郭新穎，陳 峰，葉青華，楊清華，顧 俊

（南通市疾病預(yù)防控制中心，江蘇 南通 226007）

阿司匹林（aspinrin,ASP），又稱乙酰水楊酸（acetylsalicylicacid,ASA），臨床具有鎮(zhèn)痛抗炎作用。阿司匹林制藥由水楊酸和乙酸酐或乙酰氯催化反應(yīng)制得，在潮濕條件下，阿司匹林分子中的酯基（RCOOR'）易水解為對(duì)人體具有藥物刺激和毒性作用的水楊酸（Salicylic acid,SA），水楊酸分子中的酚羥基（R-OH）久置于空氣易被氧化成醌型有色物質(zhì)，從而使阿司匹林成品變色（見圖1反應(yīng)方程式）。因此，準(zhǔn)確測(cè)定阿司匹林中游離水楊酸含量對(duì)藥品質(zhì)控非常關(guān)鍵，開發(fā)簡(jiǎn)便快速的定量測(cè)定方法對(duì)阿司匹林制藥具有及其重要的意義。

圖1 水楊酸水解氧化方程式Fig.1 Hydrolysis oxidation equation of SA

目前，已報(bào)道的關(guān)于阿司匹林中游離水楊酸含量的測(cè)定方法主要有酸堿滴定法[1,2]、高效液相色譜法[3,4]和分光光度法[5,6]。其中，酸堿滴定法步驟繁瑣、誤差較大；在此基礎(chǔ)上，新版藥典分別對(duì)游離水楊酸的檢查方法進(jìn)行了改進(jìn)[7,8]，即采用了高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行檢測(cè)；但HPLC法測(cè)量結(jié)果雖精確度高、準(zhǔn)確度好但分析時(shí)間長(zhǎng)、儀器昂貴、不利于基層推廣。本文是在傳統(tǒng)的紫外分光光度法的基礎(chǔ)上，對(duì)吸收波長(zhǎng)、溶劑選擇和測(cè)定時(shí)間等條件進(jìn)行深入研究，從而建立了一種簡(jiǎn)便紫外光度法快速測(cè)定阿司匹林中游離水楊酸含量的方法。該法能夠快速有效地進(jìn)行實(shí)際樣品中游離水楊酸的定量測(cè)定，為大量樣品的實(shí)時(shí)光譜響應(yīng)與定量測(cè)定提供了一種快速簡(jiǎn)便的分析方法，試驗(yàn)結(jié)果較為滿意。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

TU-1950紫外可見分光光度計(jì)（配1cm的石英比色皿，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

水楊酸（AR，批號(hào)20190524）、無水乙醇（AR，批號(hào)20180822）均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；阿司匹林片（規(guī)格100mg，批號(hào)BJ45442拜耳醫(yī)藥保健有限公司）。濾紙、容量瓶、玻璃棒、燒杯若干。

1.2 樣品處理

將阿司匹林片研磨成粉狀、過篩，準(zhǔn)確稱取粉末0.05g于無水乙醇定容至50mL，搖勻溶解后過濾，取濾液放置待測(cè)，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取水楊酸0.05g，加入無水乙醇定容至100mL，配制成500μg·mL-1的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，臨用時(shí)稀釋成不同濃度，配制成1.0、2.0、4.0、8.0、10.0、20.0、25.0、30.0、40.0、50.0μg·mL-1的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.4 樣品測(cè)定

于最佳檢測(cè)條件下固定紫外檢測(cè)波長(zhǎng)，在304nm處測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度，得到水楊酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線。同樣方法測(cè)定待測(cè)樣品的吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品中游離水楊酸含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

將10.0μg·mL-1的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液于紫外可見分光光度計(jì)上分別在200～400nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描紫外吸收?qǐng)D譜，測(cè)得水楊酸溶液在304、235和208nm的波長(zhǎng)處均有吸收，見圖2。

圖2 水楊酸的紫外吸收?qǐng)D譜Fig.2 UV absorption spectrum of SA

為確定最佳檢測(cè)波長(zhǎng)，將新配于過夜放置的阿司匹林待測(cè)樣品溶液分別進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)過夜放置的阿司匹林在304nm波長(zhǎng)處溶液有明顯吸收而在其他波長(zhǎng)處變化不大，說明此波長(zhǎng)處有水楊酸產(chǎn)生；同時(shí)考慮到阿司匹林本身的波長(zhǎng)干擾，故試驗(yàn)選定304nm波長(zhǎng)處作為測(cè)定游離水楊酸的最佳波長(zhǎng)，該結(jié)果與其他文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]。

