張四普 鄧楠茜 胡青霞 魯云風 牛佳佳

摘 要：為了解決芥藍常溫貯藏下出現(xiàn)的貨架期短、葉片黃化和品質下降的問題，采用檸檬酸（2%）和植酸（3%）復合保鮮劑結合1-MCP處理的復合保鮮方法，研究芥藍常溫貯藏過程中品質的變化。結果表明，常溫貯藏6 d時，對照比處理的失重率、相對電導率、丙二醛（MDA）含量分別高7.15%、23.55%、26.98%，維生素C含量低41.7%，葉片和莖薹的過氧化物酶（POD）活性，對照比處理分別高21.58%和34.17%，處理呼吸峰值較對照晚2 d出現(xiàn)。芥藍常溫貯藏期間，采用檸檬酸和植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理能有效抑制SPAD值、維生素C含量、失重率的降低，降低其MDA含量以及POD活性，從而更好地保持芥藍的原有品質和延長貨架期。

關鍵詞：芥藍;檸檬酸;植酸;1-MCP;復合保鮮劑;常溫

中圖分類號：S635 文獻標志碼：A 文章編號：1673-2871（2021）05-057-07

Effects of citric acid and phytic acid combined with 1-MCP on storage quality of kale at room temperature

ZHANG Sipu1， DENG Nanxi2， HU Qingxia2， LU Yunfeng3， NIU Jiajia1

（1. Horticulture Research Institute of Henan Agricultural Science Academy， Zhengzhou 450002， Henan， China; 2. College of Horticulture， Henan Agricultural University， Zhengzhou 450002， Henan， China; 3. Nanyang Normal University， Nanyang 473061， Henan， China）

Abstract： In order to solve the problems of short shelf life， yellow leaves and reduced quality of Chinese kale stored at room temperature， a compound preservative of citric acid（2%） and phytic acid（3%） combined with 1-MCP was used to study the changes of storage quality of Chinese kale. The results showed that when stored at room temperature for 6 days， the weight loss rate， relative conductivity and MDA content of contrast were 7.15%， 23.55% and 26.98% higher than those of the treament， and the vitamin C content was 41.7% lower than that of the treatment. The POD activitives of contrast of leaf and stem were 21.58% and 34.17% higher than those of the the treament， and the respiratory peak of the treament appeared 2 days later than contrast.During the storage of kale at room temperature， the citric acid and phytic acid combined with 1-MCP can effectively inhibit the? decrease of SPAD vaule， VC content and the weight loss rate， reduce the production of MDA and POD activities， so as to maintain the original quality and extend the shelf life.

Key words： Kale; Citric acid; Phytic acid; 1-MCP; Compound preservative; Normal temperature

芥藍（Brassica alboglabra L. H. Bailey）原產于我國南部，是我國華南地區(qū)的特有蔬菜之一，色澤翠綠、質地脆嫩、清甜爽口且營養(yǎng)豐富，一直深受粵港澳地區(qū)人們的青睞，同時芥藍也不斷出口日本、東南亞和其他一些國家和地區(qū)，是我國優(yōu)質創(chuàng)匯蔬菜之一[1]。芥藍適應性強，栽培簡易，抗性強，病蟲害少，產量較高，生長期較長，是一種值得華南乃至北方推廣的薹用蔬菜和速生葉菜[2]。芥藍以鮮銷為主，貯藏期短，易在短時間內出現(xiàn)褐變以及品質劣變，尤其在常溫條件下，芥藍受到外界不良環(huán)境條件等影響更易腐爛變質，造成較大經濟損失。因此，尋找能延長芥藍貨架期、維持芥藍采后品質的方法或保鮮劑成為當下的主要任務。目前芥藍采后保鮮技術主要以低溫處理和保鮮劑處理保鮮為主，而保鮮劑處理采后芥藍能起到殺菌、抗氧化以及抑制呼吸等多重作用。

檸檬酸是一種具有殺菌以及阻止乙烯產生作用的有機酸[3]，主要參與植物組織的呼吸代謝等多種重要生理活動，可防止加工過程中果蔬褐變和微生物污染，從而起到延長果蔬貨架期和保持其相關品質的作用。曹建康[4]在關于鴨梨果實的研究中就提到檸檬酸能有效延緩果實劣變、抑制果實表皮褐變、果柄失水干枯變黑和腐爛的發(fā)生。

