羅曉莎 王明明 宋頎 陳舒 錢俊偉

摘要 以豬糞和木屑為堆肥試驗材料，研究接種嗜熱側(cè)孢霉對堆肥溫度、pH、含水量、木質(zhì)纖維素相對含量、纖維素相關(guān)酶活及細(xì)菌、真菌群落結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果表明，與對照組相比，接菌組升溫較快，在堆肥第1天就達(dá)到了50 ℃，達(dá)到高溫期后含水量下降較快。堆肥結(jié)束時，接菌組的纖維素和半纖維素相對含量分別下降了8.50%和16.86%，分別高于對照組的1.50%和13.53%。酶活分析表明，接菌后，β-1，4-葡聚糖酶活性明顯提高，木聚糖酶活性出現(xiàn)3個峰值，其中最大峰值為7.90 U/g，是對照組的最大峰值的2.62倍。錳過氧化物酶的活性也有明顯提高。接種嗜熱側(cè)孢霉在一定程度上也影響了堆肥的細(xì)菌及真菌群落結(jié)構(gòu)變化。由此可見，在堆肥中接種嗜熱側(cè)孢霉可以加快堆肥升溫，促進(jìn)有機(jī)質(zhì)分解和轉(zhuǎn)化。

關(guān)鍵詞 堆肥;嗜熱側(cè)孢霉;纖維素酶活;微生物群落

中圖分類號 S141.4文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A文章編號 0517-6611（2021）02-0063-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.02.019

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Effects of Inoculating Thermophilic sporotrichum on Lignocellulose Degradation in Composting

LUO Xiaosha1，WANG Mingming1，2，SONG Qi1 et al

（1. BGI Institute of Applied Agriculture， BGIshenzhen， Shenzhen，Guangdong 518000;2.BGI Sanshengyuan Co. Ltd.， BGIShenzhen， Shenzhen，Guangdong 518000）

Abstract Using pig manure and sawdust as compost test materials， the effects of inoculation hermophilic sporotrichum on compost temperature， pH， water content， relative lignocellulose content， celluloserelated enzyme activity， and bacterial and fungal community structure were studied.The results showed that compared with the control group， the temperature of the inoculated group was faster， reaching 50°C on the first day of composting， and the water content decreased faster after reaching the high temperature period.At the end of composting， the relative contents of cellulose and hemicellulose in the inoculated group decreased by 8.50% and 16.86%， respectively， which were higher than 150% and 13.53% in the control group.The enzyme activity analysis showed that after the inoculation， the β1，4glucanase activity was significantly increased， and there were 3 peaks in the xylanase activity， of which the maximum peak was 7.90 U/g， which was 2.62 of the maximum peak of the control group. The activity of manganese peroxidase was also significantly improved.The inoculation Thermophilic sporotrichum also affected the changes in the bacterial and fungal community structure of the compost to a certain extent.It can be seen that the inoculation Thermophilic sporotrichum in the compost can speed up the temperature of the compost and promote the decomposition and transformation of organic matter.

Key words Compost;Thermophilic sporotrichum;Cellulase activity;Microbial community

近年來，規(guī)?；B(yǎng)殖發(fā)展迅速，畜禽糞便產(chǎn)生量突增，2015年我國畜禽糞便產(chǎn)生量已達(dá)到60億t[1]。畜禽糞便中含有未消化的淀粉、蛋白質(zhì)等大分子營養(yǎng)物質(zhì)，同時還有豐富的有機(jī)質(zhì)、磷、氮和鉀元素等，未經(jīng)處理直接排放到環(huán)境中，不僅會造成養(yǎng)分的流失，還會對水源、大氣和土壤環(huán)境造成嚴(yán)重的污染?，F(xiàn)在畜禽糞便的主要處理方式有填埋法、焚燒法和堆肥法[2-3]。堆肥作為一種有效的處理有機(jī)廢棄物的方法，可以利用微生物將有機(jī)物質(zhì)快速降解成為穩(wěn)定的有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)或者腐殖質(zhì)，實現(xiàn)廢棄物資源的再利用[4]。

