任江劍，孫健，俞旭平，沈曉霞，王志安

浙江省中藥研究所有限公司，浙江 杭州 310023

前胡為傘形科植物白花前胡PeucedanumpraerupterumDunn的干燥根，具有降氣化痰、散風(fēng)清熱的功效[1]。白花前胡分布較廣，藥材主產(chǎn)區(qū)為浙江西北部、安徽南部、江西東北部[2]。白花前胡的主要功效成分為香豆素類化合物，包括白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡丙素等[3]?！吨腥A人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)2020年版規(guī)定前胡藥材的加工方法為“除去須根，洗凈，曬干或低溫干燥”[1]。前胡的產(chǎn)區(qū)傳統(tǒng)加工方法是起土后去掉地上部分，抖動掉根部泥土，太陽曬干。其產(chǎn)地加工存在干燥程序不規(guī)范的問題，主要表現(xiàn)為不提倡水洗、烘干溫度不穩(wěn)定等。為方便儲存及控制藥材品質(zhì)，許多中藥材需要干燥后再銷售。原藥材在飲片廠進行潤制、切制后得到中藥飲片，潤制和切制過程可能導(dǎo)致中藥材的化學(xué)成分損失。中藥材產(chǎn)地的趁鮮切片可以減少再加工環(huán)節(jié)，減少化學(xué)成分的損失，但是需要嚴格的技術(shù)指標控制。目前，趁鮮切片技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于三七、當歸、檳榔等藥材生產(chǎn)并取得較好的效果[4-6]。白花前胡是常異花授粉植物，導(dǎo)致生產(chǎn)中藥材的指標成分含量變異度較大。邱曉霞等[7]針對不同批次的前胡進行研究，結(jié)果表明，栽培模式、干燥溫度和根的形狀均為影響前胡化學(xué)成分組成的因素。本研究針對前胡的產(chǎn)地加工現(xiàn)狀，采用經(jīng)選育的品系，經(jīng)過統(tǒng)一栽培管理、采收，選取近似形狀的根部組織，論證了水洗藥材的必要性、產(chǎn)地加工溫度的控制和趁鮮加工的可行性，為前胡藥材規(guī)范化的產(chǎn)地加工提供參考。

1 材料

1.1 樣品

樣品為經(jīng)過系統(tǒng)選育的前胡品系，經(jīng)統(tǒng)一栽培管理的2年生新鮮藥材，于2019年12月采自淳安縣臨岐鎮(zhèn)浙江省中藥研究所實驗基地，由浙江省中藥研究所有限公司俞旭平教授級高級工程師鑒定為白花前胡PeucedanumpraerupterumDunn。本研究以新鮮的白花前胡根為材料，取樣品500 g，起土后，當天洗凈進行實驗，樣品的直徑控制在1.5～2.0 cm，樣品的長度控制在7.0～8.0 cm。

1.2 儀器

1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；KQ 500VDE型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；CS501/601型博迅數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

1.3 試藥

對照品白花前胡甲素(批號：111711-200602，純度：100%)、白花前胡乙素(批號：111904-201203，純度：98.8%)均購于中國食品藥品檢定研究院；白花前胡丙素對照品(批號：18050304，純度≥98%，成都曼思特生物科技有限公司)；甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇(A)-水(B)溶液，梯度洗脫(0～11 min，70%A；11～12min，70%～85%A；12～19 min，85%A；19～20 min，85%～70%A；20～23 min，70%A)；流速1.0 mL·min-1；檢測波長321 nm；柱溫30 ℃；進樣量10.0 μL。對照品和供試品HPLC圖見圖1。

注：A.混合對照品；B.供試品；1.白花前胡甲素；2.白花前胡乙素；3.白花前胡丙素。圖1 混合對照品及前胡供試品的HPLC圖

2.2 對照品溶液制備

精密稱取各對照品適量，加甲醇配制成含白花前胡甲素50.40 μg·mL-1、白花前胡乙素50.20 μg·mL-1、白花前胡丙素47.70 μg·mL-1的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

