸煎煮20 min，過200目篩，合并2次濾液，減壓濃縮至料液比1∶2，冷凍干燥，即得。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent Eclipse plus C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）為流動相，梯度洗脫（0～10 min，7%→10%A；10～15 min，10%A；15～40 min，10%→20%A；40～65 min，20%→23%A；65～90 min，23%→40%A）；檢測波長：新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C為327 nm，梔子苷為238 nm，對羥基苯乙酮為275 nm，黃芩苷、千層紙素A苷、漢黃芩苷、黃芩素為280 nm；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL[9-13]。色譜圖見圖1。

注：A.混合對照品；B.供試品；C.缺茵陳和金銀花；D.缺梔子；E.缺黃芩；1.新綠原酸；2.綠原酸；3.隱綠原酸；4.梔子苷；5.對羥基苯乙酮；6.異綠原酸B；7.異綠原酸A；8.異綠原酸C；9.黃芩苷；10.千層紙素Ａ苷；11.漢黃芩苷；12.黃芩素

2.2 對照品溶液制備

分別精密稱取新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、梔子苷、對羥基苯乙酮、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、黃芩苷、千層紙素A苷、漢黃芩苷、黃芩素對照品適量，加甲醇溶解，用70%甲醇稀釋成濃度分別為9.58、150.11、23.61、273.12、68.82、59.52、12.44、37.21、308.32、49.94、77.22、56.04 mg/L的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

取茵梔黃傳統(tǒng)湯劑凍干粉約0.2 g，加入70%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）10 min，取出，放冷，補(bǔ)足減失的質(zhì)量，過濾，即得。

2.4 陰性對照品溶液制備

分別取缺茵陳和金銀花、梔子、黃芩的缺味茵梔黃傳統(tǒng)湯劑凍干粉約0.2 g，按“2.3”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液2、4、8、16、20、25 μL注入高效液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表1。12種成分在相應(yīng)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

表1 12種成分線性關(guān)系考察結(jié)果

待測成分回歸方程相關(guān)系數(shù)線性范圍/μg 新綠原酸Y＝2.56×106X＋5.39×1040.999 50.02～0.24 綠原酸Y＝2.74×106X＋2.74×1050.999 50.30～3.75 隱綠原酸Y＝3.20×106X＋4.83×1040.999 50.05～0.59 梔子苷Y＝1.51×106X－8.71×1041.000 00.55～6.83 對羥基苯乙酮Y＝9.40×105X－1.46×1040.999 90.14～1.72 異綠原酸BY＝5.04×106X－1.23×1041.000 00.02～0.31 異綠原酸AY＝3.96×106X－4.80×1040.999 60.12～1.49 異綠原酸CY＝4.39×106X－3.85×1041.000 00.07～0.93 黃芩苷Y＝3.46×106X－1.93×1051.000 00.62～7.71 千層紙素A苷Y＝1.98×106X－3.20×1041.000 00.10～1.25 漢黃芩苷Y＝3.40×106X－5.42×1041.000 00.15～1.93 黃芩素Y＝6.28×105X－1.19×1041.000 00.11～1.40

2.5.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取“2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、梔子苷、對羥基苯乙酮、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、黃芩苷、千層紙素A苷、漢黃芩苷、黃芩素的峰面積RSD分別為0.20%、0.14%、0.16%、0.14%、0.11%、0.15%、0.15%、0.11%、0.11%、0.13%、0.11%、0.12%，均小于2.0%，表明儀器精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取茵梔黃傳統(tǒng)湯劑凍干粉（批號S1）0.2 g，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于0、2、4、6、10、24 h進(jìn)樣測定，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、梔子苷、對羥基苯乙酮、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、黃芩苷、千層紙素A苷、漢黃芩苷、黃芩素峰面積RSD分別為0.58%、0.19%、0.46%、0.50%、0.32%、0.24%、0.17%、0.26%、0.20%、1.94%、0.17%、1.92%，均小于2.0%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取茵梔黃傳統(tǒng)湯劑凍干粉（批號S1）0.2 g，精密稱定，平行6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下方法分別進(jìn)樣測定，測得新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、梔子苷、對羥基苯乙酮、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、黃芩苷、千層紙素A苷、漢黃芩苷、黃芩素的平均含量分別為1.30、17.15、2.18、37.94、4.75、1.65、5.12、4.83、42.04、7.93、9.37、5.80 mg/g，RSD分別為2.77%、2.23%、2.59%、2.59%、2.64%、2.83%、2.51%、2.50%、2.76%、2.63%、2.44%、2.37%，均小于3.0%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的茵梔黃傳統(tǒng)湯劑凍干粉（S1）9份，各約0.1 g，精密稱定，分別按已知含量的50%、100%、150%精密加入含混合對照品的提取液，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，每份樣品平行測定2次，分別計(jì)算新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、梔子苷、對羥基苯乙酮、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、黃芩苷、千層紙素A苷、漢黃芩苷、黃芩素的加樣回收率和RSD。結(jié)果12種化合物的平均加樣回收率為96.86%～103.69%，RSD均小于5.0%，表明本方法的準(zhǔn)確性較好。見表2～表13。