傳統(tǒng)的堆肥發(fā)酵存在著發(fā)酵周期長、升溫慢、腐熟不徹底等問題，這些問題與木質(zhì)纖維素的降解緊密相關(guān)，因此如何加快堆肥進(jìn)程中木質(zhì)纖維素的降解一直是領(lǐng)域內(nèi)研究熱點(diǎn)[5-6]。有研究報道，加入功能微生物菌劑可以調(diào)節(jié)微生物群落結(jié)構(gòu)，提高微生物活性，加速堆肥腐熟進(jìn)程[7-8]。劉佳等[9]研究發(fā)現(xiàn)在牛糞堆肥中接種纖維素降解菌，加快了堆肥中的微生物增殖，縮短堆肥進(jìn)程。尹靜等[10]研究篩選了一株粉紅粘帚霉，應(yīng)用于堆肥中可促進(jìn)堆肥腐熟，提高堆肥產(chǎn)品腐植酸含量。Wei等[8]在小麥、玉米和大豆堆肥中接種嗜熱放線菌，結(jié)果表明放線菌的接種不僅改變了放線菌和細(xì)菌群落的結(jié)構(gòu)，而且加速了纖維素、半纖維素和木質(zhì)素的降解，并增加了堆肥（特別是小麥）中纖維素、半纖維素和木質(zhì)素的關(guān)鍵酶活性。盡管這些研究取得了一定的促進(jìn)堆肥進(jìn)程的效果，但是更有效的功能性微生物產(chǎn)品仍需要進(jìn)一步探索。

有文獻(xiàn)報道，嗜熱側(cè)孢霉（Thermophilic sporotrichum）是一種分解纖維素的嗜熱絲狀真菌[11]。由于嗜熱側(cè)孢霉代謝作用快，纖維素降解率較高，同時較高的生長溫度可以有效地抑制其他微生物的生長，在發(fā)酵生產(chǎn)上占有一定的優(yōu)勢，因此嗜熱側(cè)孢霉日益受到研究者的重視[12]。但是目前大部分研究都集中在嗜熱側(cè)孢霉的生物學(xué)特性和液體發(fā)酵上，對其在堆肥中的應(yīng)用研究較少。

該試驗以豬糞和木屑為堆肥原料，通過探究加入嗜熱側(cè)孢霉對堆肥中溫度、含水率變化、木質(zhì)纖維素的降解特性及真菌、細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的影響，以期發(fā)現(xiàn)新的對縮短堆肥發(fā)酵周期、提高木質(zhì)纖維素降解率有顯著作用的外源堆肥菌劑，也為進(jìn)一步研究嗜熱真菌在堆肥木質(zhì)纖維素降解機(jī)制中起到的重要作用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

所用菌種為嗜熱側(cè)孢霉D1，自前期羊糞堆肥樣品中篩選出。堆肥原料為新鮮豬糞，選用楊木木屑作為調(diào)理劑，購自網(wǎng)上，豬糞取自廣東惠州豬場。堆肥原料性質(zhì)見表1。

1.2 堆肥設(shè)置

堆肥試驗在華大農(nóng)業(yè)大鵬試驗基地進(jìn)行，實行人工翻堆。共設(shè)置2個堆體，每個堆體高約1.2 m，直徑約1.5 m。將豬糞與木屑按體積比3∶2混合，接菌組堆體接種1%的嗜熱側(cè)孢霉D1，攪拌均勻，將不接種的堆體作為空白對照組。堆體溫度上升到50 ℃之后開始翻堆，高溫期每2 d翻堆一次，溫度下降到35 ℃之后每5 d翻一次，每天測定堆體上部（40 cm）、中部（70 cm）、下部（100 cm）的溫度和室溫。堆肥周期為50 d。

