盛雅潔，肖春蘭，趙麗娟，周正宇

（蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，蘇州大學(xué)衛(wèi)生與環(huán)境技術(shù)研究所，蘇州 215123）

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量直接影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，甚至影響科研人員的健康[1]。由于實(shí)驗(yàn)犬多采用群體飼養(yǎng)，更加容易感染各種微生物及寄生蟲。一旦被感染，除影響犬的健康外，還會(huì)威脅到相關(guān)工作人員的健康，特別是狂犬病病毒、布魯桿菌等感染引起的人獸共患病[2-4]對(duì)人的危害性極大。

微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)質(zhì)量控制是衡量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的主要標(biāo)準(zhǔn)之一[5]。按照普通級(jí)實(shí)驗(yàn)犬寄生蟲學(xué)和微生物學(xué)控制標(biāo)準(zhǔn)[6-7]，本文結(jié)合本檢測(cè)機(jī)構(gòu)2014—2018年接受江蘇省及上海市部分機(jī)構(gòu)委托檢測(cè)和行政監(jiān)督抽查的結(jié)果，就普通級(jí)實(shí)驗(yàn)犬的檢測(cè)方法和質(zhì)量控制現(xiàn)狀進(jìn)行總結(jié)，以期為普通級(jí)實(shí)驗(yàn)犬的生產(chǎn)及使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

成年普通級(jí)實(shí)驗(yàn)犬，主要品種為比格犬，性別不限，來自江蘇省及上海市具有普通級(jí)實(shí)驗(yàn)犬生產(chǎn)許可證的部分單位，共計(jì) 21 批次，每批次6只或6個(gè)樣本。其中監(jiān)督抽查10批次，委托檢測(cè)11批次。監(jiān)督抽查樣品均為活體動(dòng)物，委托檢測(cè)樣品部分批次為活體動(dòng)物，還有部分批次為血清、肛拭子或毛發(fā)等樣品。

1.2 主要試劑與儀器

犬瘟熱病毒、犬肝炎病毒和犬細(xì)小病毒抗體檢測(cè)試劑盒均購自美國XpressBio公司；狂犬病病毒抗體檢測(cè)試劑盒購自法國Synbiotics公司；犬布魯桿菌檢測(cè)試劑盒購自北京杰輝博高生物技術(shù)有限公司；ID 32E腸桿菌科和其他非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌鑒定試劑盒購自法國梅里埃生物公司；弓形蟲抗體檢測(cè)試劑盒購自法國ID-VET公司；DHL培養(yǎng)基、沙氏瓊脂培養(yǎng)基購自青島日水生物技術(shù)有限公司；血瓊脂培養(yǎng)基購自常德比克曼生物科技有限公司。

ATB半自動(dòng)微生物鑒定儀為法國梅里埃公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀（型號(hào)Multiskan MK3）為美國賽默飛公司產(chǎn)品；體視顯微鏡為日本尼康公司產(chǎn)品（型號(hào)SMZ745T）。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 樣本采集 待檢實(shí)驗(yàn)犬編號(hào)后進(jìn)行外觀檢查，然后對(duì)不同病原體分別進(jìn)行取樣，包括皮膚、毛發(fā)、血液以及新鮮糞便或者肛拭子，采集方法按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.3.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法 檢測(cè)指標(biāo)：病原菌檢測(cè)包括沙門菌、皮膚病原真菌以及布魯桿菌；病毒檢測(cè)包括狂犬病病毒、犬細(xì)小病毒、傳染性犬肝炎病毒以及犬瘟熱病毒；寄生蟲學(xué)檢測(cè)包括體外寄生蟲（節(jié)肢動(dòng)物）以及弓形蟲。

體外寄生蟲檢測(cè)：首先進(jìn)行外觀檢查，尤其要注意耳根、頸后、眼周、腹股溝等易感部位，然后直接拔毛進(jìn)行取樣，顯微鏡觀察結(jié)合肉眼觀察是否有體外寄生蟲。

