丁建東 朱榮 盧日剛 常艷 陳華 項(xiàng)新華

【摘 要】 [HTH]目的：[HTSS]通過(guò)組織化學(xué)藥品注射用青蒿琥酯含量測(cè)定高效液相色譜法的能力驗(yàn)證，評(píng)價(jià)各參加實(shí)驗(yàn)室化學(xué)藥品含量測(cè)定的能力。[HTH]方法：[HTSS] 采用單因子方差分析法對(duì)能力驗(yàn)證樣品進(jìn)行了均勻性實(shí)驗(yàn) ，采用t檢驗(yàn)對(duì)樣品進(jìn)行穩(wěn)定性考察，均符合要求。采用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)Z比分?jǐn)?shù)法，評(píng)價(jià)各參加實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果。[HTH]結(jié)果：[HTSS] 報(bào)名參加本次能力驗(yàn)證計(jì)劃的實(shí)驗(yàn)室共57家。94.6%的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果為“滿意”。[HTH]結(jié)論：[HTSS]國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室青蒿琥酯含量測(cè)定檢測(cè)能力總體較好， 個(gè)別實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力有待改進(jìn)提高。

【關(guān)鍵詞】 能力驗(yàn)證; 含量測(cè)定;高效液相色譜法;注射用青蒿琥酯

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2021）01-0054-04

Data Assessment and Technical Interpretation of Proficiency Testing for Assays of Artesunate for Injection

DING Jiangdong1 ZHU Rong1 LU Rigang1 CHANG Yang2 CHENG Hua2 XIANG Xinghuang2*

1.Guangxi Institute for food and drug control， Nanning 530021，China;

2. National Institute for Food and Drug Control，Beijing 100050，China

Abstract：[WTHZ]Objective[WTBZ] The proficiency testing for assays of artesunate for injection by HPLC was organized to assess the competences of chemical content determination assays conducted by participants. [WTHZ]Method[WTBZ] The testing was implemented in conformity to CNAS schemes. Uniformity test was applied through One-Way ANOVA to samples， whose stabilities were studied by T test. The z-score was introduced for the assessment. [WTHZ]Results[WTBZ] 1 laboratory quitted among the 57 participants. 53 results were reported satisfactory. 2 performances were unsatisfactory and 1 result was susceptible.94.6% of the laboratory results were satisfactory. [WTHZ]Conclusion[WTBZ] The capacity of national laboratories for assays of artesunate for injection has been ranked as satisfactory according to statistical analysis of the proficiency testing program results. Only a small portion of the participants require further improvement in their capacities.

Keywords：Proficiency Testing; Assay; HPLC; Artesunate for Injection

能力驗(yàn)證是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)能力的有效手段，是實(shí)驗(yàn)室通過(guò)外部措施對(duì)其內(nèi)部質(zhì)量控制方法的一種重要補(bǔ)充手段，是確保實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系持續(xù)改進(jìn)的有效措施之一[1] 。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該積極參與并認(rèn)真對(duì)待每次能力驗(yàn)證，做到為我所用，不斷提升自身管理能力和技術(shù)水平[2]。

注射用青蒿琥酯是我國(guó)擁有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的創(chuàng)新藥，也是首個(gè)獲世界衛(wèi)生組織推薦的重癥瘧疾一線治療藥物，目前研究發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯在其他疾病的治療上也有一定功效[3-5] 。高效液相色譜法是藥品檢驗(yàn)常用的檢測(cè)方法[6]，在藥品檢測(cè)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，已為各國(guó)藥典廣泛收載。本次含量測(cè)定能力驗(yàn)證的主要目的是，考察藥品生產(chǎn)企業(yè)QC實(shí)驗(yàn)室和藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)技術(shù)水平及檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，確定實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行化學(xué)藥品高效液相色譜法進(jìn)行成分含量測(cè)定的能力，識(shí)別實(shí)驗(yàn)室中的問(wèn)題以及實(shí)驗(yàn)室間的差異，增加實(shí)驗(yàn)室客戶對(duì)實(shí)驗(yàn)室能力的信任。文章將就能力驗(yàn)證的實(shí)施過(guò)程和統(tǒng)計(jì)技術(shù)進(jìn)行討論。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀，十萬(wàn)分之一電子天平。