1.3 樣品采集與指標(biāo)檢測

在堆肥的0、2、6、8、10、15、20、25、30、35、40和50 d取樣，在上、中、下層隨機(jī)取樣，將取得的樣品均勻混合，四分法保留300 g，密封置-20 ℃保存，以備分析測定待用。將樣品風(fēng)干粉碎后進(jìn)行含水量、pH、碳氮比、全氮等指標(biāo)的測定。測定方法根據(jù)中華人民共和國有機(jī)肥料農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY 525—2012進(jìn)行。纖維素、半纖維素和木質(zhì)素相對含量的測定采用范式洗滌法。

1.3.1 堆肥基因組DNA的提取。

使用試劑盒Fast DNATM Spin Kit for soil提取堆肥樣品DNA。

1.3.2 纖維素酶活的檢測。

取0、2、4、6、8、10、15、20、25、30 d的樣品進(jìn)行酶活測定：纖維素酶測定采用3，5-二硝基水楊酸法;錳過氧化物酶測定采用Mn2+法;纖維二糖酶測定采用S-C1催化法;木聚糖酶測定采用DNS法[13]。

1.3.3 Illumina Miseq高通量測序。

提取微生物總DNA（濃度>10 ng/μL，總量>500 ng，OD260/280=1.8～2.0），進(jìn)行目標(biāo)片段PCR擴(kuò)增：選取338F（5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′）和806R（5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′）作為細(xì)菌16S rRNA 引物;選取1737F（5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′）和2043R（5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′）作為真菌ITS引物。PCR產(chǎn)物送往深圳華大基因公司測序平臺進(jìn)行上機(jī)測序和測序結(jié)果分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 堆肥過程中溫度的變化

在堆肥過程中，溫度是一個十分重要的參數(shù)，能反映出微生物的活躍程度，故溫度的變化與有機(jī)物的降解密切相關(guān)[14]。從圖1可以看出，2組堆肥的溫度變化均呈現(xiàn)了先升高后降低最后趨于穩(wěn)定的變化趨勢，與許多文獻(xiàn)中報道的一致[15-16]。此次試驗中，接菌組堆肥溫度超過50 ℃的時間達(dá)30 d，對照組的也達(dá)到了29 d，長期保持堆體高溫可以充分殺死堆肥中的病原微生物和蟲卵等，從而達(dá)到糞便無害化標(biāo)準(zhǔn)[17]。

在堆肥初期，堆體自帶的微生物通過分解有機(jī)物，為自身的大量增殖提供營養(yǎng)物質(zhì)，這一過程會產(chǎn)生大量熱量，從而導(dǎo)致溫度迅速上升[18]。與對照組相比，接菌組初期升溫較快，在堆肥第1天，溫度就達(dá)到了51 ℃，對照組第1天溫度為48 ℃，接菌組高溫期平均溫度高于對照組，且最高溫度達(dá)74 ℃，比對照組最高溫度（69 ℃）高出5 ℃，可能是由于嗜熱側(cè)孢霉可以在高溫下生存，并且分解了堆肥原料種的木質(zhì)纖維素，產(chǎn)生一定熱量，從而提高了堆肥的溫度。2組高溫期分別維持了30和29 d，隨著有機(jī)質(zhì)的大量消耗，微生物代謝活動減慢，熱量減少，2組溫度在第33天迅速下降至43 ℃，然后緩慢下降至室溫。

2.2 堆肥過程中含水量和pH的變化

由表1可知，堆肥過程中pH呈現(xiàn)一個先升高后緩慢降低的趨勢，接菌組和對照組開始時（0 d）的pH分別為6.44和6.47，結(jié)束時（50 d）的pH分別為7.21和7.19，接菌組pH最高峰出現(xiàn)在第6天，為8.88，而對照組pH最高峰出現(xiàn)在第30天，為7.96。接菌組pH在前10 d明顯高于對照組，這與溫度趨勢一致。發(fā)酵前期接菌組有機(jī)物分解較快，富氮有機(jī)物分解出氨，導(dǎo)致pH明顯升高。