2.2 樣品溶劑的選擇

由于不同處理溶劑對(duì)測(cè)試體系的可靠性和穩(wěn)定性都有很大影響，因此，試驗(yàn)分別選用無水乙醇、10%無水乙醇和PBS緩沖溶液（pH值為7）等幾種常用中性溶劑來綜合考察溶劑對(duì)測(cè)定體系的影響。結(jié)果表明，一系列相同濃度的水楊酸溶液因處理溶劑不同而呈現(xiàn)不同的吸光度值。同一濃度對(duì)應(yīng)的吸光度值由大到小依次為無水乙醇、10%無水乙醇和PBS。據(jù)此，本試驗(yàn)選擇無水乙醇作為樣品處理溶劑。

2.3 測(cè)定時(shí)間的選擇

本文選擇無水乙醇作為溶劑考察水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品在該溶劑中的穩(wěn)定性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，某一固定濃度（10.0μg·mL-1）的水楊酸-乙醇待測(cè)液的吸光度在0～120min內(nèi)波動(dòng)不大，并未發(fā)生明顯變化，見表1。

表1 水楊酸穩(wěn)定性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果Tab.1 Determination results of SA stability test

表1結(jié)果說明，水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在乙醇中未隨時(shí)間推移而產(chǎn)生分解，間接證明了選擇乙醇作為溶劑基本能夠避免因試驗(yàn)過程中水楊酸含量變化而造成的測(cè)定偏差。但是，同時(shí)考慮到阿司匹林溶液在乙醇溶液中會(huì)發(fā)生一定程度的水解作用，因此，建議在實(shí)際樣品測(cè)定時(shí)阿司匹林溶液不宜長(zhǎng)時(shí)間放置，現(xiàn)配現(xiàn)用為佳。

2.4 線性方程和線性范圍

按照本法在304 nm波長(zhǎng)處測(cè)定體系吸光度，以濃度和吸光度作線性回歸，繪制水楊酸在不同濃度時(shí)對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。結(jié)果表明，水楊酸在1.0～50.0μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程y=0.0283x-0.0015，r=0.9994。

2.5 精密度和回收率

為了驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度，在最佳試驗(yàn)條件下進(jìn)行了3個(gè)不同加標(biāo)量的加標(biāo)回收試驗(yàn)（n=6）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低、中、高3個(gè)加標(biāo)量對(duì)應(yīng)的樣品回收率分別為98.64%、96.72%和93.74%，平均回收率為96.37%。同樣的，對(duì)于精密度試驗(yàn)，通過連續(xù)進(jìn)樣6次，即對(duì)同一樣品平行測(cè)定6次，計(jì)算3個(gè)不同加標(biāo)量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果顯示，不同加標(biāo)量對(duì)應(yīng)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.93%、1.20%和1.08%，重復(fù)性良好，試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法精密度可滿足檢測(cè)要求，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 精密度和回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Precision and recovery test results

2.6 實(shí)際樣品的測(cè)定

將某一批次的阿司匹林片進(jìn)行樣品處理，按照前處理方法配制成質(zhì)量濃度為1000μg·mL-1的待測(cè)液。依照本法即刻進(jìn)行阿司匹林中游離水楊酸含量的測(cè)定（n=6），得到阿司匹林樣品的游離水楊酸的檢測(cè)濃度范圍為1.2191～1.5018μg·mL-1，折合百分含量范圍為0.1219%～0.1502%，平均百分含量為0.1349%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.10%，測(cè)定結(jié)果見表3。該結(jié)果低于藥典方法規(guī)定游離水楊酸的檢查限度1.5%，產(chǎn)品合格。

表3 實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果（n=6）Tab.3 Determination results of samples（n=6）

3 結(jié)論

本文以阿司匹林-水楊酸體系為研究對(duì)象，采用紫外光譜法對(duì)阿司匹林中游離水楊酸含量進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)對(duì)吸收波長(zhǎng)、溶劑選擇和測(cè)定時(shí)間等條件進(jìn)行了分析研究，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，以及回收率和精密度試驗(yàn)，驗(yàn)證了紫外分光光度法測(cè)量阿司匹林中水楊酸含量的可行性，并取得較為滿意的結(jié)果，為下一步采用其他測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)對(duì)比分析與參數(shù)改進(jìn)的研究工作奠定了良好基礎(chǔ)。紫外光譜法作為一種簡(jiǎn)便快速的分析測(cè)試方法，能夠快速有效地進(jìn)行實(shí)際樣品中游離水楊酸的定量測(cè)定，為大量樣品的實(shí)時(shí)光譜響應(yīng)與定量測(cè)定提供了一種快速簡(jiǎn)便的分析方法。值得一提的是，選擇304nm作為體系最佳吸收波長(zhǎng)可最大程度上減弱阿司匹林干擾，從而快速準(zhǔn)確測(cè)定水楊酸含量。該法操作簡(jiǎn)便，試劑廉價(jià)易得，準(zhǔn)確度高，適用于大批量中游離水楊酸含量的快速定量測(cè)定，為阿司匹林制藥合成過程中游離水楊酸含量的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)提供了可行性。