植酸（phytic acid，環(huán)己六醇六磷酸二氫酯）是一種呈強酸性并具有極強螯合能力的維生素B族的一種肌醇六磷酸酯，亦是提取自谷物種子加工副產品中的一種天然物質。生產成本低，原料資源豐富，安全無毒、無污染，可用作抗氧化劑、發(fā)酵助劑等食品添加劑，并具有良好的保鮮效果，因而被大量用于食品工業(yè)，應用前景極為廣闊[5-6]。

植物任何部位都有可能合成乙烯。而乙烯作為果蔬保鮮過程中極為關鍵的因子，它能促進果蔬的后熟、衰老和品質劣變，加快葉綠素的分解，促進果蔬貯藏期間轉黃。要使果蔬保持新鮮，必須抑制乙烯的產生。1-甲基環(huán)丙烯（1-MCP）是近年發(fā)現(xiàn)的一種乙烯受體抑制劑，它可以特異性地與乙烯受體結合，阻斷乙烯與其受體的正常結合，使植物組織產生不敏感性，從而有效地阻止內源乙烯的合成和外源乙烯誘導作用的發(fā)揮[7]，降低果蔬貯藏期間的呼吸強度和乙烯釋放速率，保持果蔬較高的硬度和可溶性固形物含量，從而延長貯藏期[8]。因此，1-MCP在園藝產品貯藏中有潛在的應用價值。目前，在蘋果[9]、梨[10]等以及鮮切花[11]的保鮮中1-MCP都得到了廣泛的應用且取得了明顯效果，但在蔬菜上的應用研究尚處于起步階段。

筆者采用植酸、檸檬酸和1-MCP復合保鮮處理的方式，利用檸檬酸的殺菌功效、植酸抗氧化和1-MCP抑制呼吸的作用，通過復合保鮮處理手段提高芥藍常溫貨架期商品率。試驗于2019年在河南省農業(yè)科學院園藝研究所進行，針對芥藍采后不耐貯藏、貨架期短的問題，使用檸檬酸和植酸復合保鮮劑結合1-MCP常溫條件下處理，測定芥藍品質方面相關指標（葉綠素含量、維生素C含量、黃化率、膜透性等），以期保持芥藍常溫貯藏品質，為芥藍采后保鮮提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料為美美102芥藍（臺灣合歡農產有限公司），中熟黃花芥藍。于2019年5月28日取自河南省農業(yè)科學院滎陽蔬菜基地（滎陽市王村鎮(zhèn)小村村），試驗在河南省農業(yè)科學院園藝研究所貯藏保鮮生理實驗室進行。挑選生長狀態(tài)良好，生長期、顏色一致且飽滿、花蕾未開的芥藍，采收當天即運回實驗室進行處理。芥藍均分為兩大組，分別為對照組和處理組，每一組所含大小棵芥藍數(shù)量相等（大小芥藍品種相同;兩者區(qū)別在于大棵芥藍葉片大且脈絡粗硬，人們只食用其梗莖和花薹部分;小棵芥藍葉片較小且梗細長，通體鮮嫩， 除根部外均可食用）。處理組：用復合保鮮劑（檸檬酸和植酸比例分別為2%和3%）進行30 s的蘸莖處理，然后置于內襯薄膜袋的紙箱中，每袋芥藍質量約5 kg，加入1袋清水浸濕的小包裝1-MCP（聰明鮮 AgroFresh，每袋0.625 g，有效成分質量分數(shù)0.014%），處理劑量為1.5 ?g·L-1，以清水處理作為對照，貯藏溫度為（25±1）℃，相對濕度60%～80%。

1.2 方法

貯藏期間每間隔1～2 d分別觀察和取樣，每次取樣20棵芥藍，測定失重率、葉綠素含量、呼吸強度、細胞膜透性等指標，取芥藍中間部位葉片與薹莖，液氮速凍后用錫紙包好，再分別裝入自封袋，做好標記，置于-40 ℃低溫冰箱，用于后期相關酶活性指標的測定。每個處理3次重復。