從圖2可以看出，在整個堆肥過程中，2組堆體的含水率皆呈下降趨勢，接菌組和對照組的起始含水率分別為69.6%和67.7%，試驗結(jié)束時，接菌組和對照組的含水率分別為375%和38.0%，兩者沒有明顯差異，高溫期接菌組含水率低于對照組，可能是由于堆體溫度較高，加速了水分喪失。

2.3 堆肥過程中木質(zhì)纖維素含量的變化

木質(zhì)纖維素物質(zhì)的降解是堆肥過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。由圖3可知，2組堆肥中纖維素和半纖維素的相對含量皆有所降低，在接菌組中，堆肥結(jié)束時的纖維素相對含量比堆肥開始時的下降了8.5%，高于對照組的1.5%;半纖維素的相對含量比堆肥開始時的下降了16.9%，高于對照組的13.5%，說明接種嗜熱側(cè)孢霉更利于纖維素的降解。而木質(zhì)素由于其高度復(fù)雜和相對隨機(jī)排列的分子結(jié)構(gòu)，相對于纖維素和半纖維素更難降解[19-20]。由圖3可知，2組堆肥中的木質(zhì)素相對含量皆不降反升，可能是由于木質(zhì)素的降解率低于其他物質(zhì)，堆肥總體質(zhì)量降低，故木質(zhì)素的相對含量增加。王偉東等[21]的試驗也有證明木質(zhì)素在堆肥中幾乎不發(fā)生降解，加入復(fù)合菌系也未見明顯影響。

2.4 堆肥過程中酶活的變化

在堆肥中，木質(zhì)纖維素物質(zhì)的降解都是在微生物及各種酶的作用下進(jìn)行的[22-23]。β-1，4-葡聚糖酶（又稱纖維二糖水解酶）是一種重要的纖維素降解酶，主要作用于纖維素線狀分子末端，水解β-葡萄糖苷鍵，切下一個纖維二糖分子之后，纖維二糖分子被β-葡萄糖苷酶水解成葡萄糖分子[24]，故β-1，4-葡聚糖酶酶活變化與纖維素的降解密切相關(guān)[25]。從堆肥過程中β-1，4-葡聚糖酶酶活的變化趨勢（圖4a）可以看出，2組堆肥的β-1，4-葡聚糖酶的酶活變化趨勢基本一致，皆出現(xiàn)3次高峰。2組最大峰值皆出現(xiàn)在第25天，其中接菌組的最大峰值為252.18 U/g，高于對照組的最大峰值（236.55 U/g）。接菌組的β-1，4-葡聚糖酶活性在堆肥全程均明顯高于對照組，峰值皆出現(xiàn)在堆肥高溫期，說明嗜熱側(cè)孢霉對β-1，4-葡聚糖酶酶活具有明顯的促進(jìn)作用，且有較強(qiáng)的耐高溫能力，這對于提高纖維素的降解率十分重要。

與纖維素一樣，半纖維素的降解也需要在相關(guān)酶的作用下完成。木聚糖酶是分解半纖維素的酶中一類主要的酶系，包括多種木聚糖內(nèi)切酶和外切酶，能催化水解木聚糖，分解原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，從而促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用和有效物質(zhì)的釋放[26]。從圖4b可以看出，接菌組的木聚糖酶酶活在堆肥過程中出現(xiàn)了3個峰值，分別出現(xiàn)在第10、20、30天，其中最大峰值出現(xiàn)在第30天，為7.90 U/g，此時堆肥溫度為52 ℃;對照組的酶活峰值出現(xiàn)在第2天，為3.01 U/g，此時對照組堆肥的溫度為49 ℃，表明50 ℃左右的溫度可能是木聚糖酶反應(yīng)的最適溫度，這與馮焱等[27]的研究結(jié)果大致相同，同時也說明接種嗜熱側(cè)孢霉對木聚糖酶酶活具有明顯的促進(jìn)作用，有助于堆肥中半纖維素類物質(zhì)的降解。