表2 新綠原酸加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 10.131 40.072 20.205 3102.35 0.100 70.130 90.072 20.206 5104.71 0.101 20.131 60.072 20.206 8104.16 0.100 30.130 40.154 80.283 6 98.97 0.100 40.130 50.154 80.282 8 98.39100.732.67 0.100 80.131 00.154 80.284 4 99.10 0.102 30.133 00.237 30.365 2 97.85 0.101 90.132 50.237 30.366 3 98.53 0.101 40.131 80.237 30.375 2102.57

表3 綠原酸加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 11.733 90.867 32.590 798.79 0.100 71.727 00.867 32.581 098.47 0.101 21.735 60.867 32.596 699.27 0.100 31.720 11.734 63.374 795.39 0.100 41.721 91.734 63.378 895.5296.861.62 0.100 81.728 71.734 63.383 295.38 0.102 31.754 42.601 94.272 196.76 0.101 91.747 62.601 94.256 096.41 0.101 41.739 02.601 94.230 895.77

表4 隱綠原酸加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 10.220 40.124 10.343 0 98.79 0.100 70.219 50.124 10.344 4100.64 0.101 20.220 60.124 10.342 3 98.07 0.100 30.218 70.248 20.464 5 99.03 0.100 40.218 90.248 20.456 8 95.8598.331.45 0.100 80.219 70.248 20.459 3 96.54 0.102 30.223 00.372 30.588 4 98.15 0.101 90.222 10.372 30.590 2 98.87 0.101 40.221 10.372 30.589 7 99.01

表5 梔子苷加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 13.835 72.011 5 5.779 0 96.61 0.100 73.820 62.011 5 5.742 5 95.55 0.101 23.839 52.011 5 5.753 1 95.13 0.100 33.805 44.023 0 7.939 2102.75 0.100 43.809 24.023 0 7.947 8102.87100.583.62 0.100 83.824 44.023 0 7.959 4102.78 0.102 33.881 36.034 510.092 4102.93 0.101 93.866 16.034 510.092 8103.19 0.101 43.847 16.034 510.086 0103.39

表6 對羥基苯乙酮加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 10.480 20.237 50.726 3103.62 0.100 70.478 30.237 50.715 2 99.75 0.101 20.480 70.237 50.730 0104.97 0.100 30.476 40.475 00.933 7 96.27 0.100 40.476 90.475 00.937 0 96.8698.793.33 0.100 80.478 80.475 00.939 2 96.93 0.102 30.485 90.712 51.176 6 96.94 0.101 90.484 00.712 51.172 7 96.66 0.101 40.481 70.712 51.173 4 97.08

表7 異綠原酸B加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 10.166 80.082 20.245 8 96.11 0.100 70.166 20.082 20.245 7 96.72 0.101 20.167 00.082 20.245 3 95.26 0.100 30.165 50.164 30.331 8101.22 0.100 40.165 70.164 30.330 3100.18100.543.70 0.100 80.166 30.164 30.334 2102.19 0.102 30.168 80.246 50.424 7103.81 0.101 90.168 10.246 50.426 1104.67 0.101 40.167 30.246 50.425 5104.75

表8 異綠原酸A加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 10.517 60.244 30.758 0 98.40 0.100 70.515 60.244 30.769 2103.81 0.101 20.518 10.244 30.770 3103.23 0.100 30.513 50.488 51.002 2100.04 0.100 40.514 00.488 51.008 4101.21101.431.91 0.100 80.516 10.488 51.009 7101.04 0.102 30.523 80.732 81.286 8104.12 0.101 90.521 70.732 81.263 0101.16 0.101 40.519 20.732 81.250 8 99.84

