戚毓敏， 單 鍇， 崔 靜， 渠宏雁， 王 榮， 陳永泉*

（1.江南大學(xué) 無(wú)錫醫(yī)學(xué)院，江蘇 無(wú)錫214122；2.江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無(wú)錫214122）

熱休克蛋白（HSP）[1]通?？梢栽跈C(jī)體遭受應(yīng)激時(shí)大量表達(dá)[2]，可以幫助細(xì)胞耐受外界環(huán)境壓力，也稱為熱應(yīng)激蛋白，具有高度保守性[3]。熱休克蛋白通常根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量大小進(jìn)行分類，HSP70指的是相對(duì)分子質(zhì)量在7×104左右的熱休克蛋白，主要有HSPA1A、HSPA5、HSPA8、HSPA9。HSP70是熱休克蛋白家族被研究較多的蛋白質(zhì)之一[4]，也是其中表達(dá)量較高的熱休克蛋白之一。HSP70主要起到分子伴侶作用，主要幫助蛋白質(zhì)正確折疊，清除老舊或者受損的細(xì)胞[5]。HSP70主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)揮保護(hù)細(xì)胞的作用[6]，如HSPA5定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，HSPA9則位于線粒體上起到細(xì)胞保護(hù)的作用。同時(shí)也有研究表明，氧化應(yīng)激時(shí)HSP70，如HSPA8會(huì)進(jìn)入細(xì)胞核中，發(fā)生核位移，在細(xì)胞核中起到保護(hù)細(xì)胞的作用。誘導(dǎo)型HSP70（HSPA1A），也稱為HSP72[7]，在正常生理?xiàng)l件下表達(dá)量較低，在發(fā)生應(yīng)激時(shí)，則會(huì)大量表達(dá)，HSPA1A主要通過(guò)應(yīng)激誘導(dǎo)大量表達(dá)從而發(fā)揮作用。HSPA1A誘導(dǎo)后具有保護(hù)細(xì)胞的作用。例如，HSPA1A基因通過(guò)抑制核因子-κB（NF-κB）激活來(lái)抑制促炎細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)錄[8]，促炎細(xì)胞因子的下調(diào)保護(hù)細(xì)胞免受應(yīng)激反應(yīng)，防止細(xì)胞損傷或死亡從而保護(hù)機(jī)體免受應(yīng)激傷害[9]。

惡性腫瘤是當(dāng)下發(fā)病死亡率較高的疾病之一。惡性腫瘤的治療是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)的研究重點(diǎn)也是難點(diǎn)。腫瘤的主要特點(diǎn)就是腫瘤細(xì)胞無(wú)限制增殖，這種增殖是不受控的，因此抑制腫瘤細(xì)胞增殖是行之有效的腫瘤治療方案之一。研究表明，在大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中均可觀察到HSPA1A蛋白水平的增加[10]，Sampson等[11]認(rèn)為癌細(xì)胞擁有額外擴(kuò)增的中心體，作者確定了一種新的途徑，通過(guò)NIMA相關(guān)激酶6（NEK6）和HSPA1A促進(jìn)中心體聚類。NEK6及其上游激活劑可以將HSPA1A靶向到具有擴(kuò)增中心體的細(xì)胞極，因此NEK6-HSPA1A可以用于靶向具有擴(kuò)增中心體的癌細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞增殖。Wan等[12]發(fā)現(xiàn)在體外建立非小細(xì)胞肺癌NCI-H1650的亞系，即用54℃熱處理使其具有較高的耐熱性，發(fā)現(xiàn)其比原來(lái)的細(xì)胞活力和增殖速率明顯加快，通過(guò)Western Blot發(fā)現(xiàn)其HSPA1A表達(dá)量上調(diào)且用抑制劑VER155008（HSPA1A的抑制劑）能夠抑制這種細(xì)胞的活力和增殖速率。這些說(shuō)明HSPA1A與癌細(xì)胞增殖相關(guān)，因此推測(cè)HSPA1A可能在腫瘤細(xì)胞的生存和增殖中扮演著重要角色。