沙門菌和病原真菌按常規(guī)檢測(cè)。

布魯桿菌、狂犬病病毒、犬細(xì)小病毒、傳染性犬肝炎病毒、犬瘟熱病毒及弓形蟲檢測(cè)：采血后分離血清，按ELISA試劑盒說明書檢測(cè)。

2 結(jié)果

共檢測(cè)21批次，總體合格率72.8%，其中總體免疫合格率77.3%。

2.1 監(jiān)督抽查不合格情況

監(jiān)督抽查的10個(gè)批次中，共有4個(gè)批次檢出不合格項(xiàng)目。除1個(gè)批次發(fā)現(xiàn)1例弓形蟲抗體陽性外，其他3個(gè)批次均為免疫不合格，分別為：1批次狂犬病病毒抗體群體免疫合格率為16.7%，犬瘟熱病毒抗體群體免疫合格率為33.3%；另1批次狂犬病病毒抗體免疫合格率僅為16.7%，犬瘟熱病毒抗體免疫合格率為66.7%；還有1批次犬肝炎病毒抗體群體免疫合格率為50.0%。此外，有1個(gè)批次犬中有1例犬瘟熱病毒抗體不合格，但是其群體免疫合格率達(dá)到了70.0%，因此群體免疫合格，符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.2 委托檢測(cè)不合格情況

委托檢測(cè)的11個(gè)批次中，有2個(gè)批次檢出不合格項(xiàng)目，均為狂犬病病毒抗體免疫不合格，其群體免疫合格率分別為50.0%和66.7%。1批次犬中有1例犬肝炎病毒抗體不合格，但其群體免疫合格率達(dá)到了70%，符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.3 不合格情況處理

對(duì)檢測(cè)的所有批次實(shí)驗(yàn)犬均出具了檢測(cè)報(bào)告。對(duì)于檢測(cè)不合格動(dòng)物，如果是委托檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果建議生產(chǎn)單位重新進(jìn)行疫苗接種或者驅(qū)蟲等處理后再次進(jìn)行委托檢測(cè)。如果是監(jiān)督抽查，將不合格結(jié)果直接上報(bào)給相關(guān)單位。

3 討論

免疫接種是有效預(yù)防控制動(dòng)物烈性傳染病的可靠方法，當(dāng)易感動(dòng)物免疫覆蓋率達(dá)到70%以上時(shí)，即可有效抑制疾病的傳播[8]。我國國家標(biāo)準(zhǔn)[9-12]規(guī)定，普通級(jí)實(shí)驗(yàn)犬均需進(jìn)行狂犬病病毒、犬細(xì)小病毒、傳染性犬肝炎病毒及犬瘟熱病毒等免疫接種，經(jīng)檢測(cè)各項(xiàng)病毒抗體陽性方為合格，犬群體免疫抗體合格率達(dá)到70%以上則可判斷為該犬群免疫合格。根據(jù)2014—2018年監(jiān)督抽查與委托檢測(cè)的結(jié)果，江蘇省及上海市部分機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)犬的總體免疫合格率為77.3%，其中監(jiān)督抽查的群體免疫合格率為70.0%，委托檢測(cè)則為81.8%。另外監(jiān)督抽查的1個(gè)批次中發(fā)現(xiàn)1例犬瘟熱病毒抗體水平不合格；委托檢測(cè)的1個(gè)批次中發(fā)現(xiàn)1例犬肝炎病毒抗體不合格，但是這兩個(gè)批次的群體免疫抗體合格率均超過70%，群體免疫合格。免疫接種的效果和疫苗質(zhì)量以及免疫接種的方案有很大關(guān)系[13]。本研究發(fā)現(xiàn)有2家單位的實(shí)驗(yàn)犬在第一次監(jiān)督抽查中符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，但是在第二次監(jiān)督抽查時(shí)，狂犬病病毒抗體與犬瘟熱病毒抗體群體免疫合格率均未達(dá)到70%。

寄生蟲感染是影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的重要因素。普通環(huán)境與外界直接相通，因此普通動(dòng)物感染寄生蟲的概率更高。根據(jù)我們的檢測(cè)，21批次普通級(jí)實(shí)驗(yàn)犬寄生蟲總體感染率為4.76%，其中監(jiān)督抽查寄生蟲檢測(cè)的總體合格率為90%；委托檢測(cè)為100%合格。監(jiān)督抽查中僅1批次1只實(shí)驗(yàn)犬檢出弓形蟲陽性。細(xì)菌學(xué)質(zhì)量是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)質(zhì)量的重要組成部分。在所有21批次普通級(jí)犬樣品中，所有需要檢測(cè)的細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果皆為陰性。