表9 異綠原酸C加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 10.488 30.239 00.720 4 97.11 0.100 70.486 40.239 00.727 7100.96 0.101 20.488 80.239 00.728 4100.25 0.100 30.484 40.478 00.954 9 98.43 0.100 40.484 90.478 00.959 4 99.2798.921.22 0.100 80.486 90.478 00.960 6 99.10 0.102 30.494 10.717 01.193 9 97.60 0.101 90.492 20.717 01.202 7 99.09 0.101 40.489 80.717 01.195 9 98.48

表10 黃芩苷加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 14.250 22.105 7 6.289 7 96.86 0.100 74.233 42.105 7 6.415 8103.64 0.101 24.254 42.105 7 6.272 2 95.83 0.100 34.216 64.211 4 8.613 5104.40 0.100 44.220 84.211 4 8.415 8 99.6199.832.87 0.100 84.237 64.211 4 8.352 9 97.72 0.102 34.300 76.317 110.595 7 99.65 0.101 94.283 96.317 110.623 9100.36 0.101 44.262 96.317 110.605 7100.41

表11 千層紙素A苷加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 10.801 70.399 71.219 6104.57 0.100 70.798 60.399 71.213 1103.72 0.101 20.802 50.399 71.216 2103.52 0.100 30.795 40.762 41.584 4103.49 0.100 40.796 20.762 41.581 4102.99103.690.48 0.100 80.799 30.762 41.593 8104.21 0.102 30.811 21.143 61.990 9103.16 0.101 90.808 11.143 61.992 9103.60 0.101 40.804 11.143 61.993 0103.96

表12 漢黃芩苷加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 10.947 30.476 51.415 5 98.26 0.100 70.943 60.476 51.425 9101.22 0.101 20.948 20.476 51.427 6100.61 0.100 30.939 80.953 01.886 4 99.33 0.100 40.940 70.953 01.888 8 99.4999.881.89 0.100 80.944 50.953 01.892 7 99.50 0.102 30.958 61.429 52.443 5103.88 0.101 90.954 81.429 52.345 8 97.31 0.101 40.950 11.429 52.370 7 99.38

表13 黃芩素加樣回收率試驗(yàn)

取樣量/g樣品中 含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回 收率/%RSD/% 0.101 10.586 40.289 60.884 0102.76 0.100 70.584 10.289 60.886 0104.25 0.101 20.587 00.289 60.885 6103.11 0.100 30.581 70.579 21.151 0 98.29 0.100 40.582 30.579 21.138 7 96.06100.952.88 0.100 80.584 60.579 21.162 9 99.84 0.102 30.593 30.868 81.499 6104.32 0.101 90.591 00.868 81.470 9101.28 0.101 40.588 10.868 81.445 2 98.65

2.6 相對校正因子的確定

取“2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。以黃芩苷為內(nèi)參物，計(jì)算相對校正因子。fs/i＝fs/fi＝（As/Cs）/（Ai/Ci），式中As為內(nèi)參物對照品峰面積，Cs為內(nèi)參物對照品濃度，Ai為待測成分對照品峰面積，Ci為待測成分對照品濃度[7]。11種成分相對校正因子測定結(jié)果見表14。

2.7 儀器、色譜柱耐用性考察

取“2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液，分別采用Waters e2695、島津LC-15C、Agilent 1260高效液相色譜儀和Agilent Eclipse plus C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Wondasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱測定[19-22]，考察不同儀器及色譜柱對相對校正因子的影響，計(jì)算平均值和RSD，結(jié)果見表15?？芍獌x器及色譜柱均無明顯影響（RSD＜5.0%）。

2.8 待測色譜峰定位

取“2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液，分別采用3種不同色譜儀和3種色譜柱測定，計(jì)算各待測成分對黃芩苷的相對保留時(shí)間（r＝tRi/tRs），結(jié)果見表16。RSD均小于5%，表明利用相對保留時(shí)間進(jìn)行色譜峰的定位是可行的[7]。

2.9 一測多評法與外標(biāo)法測定結(jié)果比較

取茵梔黃傳統(tǒng)湯劑凍干粉15批各0.2 g，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，分別用外標(biāo)法（ESM）和QAMS測定各成分含量[7，19-22]，結(jié)果見表17。EMS實(shí)測值與QAMS計(jì)算值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05），表明建立的方法具有較好的準(zhǔn)確度與可信度。