細(xì)胞增殖周期，是細(xì)胞從上一個(gè)有絲分裂結(jié)束到下一個(gè)有絲分裂結(jié)束的過(guò)程。有絲分裂包括分裂間期和分裂期，而分裂間期包括G1期、S期、G2期。G1期主要為DNA復(fù)制提供相關(guān)物質(zhì)，G1期決定了細(xì)胞是否會(huì)發(fā)生分裂，若不發(fā)生分裂則走向G0期，因此G1期也被稱為細(xì)胞周期的限制點(diǎn)。S期主要復(fù)制染色體，G2期主要為有絲分裂期。調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的蛋白質(zhì)主要有兩類，它們相互配合，包括細(xì)胞周期蛋白，即cyclins；細(xì)胞周期蛋白依賴激酶，即CDKs，它們的相互作用能夠共同調(diào)節(jié)細(xì)胞周期。如cyclin D1能夠與CDK4/CDK6發(fā)生相互作用，從而使G1期的周期抑制蛋白——抑癌基因成視網(wǎng)膜瘤蛋白（Rb）發(fā)生磷酸化并從E2F轉(zhuǎn)錄因子上解離，E2F可以加速細(xì)胞的G1期，cyclin D1起到促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄的功能；cyclin E1對(duì)應(yīng)的周期蛋白激酶是CDK2，其可以與CDK2結(jié)合，起到作用與cyclin D1-CDK4/CDK6這條途徑相同。研究表明cyclin通常在腫瘤發(fā)生中失調(diào)，如cyclin D1是一種原癌基因，推測(cè)其過(guò)度表達(dá)是細(xì)胞過(guò)度增殖并產(chǎn)生腫瘤的原因之一，目前已經(jīng)在膀胱癌、淋巴癌、肺癌等多種癌癥細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)cyclin D1的過(guò)表達(dá)。cyclin E1同樣也與腫瘤細(xì)胞的惡性增殖有關(guān)，如食管癌、胃癌、肝癌等多種癌癥中發(fā)現(xiàn)cyclin E1增多，也有研究表明cyclin E1的持續(xù)過(guò)表達(dá)會(huì)導(dǎo)致G1期縮短。目前HSPA1A與周期相關(guān)蛋白以及激酶的關(guān)系尚不清楚。

作者主要探索HSPA1A對(duì)4種腫瘤細(xì)胞增殖的影響，并探究HSPA1A發(fā)揮作用的亞細(xì)胞定位以及對(duì)周期的影響。在此基礎(chǔ)上，HSPA1A有望成為一個(gè)新的腫瘤治療靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料

Forma371 CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱、1300系列A2型生物安全柜、Attune NxT流式細(xì)胞儀、1510 Multican GO全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀：購(gòu)自Thermo（美國(guó)）有限公司；T-SAM倒置熒光顯微鏡：購(gòu)自Nikon（日本）有限公司。

PRMI 1640完全培養(yǎng)基、DMEM高糖培養(yǎng)基、體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清：購(gòu)自Gibco（美國(guó)）有限公司；PI染色試劑盒：購(gòu)自上海生工（上海）有限公司；轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 3000：購(gòu)自Thermo（美國(guó)）有限公司。

HSPA1A、cyclin D1、CDK4、CDK6、cyclin E1、CDK2：購(gòu)自Protein tech（中國(guó)）有限公司。

人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT29、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549、人宮頸癌上皮細(xì)胞HeLa、人前列腺上皮細(xì)胞PC3：購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海分院。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代 輕輕吸去舊培養(yǎng)液，使用磷酸鹽緩沖液（Phosphate buffer saline，PBS）洗1遍后，加入胰酶消化，然后加入完全培養(yǎng)基，吹打5次將細(xì)胞懸液移至新離心管中，200g離心5 min，棄去上清液。重新加入新鮮完全培養(yǎng)基，輕吹混勻，將細(xì)胞懸液根據(jù)所需密度分配在培養(yǎng)皿或多孔板中，補(bǔ)足新鮮完全培養(yǎng)基，將細(xì)胞放回細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d后傳代。

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 細(xì)胞種板，約1 000個(gè)/孔。種板完成后12～24 h內(nèi)完成細(xì)胞轉(zhuǎn)染。準(zhǔn)備無(wú)菌無(wú)酶EP管，配置轉(zhuǎn)染體系，以96孔板為例，每孔加入5μL轉(zhuǎn)染體系。轉(zhuǎn)染體系配置：無(wú)血清培養(yǎng)基中加入質(zhì)粒，按96孔板每個(gè)孔0.1μg加入質(zhì)粒輕輕混勻，按每個(gè)孔0.3μL加入轉(zhuǎn)染試劑，靜置10 min。將配置的轉(zhuǎn)染體系溶液加入孔板中，4 h后更換成完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，通過(guò)觀察熒光判斷轉(zhuǎn)染效率，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 MTT 配置MTT儲(chǔ)存液，質(zhì)量濃度為5 mg/mL，溶液為PBS，避光溶解至無(wú)沉淀，用0.22μm無(wú)菌水系濾膜過(guò)濾除菌，避光保存。使用時(shí)，用無(wú)血清的培養(yǎng)基稀釋至終質(zhì)量濃度0.5 mg/mL，吸去孔板中原有的培養(yǎng)基，每孔加入100μL稀釋的MTT工作液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，此時(shí)底部會(huì)有紫色結(jié)晶。小心吸出孔內(nèi)的MTT。每孔加入150μL二甲基亞砜，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上低速振蕩20 min，使結(jié)晶物充分溶解，在OD570nm處測(cè)量各孔的吸光度。