稱取前胡藥材粉末0.5 g(過二號篩)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷25.0 mL，密塞，稱定質(zhì)量，低溫超聲處理(功率100 W，頻率50 Hz)10 min，放冷，用三氯甲烷補足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5.0 mL，蒸干殘渣，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，定容，搖勻，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1線性關(guān)系考察 分別精密吸取2.2項下對照品儲備液各2.0、4.0、8.0、12.0、16.0 mL，分別置20 mL量瓶中，甲醇定容，制成不同質(zhì)量濃度的對照品溶液，按2.1項下色譜條件依法進樣。以質(zhì)量濃度(X)對峰面積(Y)進行線性回歸，結(jié)果見表1，表明各成分的線性關(guān)系良好。

表1 前胡中3種成分的線性關(guān)系考察結(jié)果

2.4.2精密度試驗 取批號為20180116的前胡藥材提取溶液，連續(xù)進樣6次，測定白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡丙素的峰面積值，計算峰面積的RSD分別為0.146%、0.092%、0.173%。

2.4.3穩(wěn)定性試驗 取批號為20180116的前胡樣品粉末，制備供試品溶液，分別在0、3、6、9、12 h進樣10.0 μL，進行測定，白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡丙素的峰面積RSD分別為0.420%、0.344%、0.412%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4重復(fù)性試驗 取批號為20180116的樣品粉末0.5 g，精密稱定，制備供試品溶液，平行試驗6份，進樣10 μL，進行測定，白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡丙素質(zhì)量分數(shù)RSD分別為0.373%、0.898%、0.710%。

2.4.5加樣回收率試驗 取已知含量的前胡藥材樣品6份(批號：20180116)，精密稱定，每份約0.250 g。上述各份分別加入白花前胡甲素對照品3.398 mg、白花前胡乙素對照品1.478 mg、白花前胡丙素對照品0.835 mg，按供試品溶液制備方法提取，進樣，測定，計算加樣回收率。白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡丙素的平均回收率分別為99.98%、101.94%和102.22%，RSD分別為1.10%、0.79%和1.00%。

2.5 新鮮藥材的前處理

新鮮藥材采收后，采用水洗后50 ℃烘干、直接50 ℃烘干、曬后50 ℃烘干處理。加工完畢后，干燥藥材置于干燥皿中室溫保存，進行后續(xù)的品質(zhì)測定?？偦曳趾退岵蝗芑曳值臋z測參考《中國藥典》2020年版。分別隨機取50株水洗后和不水洗的白花前胡根莖，室溫堆放3、6 d，統(tǒng)計具有腐爛根的數(shù)量。

2.6 烘干溫度和時間

新鮮藥材采收后，洗去泥沙，用40、50、60、70、80、90 ℃將前胡新鮮藥材直接烘干，每6 h稱質(zhì)量1次，目測干燥后，每30 min稱質(zhì)量1次，記錄烘干至恒重時間。加工完畢后，干燥藥材置于干燥皿中室溫保存，進行后續(xù)的品質(zhì)測定。干燥藥材水分的檢測方法參考《中國藥典》2020年版。

2.7 趁鮮切片

新鮮藥材采收后，洗去泥沙，切片和不切片樣品均在50 ℃直接烘干，切片厚度為3、6 mm。加工完畢后，干燥藥材置于干燥皿中室溫保存，進行后續(xù)的品質(zhì)測定。

2.8 數(shù)據(jù)處理

所有實驗重復(fù)3次，實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 21軟件進行統(tǒng)計分析，多重比較采用Duncan′s方法，單因素比較采用t檢驗。

3 結(jié)果

3.1 不同加工處理對前胡藥材品質(zhì)的影響

目前，前胡產(chǎn)區(qū)主要的鮮藥材的前處理方式有生曬、水洗后烘干、非水洗烘干3種形式。本研究表明，50 ℃烘干和太陽曬干對于白花前胡化學(xué)成分的影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義(表2)。但是，非水洗的樣品，總灰分接近于8.0%，有超過《中國藥典》2020年版指標(不得超過8.0%)的風(fēng)險；酸不溶灰分達到3.0%，超過《中國藥典》2020年版指標(不得超過2.0%)。同一批次鮮藥材水洗后再加工，總灰分降至5.0%左右，酸不溶灰分為0.18%，遠低于《中國藥典》2020年版指標。該結(jié)果表明，前胡藥材的酸不溶灰分主要來源于根部攜帶的泥土雜質(zhì)。