木質(zhì)素結(jié)構(gòu)復(fù)雜，在自然條件下很難分解或者基本不分解[28]，在堆肥中降解率明顯低于纖維素和半纖維素[29]。在分解木質(zhì)素的酶系中，錳過氧化物酶、木質(zhì)素過氧化物酶和漆酶被認(rèn)為是最為重要的3類酶。其中錳過氧化物酶能氧化木質(zhì)素中約占10%的酚結(jié)構(gòu)，催化氧化Mn2+生成Mn3+，Mn3+能夠穿透木材，氧化酚型有機(jī)物[30]，在木質(zhì)素降解中起重要作用。從圖4c可以看出，在堆肥剛開始的前15 d，錳過氧化物酶酶活較低，對照組樣品中檢測不到，而接菌組在第6天和第10天能檢測到的錳過氧化物酶酶活分別為0.009和0016 U/g。從第15天開始，2組的錳過氧化物酶酶活均有一定上升，出現(xiàn)2個波峰。2組酶活最大值皆出現(xiàn)在堆肥第30天，接菌組的最大值達(dá)到0.359 U/g，是對照組最大值（0.136 U/g）的2.64倍。表明接種嗜熱側(cè)孢霉可以提高錳過氧化物酶活性，對加速木質(zhì)素類物質(zhì)的分解有一定的促進(jìn)作用。

2.5 堆肥過程中微生物動態(tài)變化

從圖5可以看出，在門水平下，2組堆肥樣品中相對豐度超過1%的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)相似，主要細(xì)菌菌群包括變形菌門（Proteobacteria）、厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bcateroidetes）、芽孢桿菌門（Gemmalimonadetes）、放線菌門（Actinobacteria）、綠彎菌門（Chloroflexi）、酸桿菌門（Acidobacteria）、裝甲菌門（Armatimonadetes）、棲熱菌門（Thermi）、藍(lán)藻門（Cyanobacteres）、軟壁菌門（Tenericutes）和互養(yǎng)菌門（Synergistetes）。其中變形菌門、厚壁菌門、擬桿菌門、芽孢桿菌門、放線菌門和綠彎菌門是主要的優(yōu)勢菌群。這與王秀紅等[31]的研究結(jié)果大致相同。

厚壁菌門是一類重要的水解酸化細(xì)菌，可以分泌胞外酶分解多種大分子有機(jī)物[32]。在堆肥初期，厚壁菌門細(xì)菌相對豐度較大。堆肥第2天，對照組和接菌組中厚壁菌門的相對豐度分別為70.5%和91.3%，表明堆肥初期的大分子有機(jī)物主要在厚壁菌門細(xì)菌的作用下迅速降解成為小分子有機(jī)物，接菌后促進(jìn)了厚壁菌門細(xì)菌的生長;但是堆肥10 d后，厚壁菌門細(xì)菌的相對豐度逐漸減少，可能是因為溫度升高導(dǎo)致厚壁菌門細(xì)菌大量死亡。放線菌是一類耐高溫的細(xì)菌，可在高溫的環(huán)境下利用分解木質(zhì)纖維素進(jìn)行大量增殖[33-34]。在此次研究中，堆肥前期雖然也有放線菌出現(xiàn)，但是所占比例并不大，從第10天起，放線菌迅速增殖，并且在堆肥中后期仍保持一定的數(shù)量優(yōu)勢;在堆肥第25天，接菌組放線菌門的相對豐度為59.7%，高于對照組，此時分解纖維素的相關(guān)酶活性皆出現(xiàn)了最高波峰（圖4a）。表明放線菌的增殖促進(jìn)了纖維素的降解。綠彎菌門細(xì)菌也是一類可以降解纖維素類物質(zhì)的細(xì)菌[35]。在此次研究中，綠彎菌門在堆肥中后期才成為優(yōu)勢菌群。接菌組中的綠彎菌門相對豐度略高于對照組。

