王紅娟 王芳 王亞桃

摘要 目的：為了得到蒼耳子油脂質(zhì)體的最佳制備工藝。方法：以卵磷脂和膽固醇為膜材，采用薄膜分散水化法制備脂質(zhì)體，利用游離藥物與含藥脂質(zhì)體的重量差異通過超速離心法分離，并計(jì)算其包封率。根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)得對(duì)其包封率有顯著影響的因素，以正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選出制備脂質(zhì)體的最佳制備方法。結(jié)果：通過正交試驗(yàn)得到最優(yōu)方法為：卵磷脂：膽固醇3∶1、蒼耳子油：卵磷脂1∶7、水化溶液體積20 mL，此條件下測得其包封率為68.0%。結(jié)論：該方法所得脂質(zhì)體包封率達(dá)60%以上，比較穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞 蒼耳子油;脂質(zhì)體;包封率;正交試驗(yàn)

Study on Preparation Technology of Xanthii Fructus Oil Liposomes

WANG Hongjuan，WANG Fang，WANG Yatao

（Gansu Medical College，Pingliang 744000，China）

Abstract Objective：In order to obtain the optimal preparation process of Xanthii Fructus oil liposomes.Methods：Lecithin and cholesterol was used as membrane materials，liposomes were prepared by a thin film dispersion hydration method.The weight difference between free drugs and drug-containing liposomes was used to separate them by ultracentrifugation，and their encapsulation rates were calculated.According to the single factor experiment，the factors that have a significant effect on its encapsulation efficiency were obtained.The best method for preparing liposomes was screened by orthogonal test design.Results：The optimal method obtained through orthogonal test was：lecithin：cholesterol 3∶1，Xanthii Fructus oil：lecithin 1∶7，and the volume of the hydration solution was 20 mL.Under this condition，the encapsulation rate was 68.0%.Conclusion：The encapsulation rate of liposomes obtained by this method is more than 60%，which is relatively stable.

Keywords Xanthii Fructus Oil; Liposome; Encapsulation efficiency; Orthogonal test

中圖分類號(hào)：R283文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.02.007

蒼耳子為菊科植物蒼耳（Xanthium sibiricum Patr.et Widd.）干燥成熟帶總苞的果實(shí)，其中油脂是蒼耳子的主要成分，油脂中主要含有酚酸類成分，如綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸C等[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明蒼耳子具有抗菌、抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛、降血糖、抗過敏等作用且對(duì)鼻炎具有很好的療效[2-4]。脂質(zhì)體是一種具有類似生物膜的雙分子層結(jié)構(gòu)的超微球形載體制劑，它主要用于藥物的制備，即利用脂質(zhì)體溶于細(xì)胞膜的性質(zhì)，將藥物送入細(xì)胞內(nèi)部，保護(hù)定向至某治療的靶器官或組織中[5-7]，因此脂質(zhì)體作為鼻腔給藥的一種新型劑型其具有以下優(yōu)點(diǎn)：將藥物包封入脂質(zhì)體后鼻腔給藥，不僅能有效地減少藥物對(duì)鼻腔的刺激性和毒性，增加藥物療效，并可使藥物通過磷脂雙分子層幻世控制釋放，克服以往氣霧劑吸收快及必須頻繁給藥的缺陷[8-9]。本研究主要選用薄膜分散水化法，以卵磷脂和膽固醇為膜材對(duì)蒼耳子油進(jìn)行包合，采用超速離心法測定其包封率?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 雙光束紫外分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司，型號(hào)：SP-1920），電子分析天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：FA2004B），pH酸度計(jì)（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司，型號(hào)：PB-10），超聲波清洗機(jī)（天津雯特賽恩斯儀器有限公司，型號(hào)：AS系列），循環(huán)水式多用真空泵[陜西太康生物科技有限公司，型號(hào)：SHB-A（Ш）]，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠，型號(hào)：RE-52），數(shù)碼恒溫磁力攪拌器（常州國華電器有限公司，型號(hào)：HJ-3），臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（長沙湘儀離心機(jī)器儀器有限公司，型號(hào)：H-1605R），紫外可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司，型號(hào)：SP-756P）。