1.2.4 PI單染色法測(cè)細(xì)胞周期 轉(zhuǎn)染過(guò)后培養(yǎng)48 h的細(xì)胞，用胰酶消化，200g離心5 min收集細(xì)胞。加入2 mL PBS重懸細(xì)胞，200g離心5 min進(jìn)行清洗，加入70%（體積分?jǐn)?shù)）的乙醇（PBS），4℃固定過(guò)夜。400g離心10 min，收集細(xì)胞去廢液，PBS清洗。加入1 mL PI染液重懸細(xì)胞進(jìn)行染色，冰上避光孵育45 min。流式細(xì)胞儀檢測(cè)，通道為FL2。

1.2.5 Western Blot 配制SDS-PAGE膠，上樣，每孔25μg蛋白質(zhì)，設(shè)置90 V電壓進(jìn)行電泳，當(dāng)條帶分開至需要的位置，開始轉(zhuǎn)膜，設(shè)置300 mA，冰上進(jìn)行轉(zhuǎn)膜（NC膜，GE）120 min；轉(zhuǎn)膜結(jié)束，將膜放入含5 g/dL脫脂乳粉的TBST中，室溫?fù)u床封閉1 h。TBST洗膜3次，5 min/次，加入一抗4℃孵育過(guò)夜。吸出一抗，TBST清洗3次，5 min/次。加入相應(yīng)二抗10 mL室溫孵育1 h，TBST洗膜3次，5 min/次。配制發(fā)光液，凝膠成像儀顯影成像。

1.2.6 免疫熒光 在12孔板中將處理結(jié)束的細(xì)胞爬片用預(yù)冷的PBS清洗，用4%（體積分?jǐn)?shù)）的多聚甲醛在37℃培養(yǎng)箱中避光固定45 min，TBST清洗玻片5次，1 min/次，用含0.5%（體積分?jǐn)?shù)）Triton X-100、5%（體積分?jǐn)?shù)）FBS（PBS配制）的封閉液進(jìn)行封閉打孔，室溫避光封閉打孔45 min，棄去封閉液，將爬片從孔板中取出，放在載玻片上，滴加稀釋好的一抗，完全覆蓋爬片并放入濕盒，4℃過(guò)夜。棄去一抗，PBST清洗爬片5次，1 min/次。加熒光二抗至完全覆蓋爬片，濕盒中室溫避光孵育45 min，PBST清洗爬片5次，1 min/次，滴加DAPI避光孵育30 min，PBST清洗爬片5次，1 min/次。吸干爬片上的液體，用含抗淬滅劑的封片液封片，激光共聚焦觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 過(guò)表達(dá)HSPA1A對(duì)癌細(xì)胞增殖的影響

采用作者所在實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建成功的HSPA1A大腸桿菌重組載體（含有GFP標(biāo)簽（非融合表達(dá)）的pEB），將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HeLa、HT29、PC3細(xì)胞，48 h后收集pEB細(xì)胞蛋白質(zhì)，通過(guò)Western Blot驗(yàn)證能否在這3個(gè)細(xì)胞中表達(dá)成功，Western Blot顯示HSPA1A在轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的細(xì)胞中表達(dá)成功。

將驗(yàn)證過(guò)的質(zhì)粒分別再次轉(zhuǎn)染HeLa、HT29、PC3，轉(zhuǎn)染24 h后拍攝細(xì)胞圖片，48 h后進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)。24 h后通過(guò)細(xì)胞圖片（見(jiàn)圖1~圖3）可以明顯觀察到瞬時(shí)轉(zhuǎn)入HSPA1A質(zhì)粒后癌細(xì)胞密度增加，細(xì)胞增殖加快。48 h后通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)可知轉(zhuǎn)染后活細(xì)胞數(shù)目增多（見(jiàn)圖4），進(jìn)一步證明了HSPA1A能夠加快腫瘤細(xì)胞的增殖。

圖1 HeLa轉(zhuǎn)染pEB空載（a）與HSPA1A（b）后的細(xì)胞形態(tài)Fig.1 Cell morphology after pEB (left)and HSPA1A(right)transferred into HeLa