1.2 試藥 雙氫青蒿素對(duì)照品（批號(hào)100184-201202）、青蒿素對(duì)照品（批號(hào)100202-200402）、青蒿琥酯對(duì)照品（批號(hào)100200-201003）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 樣品制備 樣品來(lái)源于桂林南藥股份有限公司生產(chǎn)的原料藥，為白色粉末，裝于西林瓶，軋蓋包裝，每瓶裝量約120 mg，隨機(jī)數(shù)字編號(hào)，編號(hào)為QA0099-**** 。

2.2 樣品均勻性、穩(wěn)定性檢驗(yàn)和運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)

2.2.1 樣品均勻性、常溫穩(wěn)定性、加速穩(wěn)定性檢驗(yàn) 隨機(jī)抽取，隨機(jī)抽取20瓶，在重復(fù)條件下測(cè)定2次。檢驗(yàn)方法按《中國(guó)藥典》2015年版二部“注射用青蒿琥酯”項(xiàng)下含量測(cè)定方法測(cè)定[7]?？疾鞓悠窋M定包裝，在常溫放置0個(gè)月、1個(gè)月、2個(gè)月和在加速（溫度40℃±2℃、相對(duì)濕度75%±5%）下放置的第5、10、15天分別隨機(jī)抽取樣品3份，進(jìn)行重復(fù)測(cè)定2次，所得結(jié)果為穩(wěn)定性的數(shù)據(jù)。

2.2.2 運(yùn)輸過(guò)程穩(wěn)定性試驗(yàn) 根據(jù)地域分布，考慮距離和環(huán)境因素，選擇距離較遠(yuǎn)、氣溫較高的3家實(shí)驗(yàn)室，海南、湖北、西藏各選一個(gè)郵寄試驗(yàn)點(diǎn)，各寄1份樣品，囑其原件郵回，收回后進(jìn)行青蒿琥酯的含量測(cè)定，觀察其穩(wěn)定性情況。

2.2.3 引濕性檢驗(yàn) 取樣品約0.2 g，平鋪于稱量瓶中，精密稱定，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下敞口放置，分別在10 min、30 min、60 min后稱定，計(jì)算引濕增重。

2.3 檢測(cè)要求 本次能力驗(yàn)證對(duì)每個(gè)參加實(shí)驗(yàn)室賦予了一個(gè)唯一代碼。各參加實(shí)驗(yàn)室會(huì)收到 2 支標(biāo)注為：“QA0099-實(shí)驗(yàn)室代碼”的樣品。作業(yè)指導(dǎo)書、結(jié)果報(bào)告單、被測(cè)物品接收狀態(tài)確認(rèn)表。要求實(shí)驗(yàn)室按照作業(yè)指導(dǎo)書的要求在規(guī)定的期限內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)并反饋檢驗(yàn)結(jié)果。

2.4 參加實(shí)驗(yàn)室的具體情況 本次能力驗(yàn)證共有57家實(shí)驗(yàn)室報(bào)名參加，最后反饋檢驗(yàn)結(jié)果的為56家。提交結(jié)果。參加實(shí)驗(yàn)室分布于22個(gè)省（自治區(qū)）、直轄市，其中，食品藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)42家，藥品生產(chǎn)企業(yè)QC實(shí)驗(yàn)室4家，其他檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)10家。

2.5 能力驗(yàn)證數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析的設(shè)計(jì)及評(píng)價(jià)原則

2.5.1 統(tǒng)計(jì)分析的設(shè)計(jì) 本次能力驗(yàn)證采用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)[8]技術(shù)方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，即采用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)計(jì)算各實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的 Z 比分?jǐn)?shù)統(tǒng)計(jì)的算術(shù)平均值作為指定值，傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)差作為能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差。能力驗(yàn)證樣品為單一濃度樣品，按下式分別計(jì)算本次能力驗(yàn)證計(jì)劃參加者的檢測(cè)結(jié)果，按公式計(jì)算Z值：Z=（x-X）/σ，式中x為參加者測(cè)試結(jié)果;X為算術(shù)平均值;σ為能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差。

本次能力驗(yàn)證以Z比分?jǐn)?shù)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，即：若|Z|≤2，檢測(cè)結(jié)果為滿意;若 2<|Z|<3，檢測(cè)結(jié)果為有問(wèn)題;若|Z|≥3，檢測(cè)結(jié)果為不滿意或離群值。