表14 茵梔黃傳統(tǒng)湯劑11種待測成分相對校正因子

進(jìn)樣量f黃芩苷/ 新綠原酸f黃芩苷/ 綠原酸f黃芩苷/ 隱綠原酸f黃芩苷/ 梔子苷f黃芩苷/ 對羥基苯乙酮f黃芩苷/ 異綠原酸Bf黃芩苷/ 異綠原酸Af黃芩苷/ 異綠原酸Cf黃芩苷/ 千層紙素A苷f黃芩苷/漢黃芩苷f黃芩苷/ 黃芩素 2 μL0.9131.0930.9552.3063.7623.3270.1840.8031.7991.0245.701 6 μL0.9151.1160.9572.3033.7223.3100.1840.7981.7961.0235.717 8 μL0.9211.0970.9592.2973.6893.2890.1830.7951.8061.0215.625 16 μL0.9161.1190.9662.2903.6683.2730.1830.7901.7921.0185.661 20 μL0.9171.1080.9732.2873.7293.2710.1830.7891.7971.0175.689 平均值0.9161.1070.9622.2973.7143.2940.1830.7951.7981.0215.679 RSD/%0.321.030.770.350.980.730.300.732.450.300.64

表15 不同儀器和色譜柱測定茵梔黃傳統(tǒng)湯劑11種待測成分相對校正因子

儀器色譜柱f黃芩苷/ 新綠原酸f黃芩苷/ 綠原酸f黃芩苷/ 隱綠原酸f黃芩苷/梔子苷f黃芩苷/對羥基苯乙酮f黃芩苷/異綠原酸Bf黃芩苷/ 異綠原酸Af黃芩苷/ 異綠原酸Cf黃芩苷/ 千層紙素A苷f黃芩苷/ 漢黃芩苷f黃芩苷/ 黃芩素 Waters e2695Waters C181.0111.1761.0022.3993.9103.4730.1960.8621.7361.0265.760 Agilent C180.9161.1070.9622.2973.7143.2940.1830.7951.7981.0215.679 Wondasil C180.9911.1500.9892.4193.8503.3220.1890.8201.7761.0365.692 島津LC-15CWaters C181.0161.1340.9742.3983.8283.3570.1900.8231.6581.0055.945 Agilent C181.0181.1280.9672.3973.8043.2970.1870.8091.6531.0005.772 Wondasil C180.9891.1310.9732.4073.8183.3140.1880.8151.6601.0065.809 Agilent 1260Waters C180.9861.1730.9912.3783.8363.3440.1900.8271.7411.0335.895 Agilent C181.0681.2040.9032.3803.8163.2750.1890.8081.8771.0345.860 Wondasil C180.9981.1490.9942.3924.2723.2820.1870.8061.7421.0355.680 平均值 0.9991.1520.9732.3853.8723.3290.1890.8181.7381.0225.789 RSD/% 3.952.413.021.484.091.821.832.334.271.421.66

表16 不同儀器和色譜柱測定茵梔黃傳統(tǒng)湯劑11種待測成分相對保留時(shí)間

儀器色譜柱r新綠原酸/ 黃芩苷r綠原酸/ 黃芩苷r隱綠原酸/ 黃芩苷r梔子苷/ 黃芩苷r對羥基苯乙酮/ 黃芩苷r異綠原酸B/ 黃芩苷r異綠原酸A/ 黃芩苷r異綠原酸C/ 黃芩苷r千層紙素Ａ苷/黃芩苷r漢黃芩苷/ 黃芩苷r黃芩素/ 黃芩苷 Waters e2695Waters C180.1680.2630.3060.3730.4550.7380.7570.8371.2361.2941.420 Agilent C180.1710.2710.3070.3740.4570.7570.7860.8591.2541.3151.460 Wondasil C180.1640.2640.2970.3680.4490.7560.7840.8561.2631.3281.478 島津LC-15CWaters C180.1790.2850.3240.3930.4710.7400.7620.8431.1921.2381.350 Agilent C180.1820.2970.3290.4030.4760.7590.7890.8631.2231.2721.402 Wondasil C180.1830.2930.3260.3920.4640.7560.7850.8591.2321.2821.415 Agilent 1260Waters C180.1680.2670.3160.3730.4390.7190.7390.8291.1931.2391.348 Agilent C180.1710.2780.3220.3820.4440.7350.7660.8511.2151.261.385 Wondasil C180.1630.2660.3050.3730.4330.7340.7630.8461.2341.2821.411 平均值 0.1690.2690.3120.3810.4540.7440.7700.8491.2271.2791.408 RSD/% 4.354.683.583.163.181.872.201.341.982.413.11