從圖6可以看出，在屬水平下，2組的真菌群落結(jié)構(gòu)也有所不同。在發(fā)酵前2 d，2組樣品中毛孢子菌屬、節(jié)擔(dān)菌屬和假絲酵母屬為優(yōu)勢菌群。到第10天，糞盤菌屬（Ascobolus）成為主要優(yōu)勢菌群。Ascobolus是子囊菌綱中盤菌亞綱的一個屬。在2組堆肥的整個發(fā)酵過程中，Ascobolus始終存在。有報道表明嗜熱側(cè)孢霉（Sporotrichum thermophile）歸于毀絲菌霉屬（Myceliophtora）;Myceliophtora具有較高的產(chǎn)木聚糖酶和纖維素酶活性[36]。在該研究中，在堆肥第25天開始，Myceliophtora占比增加，而接菌組的Myceliophtora相對豐度迅速增加至68.3%，說明在此時Myceliophtora大量繁殖是由于接種了嗜熱側(cè)孢霉的緣故，也驗證了該試驗所選用的嗜熱側(cè)孢霉在堆肥中適應(yīng)能力較強(qiáng)，作為接種物添加到堆肥中能加快其在高溫期的定殖，對纖維素類物質(zhì)的降解起到加速的作用。

3 討論

堆肥是一個微生物參與的復(fù)雜的物質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，其中木質(zhì)纖維素類物質(zhì)的降解是眾多研究者關(guān)注的重點(diǎn)和難點(diǎn)。促進(jìn)木質(zhì)纖維素降解的途徑有很多，但是外源補(bǔ)充功能性微生物是一條更為環(huán)保和生態(tài)的途徑。該研究將一株嗜熱側(cè)孢霉接種于豬糞木屑堆肥中，接菌組達(dá)到高溫的速度快，并且高溫期持續(xù)時間長，說明接菌后促進(jìn)了堆肥的快速啟動和微生物的代謝作用，產(chǎn)熱增多，提高了堆體中有機(jī)質(zhì)的分解效率。同時，高溫期延長，嗜熱側(cè)孢霉繁殖加快，代謝水平提高，大量纖維素酶類隨之產(chǎn)生，纖維素酶和纖維二糖酶的酶活皆出現(xiàn)3次高峰。且與對照組相比，接菌組的纖維素酶和纖維二糖酶的酶活最大峰值出現(xiàn)時間較早，峰值較高。堆肥結(jié)束時纖維素的相對含量也低于對照組，說明接種嗜熱側(cè)孢霉有利于促進(jìn)纖維素類物質(zhì)的降解。在分解半纖維素物質(zhì)中起主要作用的木聚糖酶酶活在第30天出現(xiàn)最大峰值，而對照組木聚糖酶酶活最大峰值出現(xiàn)在堆肥第2天，且遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于接菌組。說明接種嗜熱側(cè)孢霉對木聚糖酶酶活具有顯著促進(jìn)作用，有助于堆肥中半纖維素類物質(zhì)的降解。相對于纖維素和半纖維素來說，木質(zhì)素更難降解，其相對含量在堆肥結(jié)束時甚至有所增長，這可能是由于木質(zhì)素的降解率低于其他物質(zhì)，堆體總質(zhì)量降低，故木質(zhì)素的相對含量增加。此結(jié)果與王涵[37]的研究結(jié)果相符。但接菌組中木質(zhì)素相對含量的增長幅度要小于對照組。說明接菌處理對木質(zhì)素的降解也有一定的積極作用。在門水平下，2組堆肥樣品中相對豐度超過1%的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)相似。變形菌門、厚壁菌門、擬桿菌門、芽孢桿菌門、放線菌門和綠彎菌門是主要的優(yōu)勢菌群。在屬水平下，2組的真菌群落結(jié)構(gòu)有所不同。高溫期接菌組的嗜熱側(cè)孢霉相對豐度迅速增加，成為最主要的優(yōu)勢菌群，代謝活動加快，而β-1，4-葡聚糖酶活性在此時也明顯提高。說明嗜熱側(cè)孢霉在一定程度上影響了堆肥的真菌群落結(jié)構(gòu)，加速了纖維素類物質(zhì)的降解。

4 結(jié)論

該研究以豬糞和木屑為堆肥原料，接種嗜熱側(cè)孢霉后，促進(jìn)了堆肥的快速啟動，延長了高溫期并提高了溫度峰值，明顯提高了纖維二糖酶和木聚糖酶的活性，促進(jìn)了堆體纖維素和半纖維素類物質(zhì)降解，有利于促進(jìn)堆肥腐熟，提高堆肥品質(zhì)。說明該菌株在處理高木質(zhì)纖維素類農(nóng)業(yè)廢棄物方面有一定的應(yīng)用價值。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉玉瑩，范靜.我國畜禽養(yǎng)殖環(huán)境污染現(xiàn)狀、成因分析及其防治對策[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2018（8）：19-21.