2.5.2 評(píng)價(jià)原則 本次能力驗(yàn)證以每個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)告的樣品的檢測(cè)結(jié)果為基礎(chǔ)，采用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)技術(shù)進(jìn)行處理，用算術(shù)平均值作為指定值，傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)差作為能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差。主要統(tǒng)計(jì)量包括：樣本數(shù)、算術(shù)平均值、傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)差等。

3 統(tǒng)計(jì)處理及統(tǒng)計(jì)分析評(píng)價(jià)

3.1 樣品均勻性檢驗(yàn)結(jié)果 采用單因子方差分析法[9]對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，均勻性的試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果和方差分析見(jiàn)表1和表2。樣品檢測(cè)值的 F 值為 1.707，均小于 F 臨界值 F0.05（19，20） （2.137），組間無(wú)顯著差異：F0.05，樣品的均勻性符合要求。

3.2 樣品穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)樣品均勻性試樣，樣品的初始含量100.27%。樣品進(jìn)行常溫穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果和統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果分別見(jiàn)表3。

采用 t 檢驗(yàn)法[9]，分別對(duì)常溫穩(wěn)定性檢驗(yàn)（F 值1.016，小于Fcrit 3.982）、加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)（F 值1.356小于Fcrit 3.239）、運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)的樣品（F 值4.559小于Fcrit 5.192）結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理， F 值均小于F 臨界值，且P-value>0.05，表明無(wú)顯著性差異，樣品的穩(wěn)定性符合要求。

3.3 引濕性檢驗(yàn)結(jié)果 取樣品約0.2 g，平鋪于稱量瓶中，精密稱定，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下敞口放置，分別在10 min、30 min、60 min后稱定，計(jì)算引濕增重，均小于0.1%，表明試驗(yàn)取樣時(shí)，水分對(duì)結(jié)果的影響可以忽略。

3.4 能力驗(yàn)證結(jié)果 報(bào)名參加本次能力驗(yàn)證計(jì)劃的實(shí)驗(yàn)室共57家。1家中途退出，56家報(bào)告了結(jié)果。使用SPSS（13.0版本）數(shù)理統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)56家實(shí)驗(yàn)室測(cè)得的青蒿琥酯含量數(shù)據(jù)進(jìn)行Kolmogorov-Smirnov法正態(tài)性檢驗(yàn) ，結(jié)果顯示：Kolmogorov-Smirnov Z值為0.863，P值大于0.05（P=0.446），接受正態(tài)分布的假設(shè)。同時(shí)采用格拉布斯準(zhǔn)則[11]判斷無(wú)異常值，基于這種分布，適合采用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)辦法評(píng)價(jià)各參加實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果。經(jīng)典統(tǒng)計(jì)參數(shù)匯總見(jiàn)表4。結(jié)果滿意的、不滿意的、可疑的實(shí)驗(yàn)室分別為53家、2家和1家，占反饋結(jié)果實(shí)驗(yàn)室總數(shù)（56家）比例分別為94.6%、3.6%和1.8%。為了清晰表示各實(shí)驗(yàn)室參加能力驗(yàn)證計(jì)劃的結(jié)果，能力驗(yàn)證的結(jié)果使用Z比分?jǐn)?shù)柱狀圖表示（見(jiàn)圖 1），使每個(gè)實(shí)驗(yàn)室能夠很容易地與其它實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果進(jìn)行比較。[FL）]

4 技術(shù)分析及技術(shù)建議

4.1 不滿意和可疑結(jié)果原因分析 色譜分離及色譜行為欠佳從本次能力驗(yàn)證提供的原始記錄系統(tǒng)適用性色譜圖看，2家離群的實(shí)驗(yàn)室中，1家分離度1.4，未達(dá)要求，主峰明顯變形，導(dǎo)致其含量測(cè)定結(jié)果與其他實(shí)驗(yàn)室之間有較大的差異;有一家色譜峰主峰略有變形。1家實(shí)驗(yàn)室的主峰與雙氫青蒿素之間還有未知峰積分，存在色譜行為相關(guān)參數(shù)相對(duì)較差的現(xiàn)象。