1.2 試劑 甲醇（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20180808），乙醚（分析純，天津津東天正精細(xì)化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20170326），卵磷脂（中國華東師范大學(xué)化工廠，批號(hào)：20180425），膽固醇（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20170909），磷酸氫二鈉（分析純，天津市百世化工有限公司，批號(hào)：20170404），磷酸二氫鈉（分析純，天津市百世化工有限公司，批號(hào)：20180717），氫氧化鈉（分析純，天津市天力化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20171208），氯化鈉（分析純，天津市百世化工有限公司，批號(hào)：20171121），蒼耳子（甘肅省平?jīng)鍪星f浪縣洛怡藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：20181225）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用紫外可見分光度法，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示蒼耳子油在206 nm、328 nm處有最大吸收，空白脂質(zhì)體在230 nm處有最大吸收，選擇空白脂質(zhì)體無干擾的波長，即測定波長選擇在328 nm處。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 稱取蒼耳子油0.5 g于50 mL的容量瓶中加入適量甲醇超聲溶解并定容至刻度作為對(duì)照品溶液，分別吸取0.2 mL對(duì)照品溶液和空白脂質(zhì)體到10 mL容量瓶中用甲醇定容至刻度。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱取卵磷脂300 mg，膽固醇100 mg，蒼耳子油43 mg于250 mL圓底燒瓶中，精密量取乙醚12 mL，超聲使其完全溶解，旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，形成均勻的類脂薄膜，再加入溫度為40 ℃、pH=6.5磷酸鹽緩沖溶液20 mL，并在40 ℃水浴下旋轉(zhuǎn)水化至瓶壁上的脂質(zhì)體薄膜完全被洗脫下來，轉(zhuǎn)入30 mL錐形瓶中，置于磁力攪拌器上40 ℃攪拌水化1 h，得淡黃色蒼耳子油脂質(zhì)體混懸液，將脂質(zhì)體過0.45 μm的微孔濾膜3次，即得蒼耳子油脂質(zhì)體溶液。在328 nm處測吸光度并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出C總[10-13]。即包封率：EE%=（C總-C游）÷C總×100%。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取2.1項(xiàng)下的對(duì)照品溶液0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.6 mL、3.2 mL、6.4 mL至10 mL的容量瓶中加甲醇至刻度并搖勻，在328 nm的波長下測量吸光度[14]。以蒼耳子油質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線得到線性回歸方程：y=0.116 8x+0.058 6，r2=0.998 9。結(jié)果顯示配制的對(duì)照品溶液在0.2～6.4 g/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線。見圖1。

2.5 單因素實(shí)驗(yàn)

2.5.1 膜材比 設(shè)定卵磷脂與膽固醇的比例分別為2∶1、3∶1、4∶1、5∶1，按2.3項(xiàng)下方法制備脂質(zhì)體，按2.4項(xiàng)下方法測其包封率，并計(jì)算。其結(jié)果顯示當(dāng)膜材比為3∶1時(shí)所得包封率最大。見圖2。

2.5.2 藥脂比 設(shè)定蒼耳子油與卵磷脂比例為1∶3、1∶5、1∶7、1∶9，按2.3項(xiàng)下方法制備脂質(zhì)體，按2.4項(xiàng)下方法測其包封率，并計(jì)算。其結(jié)果顯示當(dāng)藥脂比為1∶5時(shí)所得包封率最大。見圖3。

2.5.3 磷酸緩沖液的體積 分別設(shè)定pH=6.5磷酸鹽緩沖溶液為10 mL、15 mL、20 mL、25 mL，按2.3項(xiàng)下方法制備脂質(zhì)體，按2.4項(xiàng)下方法測其包封率，并計(jì)算。其結(jié)果顯示當(dāng)水化溶液的體積達(dá)到20 mL以上時(shí)所測得的包封率達(dá)到最大并趨于穩(wěn)定。見圖4。