1.2.1 失重率的測定 芥藍質量損失的測定選用稱取質量的方法。3次重復，求平均值。可通過公式計算得到：失重率/%=（M-m）/M×100。

式中：M為芥藍貯藏前的質量，m為芥藍貯藏后的質量。

1.2.2 SPAD值的測定 芥藍分大小棵測定，隨機選取各20棵芥藍，在葉片中間部位進行測定，每個處理測定20次，3次重復。SPAD（Soil and Plant Analyzer Development）值用SPAD 502葉綠素儀測定。SPAD=Klg（IRt/IR0）/（Rt/R0），式中：K為常數(shù);IRt為接收到的經過葉片的940 nm紅外光照度，IR0為發(fā)射的紅外光照度;Rt為接收到的經過葉片的650 nm紅光照度，R0為發(fā)射的紅光照度。SPAD值越高，葉綠素含量越高。

1.2.3 呼吸強度的測定 參照劉佰霖的方法[12]，略作修改。取一定質量芥藍稱質量后放入密封罐中，于貯藏溫度下密封2 h后抽氣1 mL，采用SP-9890氣相色譜儀（山東，魯南瑞虹儀器公司）測定呼吸強度（mg·kg-1·h-1）。

1.2.4 細胞膜透性測定 隨機取20個棵芥藍，用打孔器（直徑為0.5 mm）在葉片中間部位制取40個圓片，用蒸餾水漂洗兩次，取10個小圓片轉入含25 mL蒸餾水的試管，靜置30 min后用雷磁DDS-11A電導率儀測定浸泡液電導率，然后將試管放入沸水水浴15 min，流水冷卻至25 ℃，測定煮沸后葉片的電導率。每處理重復測定3次。

相對電導率/%=（30 min后測定的值/煮沸15 min后的值）×100。

1.2.5 可溶性總糖含量的測定 參照曹建康的方法[13]（略做修改）測定可溶性總糖質量分數(shù)（mg·g-1）。稱取芥藍凍樣0.1 g（葉片與薹莖分別進行測定），加入1.2 mL 80%乙醇溶液，80 ℃水浴30 min，其間不時搖動，結束后將溶液冷卻到室溫，在3500 r·min-1轉速下離心10 min，取上清液轉入5 mL試管，再向沉淀中加入1.2 mL 80%乙醇，如上步驟重復浸提沉淀2次，將上清液合并于5 mL試管，加入80%乙醇定容至刻度5 mL，然后稀釋20倍，取2 mL于10 mL試管中，加入5 mL的蒽酮-H2SO4試劑混勻，100 ℃水浴10 min，流水冷卻至室溫，測定620 nm波長下的吸光度（A590 雙光束紫外線可見分光光度計，翱藝儀器有限公司），每個處理重復測定3次。

1.2.6 維生素C含量的測定 參照劉紹俊[14]的方法（略做修改）測定維生素C質量濃度（mg·100 g-1）。準確稱取2 g生菜葉片凍樣，加入5 mL草酸-EDTA（0.05 mol·L-1）進行研磨，勻漿液轉入10 mL的試管內，用草酸-EDTA溶液定容至10 mL，用濾紙過濾，取2 mL濾液，1000 r·min-1轉速下離心10 min，取1 mL上清液轉入5 mL的試管，順序加入偏磷酸醋酸溶液（3%）、硫酸（5%）和鉬酸銨（5%）各0.1、0.2和0.4 mL，振蕩搖勻后，蒸餾水定容至5 mL，靜置15 min，測定705 nm處的吸光值。每處理重復測定3次。

1.2.7 丙二醛含量的測定 參照張四普等[10]的方法，略有改動。芥藍葉片凍樣0.4 g，研磨成粉，加入預冷2 mL 10%TCA，1000 r·min-1轉速下離心20 min，在具螺口的試管中加入1 mL樣品提取液、1 mL 0.5%的TBA，沸水浴反應20 min，結束后迅速冰浴冷卻，于4000 r·min-1轉速下離心20 min;取上清液于波長532、600、450 nm處測量OD值（A590 雙光束紫外線可見分光光度計，翱藝儀器有限公司），以蒸餾水代替酶液為空白對照，每個處理重復測定3次。