[2] 高孟春，于安，楊麗娟，等.雞糞/木屑強(qiáng)制通風(fēng)堆肥的研究[J].環(huán)境科學(xué)與技術(shù)，2010，33（1）：11-15.

[3] 王佳寧.豬糞堆肥復(fù)合菌劑制備及其效果評價[D].大連：大連理工大學(xué)，2017：5-6.

[4] BERNAL M P，ALBURQUERQUE J A，MORAL R.Composting of animal manures and chemical criteria for compost maturity assessment.A review[J].Bioresource technology，2009，100（22）：5444-5453.

[5] JURADO M，LPEZ M J，SUREZESTRELLA F，et al.Exploiting composting biodiversity：Study of the persistent and biotechnologically relevant microorganisms from lignocellulosebased composting[J].Bioresource technology，2014，162：283-293.

[6] ZENG G M，YU M，CHEN Y N，et al.Effects of inoculation with Phanerochaete chrysosporium at various time points on enzyme activities during agricultural waste composting[J].Bioresource technology，2010，101（1）：222-227.

[7] LIU Y W，F(xiàn)ENG Y，CHENG D M，et al.Dynamics of bacterial composition and the fate of antibiotic resistance genes and mobile genetic elements during the cocomposting with gentamicin fermentation residue and lovastatin fermentation residue[J].Bioresource technology，2018，261：249-256.

[8] WEI Y Q，WU D，WEI D，et al.Improved lignocellulosedegrading performance during straw composting from diverse sources with actinomycetes inoculation by regulating the key enzyme activities[J].Bioresource technology，2019，271：66-74.

[9] 劉佳，李婉，許修宏，等.接種纖維素降解菌對牛糞堆肥微生物群落的影響[J].環(huán)境科學(xué)，2011，32（10）：3073-3081.

[10] 尹靜，劉悅秋，于峰，等.一株木質(zhì)素降解菌的篩選鑒定及其在堆肥中的應(yīng)用[J].中國土壤與肥料，2019（3）：179-185.

[11] 許燕，陳如凱，張木清.嗜熱側(cè)孢霉生物學(xué)特性及其液體發(fā)酵研究[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2008，37（1）：99-104.

[12] MAHESHWARI R，BHARADWAJ G，BHAT M K.Thermophilic fungi：Their physiology and enzymes[J].Microbiology and molecular biology reviews，2000，64（3）：461-488.

[13] 關(guān)松蔭.土壤酶及其研究法[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1986：43-277.

[14] CZEKAA W，MALIN'SKA K，CCERES R，et al.Cocomposting of poultry manure mixtures amended with biocharThe effect of biochar on temperature and CCO2 emission[J].Bioresource technology，2016，200：921-927.

[15] JUSOH M L C，MANAF L A，LATIFF P A.Composting of rice straw with effective microorganisms（EM）and its influence on compost quality[J].Iranian journal of environmental health science & engineering，2013，10（1）：17-25.

[16] 張玉鳳，田慎重，邊文范，等.有機(jī)物料對牛糞好氧堆肥過程的影響[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019，51（5）：76-82.

[17] 王偉東.木質(zhì)纖維素快速分解菌復(fù)合系及有機(jī)肥微好氧新工藝[D].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005：69-70.

[18] TEUTSCHEROVA N，VAZQUEZ E，SANTANA D，et al.Influence of pruning waste compost maturity and biochar on carbon dynamics in acid soil：Incubation study[J].European journal of soil biology，2017，78：66-74.