統(tǒng)計(jì)表明，21批次普通級(jí)實(shí)驗(yàn)犬的總體合格率為72.8%，其中監(jiān)督抽查總體合格率為60.0%，委托檢測(cè)為81.8%。委托檢測(cè)一般是生產(chǎn)單位的自主行為，多會(huì)根據(jù)各自的免疫方案和動(dòng)物種群選擇性送樣，而監(jiān)督抽查的采樣時(shí)間和樣品選擇有很大的隨機(jī)性。此外，委托檢測(cè)只對(duì)送檢樣品負(fù)責(zé)，檢測(cè)機(jī)構(gòu)無法了解樣品的真實(shí)來源。為保證實(shí)驗(yàn)犬的質(zhì)量，除生產(chǎn)單位的委托檢測(cè)外，還需要政府加強(qiáng)監(jiān)管，定期開展監(jiān)督抽查，從源頭確保實(shí)驗(yàn)犬的質(zhì)量。

現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的沙門菌檢測(cè)的生化反應(yīng)方法較為繁瑣，目前很多檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)采用了全自動(dòng)或半自動(dòng)微生物鑒定儀，雖然前期儀器成本較為昂貴，但可以更為方便、快捷、準(zhǔn)確地檢測(cè)各種微生物。此外，PCR方法已廣泛運(yùn)用于沙門菌、皮膚病原真菌、布魯桿菌、弓形蟲等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病原體的檢測(cè)[14-16]。國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的布魯桿菌檢測(cè)為血清學(xué)方法，雖然操作較為簡單，但由于其特異性相對(duì)較差，抗原制備比較困難。中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)發(fā)布了布魯桿菌PCR檢測(cè)方法的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，可以更為準(zhǔn)確地檢測(cè)布魯桿菌[17]?？袢〔《?、犬細(xì)小病毒、傳染性犬肝炎病毒以及犬瘟熱病毒的檢測(cè)方法為血清學(xué)方法，所有普通級(jí)實(shí)驗(yàn)犬均需要免疫并通過檢測(cè)血清中病毒抗體水平來衡量免疫效果。此外，檢測(cè)方法和人員的能力差異等均可能會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，因此，所有檢測(cè)不合格項(xiàng)目均需要進(jìn)行復(fù)檢[18]。

質(zhì)量檢測(cè)是保證實(shí)驗(yàn)犬質(zhì)量的重要手段[19-20]，但加強(qiáng)飼養(yǎng)管理仍是提升實(shí)驗(yàn)犬質(zhì)量的根本手段。實(shí)驗(yàn)犬的飼養(yǎng)管理應(yīng)符合相關(guān)的操作規(guī)程，籠器具的清洗消毒應(yīng)當(dāng)徹底，要嚴(yán)格防止外來動(dòng)物與實(shí)驗(yàn)犬相接觸，飼養(yǎng)室門口應(yīng)設(shè)置擋鼠板。新引進(jìn)或者新購入的實(shí)驗(yàn)犬，應(yīng)隔離飼養(yǎng)2~3周，經(jīng)隔離檢疫合格后方可與其他實(shí)驗(yàn)犬一起飼養(yǎng)[21]。此外，還應(yīng)當(dāng)根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行疫苗接種、驅(qū)蟲等工作，防止外來病原體進(jìn)入犬舍。

總體上看，江蘇省及上海市實(shí)驗(yàn)犬生產(chǎn)單位的實(shí)驗(yàn)犬質(zhì)量大多良好，但也應(yīng)加強(qiáng)對(duì)免疫接種方案和疫苗來源的管理，以及對(duì)飼養(yǎng)場周邊野生動(dòng)物的防范，進(jìn)一步提高實(shí)驗(yàn)犬質(zhì)量。目前，市場上的實(shí)驗(yàn)犬均為普通級(jí)，還沒有規(guī)?；腟PF級(jí)犬用于生產(chǎn)和使用，隨著生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展，對(duì)實(shí)驗(yàn)犬質(zhì)量的要求也會(huì)越來越高。對(duì)實(shí)驗(yàn)犬的質(zhì)量進(jìn)行科學(xué)化的控制是提高實(shí)驗(yàn)犬質(zhì)量的重要途徑，是保證相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性和可靠性的基礎(chǔ)，更是相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作人員健康的重要保障[22]。