結果計算：MDA（mmol·g-1）=[6.452×（D532-D600）-0.559×D450]×Vt/Vs×W （Vt：提取液總體積，Vs：測定用提取液體積，W：樣品鮮質量）。

1.2.8 POD活性的測定 參照張四普等[10]的方法，略有改動。取0.5 g芥藍凍樣（葉片與薹莖分別進行試驗），加入預冷的1 mL 0.1 mol·L-1的磷酸緩沖液（pH 6.8）和0.2 g聚乙烯吡咯烷酮（PVP），充分研磨，以10 000 r·min-1轉速于4℃下離心20 min，取上清液用于酶活性的測定。1 mL的反應體系中依次加入0.6 mL的0.46% H2O2、0.2 mL的4%（過飽和）愈創(chuàng)木酚、0.2 mL粗酶液，用槍吹打混勻，酶液加入后計時30 s開始比色，測定其OD470值在180 s內的變化量，每分鐘變化0.01為一個酶活單位U，酶的活性以U·g-1·min-1表示，每個處理重復測定3次。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用Excel 2010處理數(shù)據(jù)和作圖，使用SPSS 19.0進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 復合保鮮處理對芥藍失重率的影響

由圖1可知，隨著貯藏時間的延長，芥藍的失重率呈上升趨勢，處理的失重率在常溫貯藏各時期均低于對照，且對照和處理均差異顯著。貯藏1 d時，對照和處理的失重率分別為20.39%和5.49%，對照是處理的3.71倍;貯藏2 d時，對照和處理的失重率分別為30.89%和18.68%，對照比處理高65.36%;貯藏4 d時，對照和處理的失重率分別為39.17%和29.65%，對照比處理組高32.10%;貯藏5 d時，對照和處理的失重率分別為46.89%和39.26%;貯藏6 d時，對照和處理的失重率分別為58.75%和54.83%，對照比處理組高7.15%。結果表明，檸檬酸和植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理能有效抑制芥藍失水，降低失重率，延長芥藍新鮮程度。

2.2 復合保鮮處理對芥藍SPAD值的影響

SPAD值是衡量一株植物葉綠素相對含量的一個參數(shù)，SPAD值越大代表植物綠色程度越高。由圖2可知，剛采收時小棵和大棵芥藍的SPAD值分別為66.70和70.22;貯藏2 d后，小棵芥藍對照和處理的SPAD值分別為58.82和58.79，對照比處理高0.03，大棵芥藍對照和處理的SPAD值分別為66.80和67.01，處理比對照高0.21，且差異顯著，隨常溫時間延長，芥藍由于葉綠素降解SPAD值含量逐漸下降。貯藏4 d時，小棵芥藍和大棵芥藍處理比對照的SPAD值分別高12.33和7.85，對照和處理均差異顯著;貯藏至6 d，小棵芥藍和大棵芥藍處理比對照的SPAD值分別高5.13和2.7，小棵芥藍對照與處理差異極顯著。結果說明，檸檬酸和植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理能有效抑制常溫貯藏條件下芥藍SPAD值的降低，起到護綠的作用，對小棵芥藍的護綠效果優(yōu)于大棵。

2.3 復合保鮮處理對芥藍呼吸強度的影響

由圖3可知，剛采收的芥藍呼吸強度為209.04 mg·kg-1·h-1;貯藏2 d時，對照和處理呼吸強度分別為224.61、126.36 mg·kg-1·h-1，對照比處理高77.75%;貯藏4 d，對照和處理呼吸強度分別為207.87、252.45 mg·kg-1·h-1，處理比對照高21.45%;貯藏6 d，對照和處理分別為189.57、208.44 mg·kg-1·h-1，處理比對照高9.05%;在貯藏各時期，對照與處理均達到差異顯著水平。對照呼吸強度峰值在貯后2 d時出現(xiàn)，處理呼吸強度峰值在4 d時出現(xiàn)，處理峰值較對照延遲2 d。結果表明，檸檬酸和植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理能有效抑制常溫貯藏前期的呼吸強度，延緩呼吸峰值出現(xiàn)。