然而，傳統(tǒng)加工方法是不提倡水洗的，其原因可能是水洗后的前胡鮮藥材如果不能及時加工，堆放后會快速腐爛。水洗3 d后常溫堆放不加工的藥材腐爛率為(22.5±1.4)%，顯著高于非水洗樣品(4.5±1.2)%；水洗6 d后常溫堆放不加工的藥材腐爛率為(53.3±5.4)%，同樣顯著高于非水洗樣品(9.0±3.6)%，即水洗后不立即烘干嚴重影響藥材生產(chǎn)。

3.2 烘干溫度對前胡藥材的影響

鮮藥材的烘干溫度是藥材產(chǎn)地加工的重要技術(shù)指標，直接影響藥材的品質(zhì)和加工成本[8-9]。傳統(tǒng)加工方式建議低溫干燥，但是沒有進行加工溫度量化。本研究表明，高溫加工后的前胡會導(dǎo)致化學(xué)成分含量降低，超過60 ℃后，白花前胡甲素和白花前丙素含量顯著下降，超過70 ℃后白花前胡乙素含量顯著下降。導(dǎo)致該現(xiàn)象的原因可能是化學(xué)成分的揮發(fā)或者降解。其具體原因需要進一步的實驗分析。當烘干溫度為40～60 ℃時，白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡丙素的組成差異無統(tǒng)計學(xué)意義(圖3，表3)。前胡根莖的烘干時間隨溫度降低而逐漸縮短，最終折干率在30%左右(圖3)。采用40 ℃烘干需要連續(xù)烘干56 h以上，而60 ℃的烘干時間為18 h以上。因此，為保證前胡藥材的品質(zhì)，綜合考慮采收季加工效率，可以采用50～60 ℃進行藥材烘干。

注：60 ℃-slice表示材料切片后60 ℃烘干。圖3 不同溫度烘干前胡有效成分質(zhì)量分數(shù)和失水規(guī)律

3.3 前胡的趁鮮切片加工

本研究表明，前胡趁鮮切片會影響化學(xué)成分的含量，尤其是白花前胡乙素，當切片厚度在3 mm時，出現(xiàn)了顯著下降的現(xiàn)象，但控制切片厚度在6 mm時，化學(xué)成分差異無統(tǒng)計學(xué)意義(表4)。與不切片處理的前胡相比，前胡切厚片后，烘干速度可以加快，在60 ℃烘干條件下，烘干時間可以縮短2 h(圖3)。

4 討論

新鮮藥材的產(chǎn)地加工是中藥飲片生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，采用規(guī)范化和精細化的產(chǎn)地加工技術(shù)可以提高中藥飲片的質(zhì)量。本研究表明，主產(chǎn)區(qū)非水洗加工模式主要是為了控制藥材起土后的腐爛發(fā)生。目前，除了化學(xué)成分之外，藥材的灰分也是藥材品質(zhì)評價的重要指標[10]，水洗后可以很好地控制前胡藥材的灰分指標，尤其是酸不溶灰分指標。但是水洗后的藥材易發(fā)霉腐爛，需要迅速干燥加工，不能長時間堆放。在烘干過程中生曬和低溫烘干均有利于化學(xué)成分的保留，采用烘干加工方式應(yīng)該控制烘干溫度在60 ℃以下。以白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡丙素為指標評價趁鮮切片加工，結(jié)果表明，切6 mm的厚片再低溫烘干，前胡藥材的主要化學(xué)成分沒有顯著變化。本研究表明，傳統(tǒng)的前胡散戶加工，干燥后再進入飲片廠的模式，不利于保證前胡飲片藥效品質(zhì)的穩(wěn)定，并且存在酸不溶灰分超標的風(fēng)險，統(tǒng)一標準化加工有利于前胡品質(zhì)的提升。本研究表明，產(chǎn)地采收的前胡，需要水洗泥沙，避免酸不溶灰分超標；水洗后需要快速低溫烘干，烘干溫度控制在50～60 ℃；產(chǎn)地切片加工有利于前胡飲片品質(zhì)的提升，以切6 mm片、50～60 ℃烘干為宜。