[19] 路瑤，魏賢勇，宗志敏，等.木質(zhì)素的結(jié)構(gòu)研究與應(yīng)用[J].化學(xué)進(jìn)展，2013，25（5）：838-858.

[20] 黃映芳，蔡明亮，吳敏雅.造紙黑液中木素降解的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[J].紙和造紙，2018，37（1）：12-17.

[21] 王偉東，王小芬，樸哲，等.堆肥化過程中微生物群落的動態(tài)[J].環(huán)境科學(xué)，2007，28（11）：2591-2597.

[22] PREZ J，MUOZDORADO J，DE LA RUBIA T，et al.Biodegradation and biological treatments of cellulose，hemicellulose and lignin：An overview[J].International microbiology，2002，5（2）：53-63.

[23] SNCHEZ C.Lignocellulosic residues：Biodegradation and bioconversion by fungi[J].Biotechnology advances，2009，27（2）：185-194.

[24] 劉潔麗，王靖.生物產(chǎn)纖維素酶研究進(jìn)展[J].化學(xué)與生物工程，2008，25（12）：9-12.

[25] 鄧輝，王成，呂豪豪，等.堆肥過程放線菌演替及其木質(zhì)纖維素降解研究進(jìn)展[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報，2013，19（4）：581-586.

[26] 單志瓊，周峻崗，周宇飛，等.產(chǎn)堿性木聚糖酶菌株的篩選及酶學(xué)性質(zhì)[J].遺傳，2012，34（3）：356-365.

[27] 馮焱，白永勝，黃增輝.木聚糖酶的熱穩(wěn)定性以及最適pH值、溫度的研究[J].飼料工業(yè)，2007，28（18）：17-19.

[28]

IIYAMA K，STONE B A，MACAULEY B J.Compositional changes in compost during composting and growth of Agaricus bisporus[J].Applied and environmental microbiology，1994，60（5）：1538-1546.

[29] JOURAIPHY A，AMIR S，EL GHAROUS M，et al.Chemical and spectroscopic analysis of organic matter transformation during composting of sewage sludge and green plant waste[J].International biodeterioration & biodegradation，2005，56（2）：101-108.

[30] AMBERTBALAY K，DOUGHERTY M，TIEN M.Reactivity of manganese peroxidase：Sitedirected mutagenesis of residues in proximity to the porphyrin ring[J].Archives of biochemistry and biophysics，2000，382（1）：89-94.

[31] 王秀紅，李欣欣，史向遠(yuǎn)，等.好氧堆肥微生物代謝多樣性及其細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)[J].環(huán)境科學(xué)研究，2018，31（8）：1457-1463.

[32] STPIERRE B，WRIGHT A D G.Comparative metagenomic analysis of bacterial populations in three fullscale mesophilic anaerobic manure digesters[J].Applied microbiology and biotechnology，2014，98（6）：2709-2717.

[33] 席北斗，劉鴻亮，白慶中，等.堆肥中纖維素和木質(zhì)素的生物降解研究現(xiàn)狀[J].環(huán)境污染治理技術(shù)與設(shè)備，2002，3（3）：19-23.

[34] STEGER K，SJGRENM，JARVIS ，et al.Development of compost maturity and Actinobacteria populations during fullscale composting of organic household waste[J].Journal of applied microbiology，2007，103（2）：487-498.

[35] RIVIRE D，DESVIGNES V，PELLETIER E，et al.Towards the definition of a core of microorganisms involved in anaerobic digestion of sludge[J].The ISME Journal，2009，3（6）：700-714.

[36] BERKA R M，SCHNEIDER P，GOLIGHTLY E J，et al.Characterization of the gene encoding an extracellular laccase of Myceliophthora thermophila and analysis of the recombinant enzyme expressed in Aspergillus oryzae[J].Applied & environmental microbiology，1997，63（8）：3151-3157.

[37] 王涵.堆肥中β-glucosidase家族微生物群落與纖維素降解的相關(guān)性研究[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016：17-18.