2.4 復合保鮮處理對芥藍相對電導率的影響

相對電導率是衡量細胞膜透性的重要指標，值越大表示電解質的滲漏量越多，細胞膜受害程度越重。隨貯藏時間延長，芥藍的相對電導率呈上升趨勢（圖4），但貯藏各時期處理和對照差異均不顯著。剛采收的芥藍相對電導率為8.53%;貯藏2 d后，對照比處理高21.12%，即對照和處理的相對電導率分別為13.13%和10.84%;相對電導率貯藏2 d之前上升迅速，2 d后增加速度緩慢，貯藏4 d，對照和處理分別為13.84%和11.04%，對照比處理高25.36%;貯藏6 d，對照和處理分別為13.85%和11.21%，對照比處理高23.55%。結果表明，檸檬酸和植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理可一定程度地抑制芥藍相對電導率的升高。

2.5 復合保鮮處理對芥藍可溶性總糖含量的影響

由圖5可知，整個貯藏期間，芥藍葉片與莖薹可溶性總糖含量呈下降趨勢，莖薹的可溶性總糖含量高于葉片。剛采收的芥藍葉片和莖薹可溶性總糖質量分數(shù)分別為4.38和5.20 mg·g-1;貯藏2 d，葉片對照和處理的分別為4.34和4.36 mg·g-1，莖薹對照和處理的分別為5.08和5.13 mg·g-1，莖薹對照和處理差異顯著;貯藏4 d，葉片對照和處理的分別為4.31、4.32 mg·g-1，莖薹對照和處理的分別為5.10、5.13 mg·g-1，差異均不顯著;貯藏6 d，葉片和莖薹的可溶性總糖質量分數(shù)處理比對照分別高0.04 mg·g-1和0.11 mg·g-1。結果表明，芥藍從剛采收到常溫貯藏6 d后，莖薹與葉片之間可溶性總糖含量變化趨勢一致，然而，在經過復合保鮮劑處理后，莖薹和葉片的可溶性糖含量下降速率低于對照，結果表明檸檬酸和植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理可有效抑制芥藍葉片可溶性總糖含量的下降。

2.6 復合保鮮處理對芥藍維生素C含量的影響

由圖6可知，芥藍在常溫貯藏過程中，隨貯藏時間延長，維生素C含量呈下降趨勢。剛采收時芥藍維生素C質量分數(shù)為14.83 mg·100 g-1;貯藏2 d后，迅速下降，對照和處理分別為9.00和9.65 mg·100 g-1，對照下降幅度較大，處理比對照高7.2%;到4 d時，對照和處理的下降幅度差值進一步拉大，處理比對照高15.6%，且差異顯著;貯藏6 d時，對照和處理分別為5.91和8.38 mg·100 g-1，處理比對照高41.7%，差異極顯著。結果表明，檸檬酸和植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理能有效抑制芥藍采后維生素C含量的降低，使芥藍具有較強的抗氧化性。

2.7 復合保鮮處理對芥藍MDA含量的影響

MDA含量可以反映植物受逆境傷害的程度，含量越高受傷害越嚴重。由圖7可知，隨著貯藏時間的延長，芥藍MDA含量呈上升趨勢，對照MDA含量始終高于處理，且差異均達到顯著水平。剛采收時芥藍MDA質量摩爾濃度為1.13 mmol·g-1;貯藏2 d時，對照和處理的分別為1.98和1.62 mmol·g-1，對照比處理高22.22%;貯藏4 d時，對照和處理的分別為2.75和1.92 mmol·g-1，對照比處理高43.23%，差異極顯著;貯藏6 d時，對照和處理的分別為3.20和2.52 mmol·g-1，對照比處理高26.98%，差異極顯著。上述結果表明，檸檬酸和植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理能有效抑制芥藍MDA含量的累積。