圖3 PC3轉(zhuǎn)染pEB空載（a）與HSPA1A（b）后的細(xì)胞形態(tài)Fig.3 Cell morphology after pEB (left)and HSPA1A(right)transferred into PC3

圖4 HeLa、HT29、PC3轉(zhuǎn)染pEB空載與HSPA1A后48 h的細(xì)胞存活率Fig.4 Cell viability of HeLa,HT29,PC3 transfected pEB at no load(left)and HSPA1A(right)for 48 h

圖2 HT29轉(zhuǎn)染pEB空載（a）與HSPA1A（b）后的細(xì)胞形態(tài)Fig.2 Cell morphology after pEB (left)and HSPA1A(right)transferred into HT29

2.2 免疫熒光

為探究HSPA1A在腫瘤細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位，進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)染48 h后進(jìn)行免疫熒光處理。pEB載體帶GFP基因，因此轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞帶彌散性綠色熒光。HSPA1A蛋白用紅色熒光標(biāo)記，細(xì)胞核用DAPI進(jìn)行染色。

轉(zhuǎn)染HSPA1A后，紅色熒光標(biāo)記的HSPA1A停留于細(xì)胞質(zhì)中，并未與細(xì)胞核重疊，可得出結(jié)論HSPA1A主要在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中發(fā)揮作用（見(jiàn)圖5）。

圖5 3種細(xì)胞轉(zhuǎn)染pEB空載與HSPA1A的免疫熒光Fig.5 Immunofluorescence of three cells transfected pEB and HSPA1A

2.3 周期實(shí)驗(yàn)

由于細(xì)胞周期各階段的DNA含量不同，而PI可以與DNA結(jié)合，因此其熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)PI熒光強(qiáng)度可以估計(jì)細(xì)胞內(nèi)DNA含量繼而確定細(xì)胞周期。

HT29細(xì)胞轉(zhuǎn)染pEB空載后，位于G1期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為65.38%；位于G2期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為0.54%；位于S期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為34.08%。轉(zhuǎn)染HSPA1A后位于G1期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為57.15%；位于G2期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為1.69%；位于S期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為41.16%（見(jiàn)圖6）。

圖6 HT29轉(zhuǎn)染pEB空載（a）與HSPA1A（b）后的細(xì)胞周期Fig.6 Cell cycle after HT29 transfection of pEB empty(left)and HSPA1A(right)

HeLa細(xì)胞轉(zhuǎn)染pEB空載后，位于G1期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為53.71%；位于G2期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為1.58%；位于S期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為44.72%。轉(zhuǎn)染HSPA1A后位于G1期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為48.26%；位于G2期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為1.40%；位于S期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為50.34%（見(jiàn)圖7）。

圖7 HeLa轉(zhuǎn)染pEB空載（a）與HSPA1A（b）后的細(xì)胞周期Fig.7 Cell cycle after HeLa transfection of pEB empty(left)and HSPA1A(right)

PC3細(xì)胞轉(zhuǎn)染pEB空載后，位于G1期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為56.42%；位于G2期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為2.38%；位于S期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為41.20%。轉(zhuǎn)染HSPA1A后位于G1期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為53.46%；位于G2期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為2.71%；位于S期的細(xì)胞占所有細(xì)胞數(shù)目的比例為43.83%（見(jiàn)圖8）。

圖8 PC3轉(zhuǎn)染pEB空載（a）與HSPA1A（b）后的細(xì)胞周期圖Fig.8 Cell cycle after PC3 transfection of pEB empty(left)and HSPA1A(right)

G1期稱為DNA合成前期，由細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)可知HSPA1A過(guò)表達(dá)后，處于G1期的細(xì)胞明顯變少。大多數(shù)細(xì)胞處于S期和G2/M期即DNA合成中后期。因此，過(guò)表達(dá)HSPA1A可以加速腫瘤細(xì)胞的G1期。

2.4 HSA1A對(duì)周期蛋白的影響

通過(guò)周期實(shí)驗(yàn)確定，HSPA1A能夠加速細(xì)胞的G1期，推測(cè)可能是腫瘤細(xì)胞增殖加快的原因。為探究過(guò)表達(dá)HSPA1A以后對(duì)G1/S檢查點(diǎn)相關(guān)的細(xì)胞周期蛋白（cyclin D1，cyclin E1）、細(xì)胞周期蛋白依賴激酶（CDK4、CDK6、CDK2）的影響，對(duì)3種腫瘤細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染48 h后，收集細(xì)胞進(jìn)行Western Blot。