表17 EMS和QAMS測定茵梔黃傳統(tǒng)湯劑12種成分含量比較（mg/g）

編號黃芩苷 新綠原酸 綠原酸 隱綠原酸 梔子苷 對羥基苯乙酮 ESMQAMS ESMQAMS ESMQAMS ESMQAMS ESMQAMS 147.66 0.800.80 13.9313.91 1.581.62 35.6135.60 2.872.89 257.71 0.810.80 12.4912.75 1.501.54 34.9334.92 2.792.81 338.27 1.151.14 17.2416.34 2.092.14 34.4834.47 2.042.06 460.86 0.780.77 11.6311.86 1.731.77 30.8930.88 2.822.84 542.26 0.870.86 11.7411.77 1.601.64 26.5326.52 2.702.72 645.61 0.750.74 12.7913.05 1.531.57 35.8435.83 3.233.25 750.67 0.960.95 12.5112.62 1.721.76 37.4737.46 3.994.02 861.66 0.770.76 11.4411.68 1.411.44 37.4437.43 2.782.80 941.98 0.750.74 10.5410.28 1.331.36 34.4834.48 2.452.47 1051.17 1.131.12 16.4516.78 2.212.26 31.3131.31 3.343.36 1155.40 0.560.56 7.19 7.48 1.021.05 41.7141.70 3.153.17 1235.06 0.630.62 11.0211.24 1.221.25 39.0239.01 1.681.69 1339.17 0.820.81 16.3216.87 1.751.79 34.3834.37 2.882.90 1437.80 0.750.74 16.0416.37 1.651.68 39.4239.41 3.573.60 1532.75 0.740.73 15.5515.62 1.581.62 36.9836.97 3.233.26 編號異綠原酸B 異綠原酸A 異綠原酸C 千層紙素A苷 漢黃芩苷 黃芩素 ESMQAMSESMQAMS ESMQAMS ESMQAMS ESMQAMS ESMQAMS 14.254.26 0.670.67 3.413.41 7.467.57 10.5710.57 4.324.38 24.544.55 0.780.78 3.593.59 9.679.81 11.7011.70 4.404.47 37.157.17 1.171.17 4.995.00 6.356.45 9.149.14 2.662.69 43.863.87 0.530.53 3.043.05 9.679.81 12.7612.76 5.455.53 54.654.66 0.670.67 3.613.62 7.527.63 9.249.25 3.463.51 64.004.01 0.610.61 2.892.9 7.777.89 10.0910.09 7.007.10 75.605.62 0.690.69 3.773.77 8.879.01 11.2611.27 5.175.24 83.603.61 0.560.56 3.213.21 11.1611.33 12.7212.72 5.595.66 94.434.44 0.760.76 3.683.69 7.227.33 9.459.45 5.265.33 106.106.12 0.820.82 4.114.12 8.368.49 10.8110.81 4.674.74 112.792.79 0.420.42 2.812.82 9.199.33 12.0612.06 6.446.53 123.443.45 0.670.67 2.972.98 5.545.62 8.378.38 4.814.87 134.924.93 0.900.90 3.473.47 5.775.86 8.938.93 18.2218.47 144.424.43 0.830.83 3.093.09 5.946.03 8.138.13 6.276.36 153.783.79 0.710.71 2.832.84 4.114.18 9.259.26 21.0821.37

3 討論

本研究采用二極管陣列檢測器對樣品進(jìn)行全波長掃描，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C的最大吸收波長為327 nm，梔子苷吸收波長為238 nm，對羥基苯乙酮吸收波長為275 nm，黃芩苷、千層紙素A苷、漢黃芩苷、黃芩素吸收波長為280 nm，故采用波長切換模式同時(shí)測定12種成分。

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，稀釋各對照品貯備液，制成混合對照品溶液，使對照品溶液與供試品溶液在相同進(jìn)樣量下，二者峰面積盡可能接近，以利于方法學(xué)考察中標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立，以及重復(fù)性試驗(yàn)、加樣回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。