2.8 復合保鮮處理對芥藍POD活性的影響

由表1、2可知，隨著貯藏時間的延長，芥藍葉片和莖薹的POD活性均呈上升趨勢，處理的POD活性在常溫貯藏各時期均低于對照，不同貯藏時期差異均顯著。剛采收時芥藍葉片POD活性為501.36 U·g-1·min-1;貯藏2 d時，對照和處理POD活性分別為800.40、610.30 U·g-1·min-1，對照比處理高31.15%;貯藏4 d，對照比處理高35.88%;貯藏6 d，對照和處理POD活性較采收時升高3.45倍和2.65倍，分別為2 230.00和1 834.17 U·g-1·min-1，對照比處理高21.58%。芥藍莖薹的POD活性比葉片的高，采收時莖薹的POD活性為820.36 U·g-1·min-1;貯藏2、4、6 d時對照的POD活性分別為1 136.12、2 167.58和3 163.28 U·g-1·min-1，處理的POD活性分別為933.8、1 717.52、2 357.60 U·g-1·min-1，貯藏結束時對照比處理極顯著高34.17%。POD活性在老化組織中較高，可作為組織老化的一種生理指標。結果表明，檸檬酸和植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理能有效抑制芥藍葉片和莖薹的POD活性，使芥藍保鮮較高的新鮮程度。

3 討論與結論

芥藍在常溫貯藏期間，存在葉片變黃、萎蔫和腐爛而品質下降的問題。檸檬酸和植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理能對采后芥藍起多重保鮮效果，采后芥藍在復合保鮮的處理下保持較高新鮮度，品質比對照更好，主要有以下原因。

植酸與檸檬酸復配保鮮劑處理芥藍切口處，多元有機酸植酸和檸檬酸可提供一個低pH環(huán)境，抵御切口外界病菌的入侵[15]，保鮮劑也可在切口表面形成一層薄膜，可一定程度地防止水分散失的作用;同時檸檬酸是一種重要的有機酸，參與植物的呼吸代謝等生理活動[16]，已在杧果、鴨梨、大五星枇杷等果品上試驗并取得良好的保鮮效果[17-19];植酸是有效的金屬絡合劑，可與Ca2+、Mg2+等多種金屬離子高度絡合金屬離子的特性，使促進氧化作用的金屬離子因螯合失去活性，由此產生良好的抗氧化性[20]。吳國欣[21]采用植酸處理使荔枝的果皮保持良好的紅色色澤，抑制果皮褐變和保持果肉總糖和維生素C含量，添加檸檬酸復配保鮮劑有協(xié)同增效的作用。王陸玲[22]應用植酸對草莓保鮮，可以延緩果實中維生素C的降解，保持果實中可溶性固形物和酸含量。試驗中采用了植酸與檸檬酸復配保鮮劑，使芥藍在常溫貯藏6 d時，小棵芥藍處理的SPAD值較對照高33.8%，大棵芥藍處理較對照高13.5%，處理的維生素C含量比對照高41.7%，說明復合處理起到了良好的護綠作用，同時處理后的芥藍維生素C含量高，具有更強的抗氧化性。

1-MCP作為一種乙烯競爭抑制劑，在多種果品上廣泛應用[23-25]。試驗中常溫貯藏的芥藍，對照前期呼吸強度高，采用復合保鮮劑結合1-MCP處理后能有效抑制呼吸作用，貯藏2 d時，處理呼吸強度比對照低43.7%，呼吸高峰的出現(xiàn)時間較對照延遲2 d。處理呼吸作用受到抑制，生理代謝速度變慢，致使芥藍可溶性總糖的降解速率變緩以及POD活性、MDA含量降低，表現(xiàn)為處理的芥藍葉片綠色程度高且葉片挺立，即SPAD值高，失重率始終低于對照。這與杜傳來等[26]采用1-MCP處理在青菜保鮮研究上的結果一致，處理使葉菜保持較高的葉綠素和維生素C含量，減少MDA含量的積累。

檸檬酸與植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理在3種保鮮劑成分共同作用下，抑制芥藍常溫貯藏期間SPAD值、維生素C含量、可溶性總糖含量的降低以及失重率的升高，抑制貯藏前期呼吸強度，延遲呼吸高峰出現(xiàn)，降低細胞膜透性、MDA含量以及POD活性。檸檬酸與植酸復合保鮮劑結合1-MCP處理芥藍能明顯保持其采后品質、延長貨架期。

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