結(jié)果表明過(guò)表達(dá)HSPA1A在細(xì)胞中可以促進(jìn)cyclin D1、cyclin E1、CDK4、CDK6、CDK2的表達(dá)（見(jiàn)圖9）。cyclin D1、cyclin E1、CDK4、CDK6、CDK2作為確定的G1/S檢查點(diǎn)相關(guān)周期蛋白和周期蛋白依賴性激酶，其表達(dá)量增多，可以幫助細(xì)胞周期加快。其 中HeLa細(xì) 胞 中CDK4、CDK6、cyclin D1、cyclin E1明顯增加，HT29中CDK2、CDK4、CDK6、cyclin D1、cyclin E1均發(fā)生明顯上調(diào)，PC3中CDK4發(fā)生明顯上調(diào)。推測(cè)HSPA1A可能促進(jìn)cyclin D1和CDK4/CDK6的結(jié)合和（或）cyclin E1和CDK2的結(jié)合，HSPA1A作為伴侶蛋白質(zhì)可能通過(guò)穩(wěn)定cyclin D1-CDK4/CDK6和（或）cyclin E1-CDK2這兩條途徑中相關(guān)蛋白質(zhì)，上調(diào)相應(yīng)蛋白質(zhì)含量，使細(xì)胞增殖加快。

圖9 HSPA1A對(duì)周期蛋白相關(guān)蛋白質(zhì)的影響Fig.9 Effect of HSPA1A on cyclins and CDKs

2.5 討論

當(dāng)細(xì)胞受到應(yīng)激時(shí)，細(xì)胞中的應(yīng)激誘導(dǎo)型HSP70發(fā)揮保護(hù)細(xì)胞的作用[13]。HSP70家族由幾個(gè)高度同源的成員組成[14]，包括HSPA1A、HSPA5、HSPA8、HSPA9[15]。HSPA1A定位與細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中[16]，HSPA5定位于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，是一個(gè)鈣離子結(jié)合蛋白質(zhì)，HSPA8蛋白質(zhì)均勻分布于整個(gè)細(xì)胞，HSPA9作為線粒體伴侶蛋白質(zhì)，主要定位于線粒體中[17]。有證據(jù)表明HSP70在癌癥中過(guò)表達(dá)，這種伴侶蛋白質(zhì)的高表達(dá)與腫瘤的產(chǎn)生和預(yù)后不良反應(yīng)有關(guān)[18]。例如，HSP70過(guò)表達(dá)是早期肝細(xì)胞和前列腺癌的標(biāo)志，也是大腸癌和乳腺癌晚期癌細(xì)胞結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)志之一[19]。

目前HSPA1A對(duì)細(xì)胞的增殖作用及相關(guān)機(jī)制尚未有明確的研究。已有的研究表明，外源性的HSPA1A可以促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。HSPA1A通過(guò)TLR2和TLR4信號(hào)傳導(dǎo)促進(jìn)H22肝癌細(xì)胞的增殖，推測(cè)HSPA1A充當(dāng)TLR2和TLR4的內(nèi)源性配體，以促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)[20]。

3 結(jié) 語(yǔ)

本研究發(fā)現(xiàn)HSPA1A可以促進(jìn)PC3、HT29、HeLa這3種腫瘤細(xì)胞增殖。通過(guò)免疫熒光發(fā)現(xiàn)HSPA1A主要在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)揮增殖作用，PI染色發(fā)現(xiàn)HSPA1A主要加速了腫瘤細(xì)胞的G1期。在過(guò)表達(dá)HSPA1A后，發(fā)現(xiàn)G1/S檢查點(diǎn)相關(guān)的周期蛋白和周期蛋白依賴激酶表達(dá)量均上調(diào)。腫瘤細(xì)胞中，基礎(chǔ)氧化應(yīng)激與蛋白質(zhì)合成均有上調(diào)，HSPA1A作為伴侶蛋白質(zhì)，可以幫助蛋白質(zhì)正確折疊，同時(shí)穩(wěn)定蛋白質(zhì)構(gòu)象。因此，腫瘤中高表達(dá)HSPA1A可能通過(guò)穩(wěn)定cyclin D1-CDK4/CDK6和（或）cyclin E1-CDK2這兩條途徑中的相關(guān)蛋白質(zhì)幫助細(xì)胞加速通過(guò)G1/S檢查點(diǎn)。

HSPA1A能夠有效促進(jìn)癌細(xì)胞增殖，因此通過(guò)尋找靶向HSPA1A的藥物有望抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，對(duì)于臨床腫瘤的治療有重要作用。但是HSPA1A在細(xì)胞質(zhì)中起到伴侶作用，以及在其他腫瘤細(xì)胞中的作用尚待研究。