2.5.4 水化時(shí)的溫度 分別設(shè)定水化時(shí)的溫度為30 ℃、35 ℃、40 ℃、45 ℃，按2.3項(xiàng)下方法制備脂質(zhì)體，按2.4項(xiàng)下方法測其包封率，并計(jì)算。其結(jié)果顯示水化時(shí)的溫度對(duì)包封率的測定沒有顯著影響。見圖5。

2.5.5 水化時(shí)間 分別設(shè)定水化時(shí)間為0.5 h、1 h、1.5 h、2 h，按2.3項(xiàng)下方法制備脂質(zhì)體，按2.4項(xiàng)下方法測其包封率，并計(jì)算。其結(jié)果顯示隨著水化時(shí)間的增加包封率隨之增大，并在1 h后趨于穩(wěn)定。見圖6。

2.6 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)膜材比、藥脂比、磷酸緩沖液的體積對(duì)脂質(zhì)體包封率的測定影響較大，而水化時(shí)的溫度和時(shí)間影響相對(duì)較小，因此選擇影響較大的因素進(jìn)行正交試驗(yàn)。見表1、表2。

2.7 樣品測定結(jié)果 由表2可知，A因素對(duì)該實(shí)驗(yàn)影響最大，當(dāng)膽固醇與卵磷脂的比例為3∶1時(shí)，所測得的包封率較高，C因素為次要因素，B因素對(duì)該實(shí)驗(yàn)的影響最小。最優(yōu)制備方法為A1B3C3，即卵磷脂與膽固醇的比為3∶1、蒼耳子油與卵磷脂比為1∶7、磷酸緩沖液的體積為20 mL時(shí)所制得蒼耳子油脂質(zhì)體包封率較高，在最優(yōu)制備方法下平行3次實(shí)驗(yàn)所測包封率分別為68.3%、67.7%、68.1%，平均值達(dá)68.0%。該處方比較穩(wěn)定。

3 討論

本文采用薄膜分散水化法制備蒼耳子油脂質(zhì)體，外觀為淡黃色混懸液?，F(xiàn)代研究表明蒼耳子油對(duì)鼻炎和鼻息肉的治療有很好的療效，但其也具有一定的毒性和不良反應(yīng)，脂質(zhì)體作為鼻黏膜給藥的新劑型能很好的避免上述缺點(diǎn)，由于蒼耳子油為水不溶性藥物采用薄膜分散水化法制備能有效減少藥物的流失且方法簡便易行[15]。包封率是脂質(zhì)體質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)，常用的測定方法有超速離心法、葡聚糖凝膠色譜柱法、瓊脂糖凝膠色譜柱法等，脂質(zhì)體粒徑大小不一采用色譜柱法分離效果差，但脂質(zhì)體和游離藥物的重量差異較大可以用超速離心法很好的分離，有效的減小了研究誤差[16]。經(jīng)研究表明其方法下制備蒼耳子油脂質(zhì)體操作簡便，重現(xiàn)性好且包封率達(dá)60%以上，為下一步研究奠定基礎(chǔ)。

蒼耳子主要可以用于治療過敏性鼻炎，目前其在此方面的應(yīng)用，主要是通過聯(lián)合氯雷他定、地塞米松等以鼻炎滴丸的方式給藥，還有報(bào)道以散劑直接給藥，鮮有關(guān)于其他劑型的報(bào)道[17-20]。本研究是首次對(duì)蒼耳子油脂質(zhì)體的進(jìn)行了制備，說明以蒼耳子油為基礎(chǔ)的劑型可以進(jìn)一步拓展，以此擴(kuò)大其給藥方式和途徑。

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（2020-02-12收稿 責(zé)任編輯：王楊）

基金項(xiàng)目：2019年甘肅省高等學(xué)校創(chuàng)新能力提升項(xiàng)目（2019B-200）;甘肅省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃-社會(huì)發(fā)展類項(xiàng)目（17YF1FL147）

作者簡介：王紅娟（1984.10—），女，碩士，講師，研究方向：中藥化學(xué)和中藥質(zhì)量控制，E-mail：181922169@qq.com