4.2 記錄問(wèn)題 記錄存在以下問(wèn)題：①液相色譜分析圖譜缺系統(tǒng)適用性試驗(yàn)圖;②對(duì)照品的配置中未見(jiàn)稱量記錄;③缺對(duì)照品的稱量記錄及對(duì)照品批號(hào)等關(guān)鍵信息記錄;④有手動(dòng)積分的情況。以上數(shù)據(jù)反映部分參加實(shí)驗(yàn)室在數(shù)據(jù)的可靠性、完整性方面的管理有待提高。

4.3 電子數(shù)據(jù)存儲(chǔ)問(wèn)題 原始記錄有2家實(shí)驗(yàn)室的色譜圖沒(méi)有存盤路徑，建議為利于檢驗(yàn)的溯源，圖譜的存盤路徑應(yīng)包含操作者姓名，一目了然，便于檢索，建議為：//姓名/檢品編號(hào)+檢品名稱;有2家色譜數(shù)據(jù)采集方法、分析方法和結(jié)果圖，保存于系統(tǒng)盤（C盤），建議實(shí)驗(yàn)室加強(qiáng)數(shù)據(jù)的安全性管理，以免系統(tǒng)崩潰時(shí)，數(shù)據(jù)無(wú)法恢復(fù)，給溯源帶來(lái)問(wèn)題。

4.4 技術(shù)建議 此次能力驗(yàn)證94.6%的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果為“滿意”，說(shuō)明多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在執(zhí)行中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)時(shí)能夠保證測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。但也有少部分實(shí)驗(yàn)室由于色譜條件不夠理想、實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果為“可疑”甚至“不滿意”，建議加強(qiáng)人員色譜技術(shù)分析的培訓(xùn)。

5 討論

5.1 設(shè)備和色譜柱情況 根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室提交原始記錄，使用的儀器設(shè)備和色譜柱均不同，在本次計(jì)劃中有17種不同品牌和10種規(guī)格的色譜柱被使用，涉及6種進(jìn)口品牌7種不同型號(hào)的高效液相色譜儀。提示，設(shè)備型號(hào)和色譜柱對(duì)該檢測(cè)結(jié)果影響不大，表明標(biāo)準(zhǔn)的適用性良好。

5.2 科學(xué)選擇統(tǒng)計(jì)方法 本次能力驗(yàn)證曾采用穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)（四分位距）Z比分?jǐn)?shù)法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果有5家離群，3家可疑，滿意率為83%，但由于實(shí)驗(yàn)室上報(bào)數(shù)據(jù)相對(duì)較集中，穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)四分位法計(jì)算得到的標(biāo)準(zhǔn)偏差過(guò)嚴(yán)，導(dǎo)致滿意率明顯下降，易出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)“棄真”錯(cuò)誤。改用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)，可有效避免這類錯(cuò)誤。所以，為確保能力驗(yàn)證計(jì)劃的科學(xué)性，使所有參加能力驗(yàn)證活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室都能獲得公平公正的評(píng)價(jià)，選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法十分重要[11]。

5.3 記錄的重要性 本次能力驗(yàn)證采用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)Z比分?jǐn)?shù)法，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室獲得了滿意的結(jié)果，真實(shí)的反映了實(shí)驗(yàn)室的能力水平。但從各實(shí)驗(yàn)室提交的原始記錄看，還存在一定的問(wèn)題，實(shí)驗(yàn)室需引起重視并加以改進(jìn)。詳實(shí)的記錄是質(zhì)量體系成熟的標(biāo)志，是支持檢驗(yàn)結(jié)果和保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員的最佳物證[12]，同時(shí)也是實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛩菰春蛷?fù)現(xiàn)的依據(jù)。

6 結(jié)論

通過(guò)本次注射用青蒿琥酯含量測(cè)定能力驗(yàn)證活動(dòng)，結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)室高效液相色譜法的檢測(cè)能力總體較好， 個(gè)別不滿意實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)一步查證原因，采取措施及時(shí)糾正。今后不僅要加強(qiáng)藥品檢測(cè)人員的業(yè)務(wù)綜合技能的培訓(xùn)，還要重視實(shí)驗(yàn)記錄的重要性，確保檢測(cè)數(shù)據(jù)的溯源性及準(zhǔn)確可靠性。

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（收稿日期：2020-07-17 編輯：劉斌）