基于文獻(xiàn)調(diào)研及成分的可測性[19-22]，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C為金銀花和茵陳的主要有效成分，對羥基苯乙酮為茵陳特有，梔子苷為梔子的主要有效成分，千層紙素A苷、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素為黃芩的主要有效成分；經(jīng)預(yù)試驗(yàn)可知，在紫外吸收下，所選擇的12種成分在茵梔黃傳統(tǒng)湯劑中含量較高，易于檢測，且為茵梔黃的有效成分，其中黃芩苷化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定且廉價(jià)易得，故選其作為內(nèi)標(biāo)物。

本研究以茵梔黃傳統(tǒng)湯劑為研究對象，建立了12種化學(xué)成分含量的QAMS方法，通過方法學(xué)考察、色譜峰定位，以及與ESM測定值進(jìn)行比較，結(jié)果表明QAMS計(jì)算值與ESM測定值無明顯差異，具有較高的重現(xiàn)性與穩(wěn)定性，可實(shí)現(xiàn)茵梔黃傳統(tǒng)湯劑中12種成分的質(zhì)量控制，為全面控制茵梔黃傳統(tǒng)湯劑的質(zhì)量提供參考。

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[19] 木盼盼,安琪,張彥昭,等.一測多評法測定葛根藥材中9個異黃酮成分的含量[J].中國中藥雜志,2019,44(22)：4888-4895.

[20] 邰艷妮,翁艷鴻,張?zhí)K萍,等.一測多評法測定不同等級澤瀉藥材中7個萜類成分的含量[J].中國中藥雜志,2019,44(11)：2292-2307.

[21] 譚鵬,許莉,牛明,等.一測多評法同時(shí)測定補(bǔ)骨脂中16種化學(xué)成分的含量[J].中草藥,2019,50(16)：3937-3946.

[22] 于娟.一測多評法測定清熱止咳顆粒及中間體中7種黃酮類成分的含量[J].中國中藥雜志,2019,44(19)：4185-4195.

Study on Applicability of QAMS for Content Determination of 12 Components inTraditional Decoction

MA Jingmei1,2,3, MA Zhaozhao2,3,4, GAO Le1,2,3, TIAN Yurou1,2,3, NIU Liying1,2,3

To establish a method for the content determination of 12 components intraditional decoction through quantitative analysis of multi-components with single marker (QAMS); To verify the feasibility and applicability of the method in its quality control.Agilent Eclipse plus C18 column (4.6 mm × 250 mm, 5 μm) was used; acetonitrile-0.1% phosphoric acid aqueous solution was used as mobile phase; gradient elution; flow rate was 1.0 mL/min; column temperature was 30 ℃. Detection wavelength for neochlorogenic acid, chlorogenic acid, cryptochlorogenic acid, isochlorogenic acid A, isochlorogenic acid B, isochlorogenic acid C was 327 nm; geniposide detection wavelength was 238 nm; p-hydroxyacetophenone detection wavelength was 275 nm; detection wavelength for baicalin, melaleuca A glycoside, wogonin, baicalein was 280 nm. With baicalin as the internal reference, relative correction factors of baicalin and neochlorogenic acid, chlorogenic acid, cryptochlorogenic acid, geniposide, p-hydroxyacetophenone, isochlorogenic acid B, isochlorogenic acid A, isochlorogenic acid C, melaleuca A glycoside, wogonin and baicalein was established, and the 12 components were determined. The measurement results of QAMS were compared with the results of the external standard method to verify the accuracy of QAMS.The average recovery rates of 12 components were 96.86%–103.69%. The relative positive factors of baicalin and neochlorogenic acid, chlorogenic acid, cryptochlorogenic acid, geniposide, p-hydroxyacetophenone, isochlorogenic acid B, isochlorogenic acid A, isochlorogenic acid C, melaleuca A glycoside, wogonin and baicalei were 0.916, 1.107, 0.962, 2.297, 3.714, 3.294, 0.183, 0.795, 1.798, 1.021, 5.679, respectively. There was no significant difference between the calculated values of 12 components in 15 batches of samples by the QAMS and the measured values of the external standard method (>0.05).The method established in the study is simple and stable, and can be used for the synchronous quality control of 12 index components intraditional decoction.

traditional decoction; quantitative analysis of multi-components with single marker; relative correction factor; baicalin

R284.1

A

1005-5304(2021)06-0075-08

10.19879/j.cnki.1005-5304.202012361

河北省自然科學(xué)基金（H2019423050）；河北省中醫(yī)藥管理局科研計(jì)劃（2016016）

牛麗穎，E-mail：niuliyingyy@163.com

（2020-12-21）

（2020-12-30；編輯：陳靜）