龔建平，龍 偉，呂亞寧，吳 東，黃玉林，陳小連

（1. 江西中醫(yī)藥大學藥學院，江西 南昌 330004；2. 江西中醫(yī)藥大學中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心，江西 南昌 330006；3. 江西省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，江西 南昌 330200）

野葛(Pueraria lobata)是豆科葛屬多年生纏繞性藤本植物，具有較高的藥用和食用價值，我國衛(wèi)生部已將葛根列入“既是食品又是藥品的物品名單”中。隨著人們對野葛研究的不斷深入和葛根深加工產(chǎn)品的進一步開發(fā)利用，野葛種植面積越來越大。葛的根、莖、葉和花均可入藥或開發(fā)為保健食品，然而人們對葛資源的利用仍然以其傳統(tǒng)藥用部位根部入藥或制作葛粉，生產(chǎn)和收獲時野葛的莖和葉多作廢棄物丟掉，造成資源的極大浪費和生態(tài)環(huán)境的污染[1]。已有研究表明，葛葉中含有17.6%～21.2%的粗蛋白質(zhì)、2.36%～2.74%的粗脂肪、1.12%～1.38%的鈣、0.15%～0.29%的磷、粗纖維含量較低(8.85%～12.3%)，含有16 種氨基酸、多種礦物元素和維生素且含量較高[2-4]。另外，葛葉中還含有豐富的異黃酮類物質(zhì)[5]，主要有葛根素、大豆苷、大豆苷元等多種生物活性物質(zhì)[6-7]?！侗静輬D經(jīng)》中記載葛“葉主金刃瘡，山行傷刺血出，卒不可得藥，但葉敷之，甚效”，葛葉具有收斂止血、消腫止痛的功效[8]。葛葉的飼用價值較高，已在豬、兔、羊等動物飼糧中應用，可一定程度提高動物生長性能和養(yǎng)殖效益[9-12]，然而有關葛葉在肉雞飼糧中的應用還未見報道。為此，在肉雞飼糧中添加葛葉粉，研究葛葉粉對其生長性能、血清生化、抗氧化和免疫指標的影響，可為葛葉在肉雞生產(chǎn)中的應用提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

葛葉粉由新鮮野葛葉片經(jīng)日光曬干、粉碎制成，由德興市宋氏葛業(yè)有限公司提供，經(jīng)試驗和檢測，干物質(zhì)含量92.29%，總能16.31 MJ·kg?1，禽代謝能4.60 MJ·kg?1，粗 蛋 白 含 量17.06%，粗 纖 維 含 量15%，粗脂肪含量4.2%，粗灰分含量14.6%，鈣含量0.79%，總磷含量0.17%，蛋氨酸含量0.097%，賴氨酸含量0.129%，胱氨酸含量0.146%。

1.2 試驗動物與分組

選擇在同一條件下飼養(yǎng)的體重相近[(325.59 ±1.84) g]的21 日齡新廣麻雞母雞384 只，隨機分為4 組，每組6 個重復，每個重復16 只，各組試驗雞初始體重無顯著差異(P ＞ 0.05)，分別飼喂含0 (對照組)、1%、2%和3%葛葉粉的試驗飼糧，試驗期共49 d。試驗在江西省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所試驗雞場開展，采用三層立體網(wǎng)養(yǎng)，試驗雞自由采食和飲水，按常規(guī)程序接種免疫。試驗飼糧組成和營養(yǎng)水平如表1 所列。

1.3 測定指標與方法

1.3.1 生長性能

試驗期間以重復為單位記錄試驗雞的采食量、稱量試驗雞21 日齡、42 日齡和70 日齡空腹體重，計算各階段試驗雞的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料肉比(F/G)。

表1 試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of the experimental diets (air-dry basis)

1.3.2 血樣采集與血清制備

試驗期末于試驗雞禁食12 h 后，每重復選取2 只接近平均體重的雞，翅靜脈采血5 mL，分離出血清，于?20 ℃保存待測。

1.3.3 血清指標測定

采用試劑盒法測定血清生化指標，包括總蛋白(total protein, TP)、白 蛋 白(albumin, ALB)、尿 素 氮(blood urea nitrogen, BUN)、甘油三酯(triglyceride, TG)、總膽固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、堿 性 磷 酸 酶(alkaline phosphatase,ALP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate transaminase, AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase, ALT)和抗氧化指標，包括總抗氧化能力(total antioxidant capacity, TAOC)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)活力及丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量，所用試劑盒購于南京建成生物工程研究所；免疫指標包括免疫球蛋白A (IgA)、IgG、IgM、腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、白細胞介素-1β (IL-1β)、白細胞介素-2(IL-2)、白細胞介素-6 (IL-6)等，所用試驗盒購于美國R & D Systems 公司。

1.4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析方法

采用Excel 對數(shù)據(jù)進行整理，SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，對組間差異進行LSD 多重比較，P ＜ 0.05 表示差異顯著，P ＞ 0.05 表示差異不顯著，結(jié)果以平均值 ± 標準差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧中添加葛葉粉對肉雞生長性能的影響

試驗結(jié)果(表2)顯示，肉雞飼糧中添加1%～3%葛葉粉對肉雞前期、后期及全期的平均日增重 、平均日采 食量和料肉比均無顯著影響(P ＞ 0.05)。

2.2 試驗飼糧中添加不同比例葛葉粉對肉雞血清生化指標的影響

試驗結(jié)果(表3)顯示，與對照組相比，肉雞飼糧中添加1%的葛葉粉對肉雞血清生化指標無顯著影響(P ＞ 0.05)；添加2%葛葉粉顯著提高肉雞血清ALB 和LDL 含量、降低TG 含量和AST 活性(P ＜ 0.05)；添加3%葛葉粉顯著提高肉雞血清TP、ALB 和LDL含量，顯著降低BUN、TG、TC 和HDL 含量、AST 和ALT 活性(P ＜ 0.05)。

表2 葛葉粉對肉雞生長性能的影響Table 2 Effects of kudzu leaf meal on the growth performance of broilers

表3 葛葉粉對肉雞血清生化指標的影響Table 3 Effects of kudzu leaf meal on the serum biochemical indexes for broilers

2.3 試驗飼糧中添加不同比例葛葉粉對肉雞血清抗氧化性能的影響

試驗結(jié)果(表4)顯示，與對照組相比，添加1%～3%葛葉粉對肉雞血清SOD 活性無顯著影響(P ＞ 0.05)，可顯著提高肉雞血清T-AOC 和GSHPx 活性(P ＜ 0.05)，添加3%葛葉粉可顯著降低血清MDA 含量。

表4 葛葉粉對肉雞血清抗氧化性能的影響Table 4 Effects of kudzu leaf meal on the serum antioxidant function of broilers

2.4 試驗飼糧中添加不同比例葛葉粉對肉雞血清免疫性能的影響

試驗結(jié)果(表5)顯示，與對照相比，添加1%葛葉粉顯著提高肉雞血清IgM 含量(P ＜ 0.05)；添加2%葛葉粉顯著提高肉雞血清IgM 含量、降低IL-1β 含量；添加3%葛葉粉顯著提高血清IgG、IgM 含量、顯著降低了IL-1β 和IL-2 含量。添加葛葉粉對肉 雞 血 清IgA、TNF-α、IL-6指 標 無 顯 著 差 異(P ＞0.05)。

表5 葛葉粉對肉雞血清免疫指標的影響Table 5 Effects of kudzu leaf meal on the serum immune function of broilers

3 討論與結(jié)論

已有研究表明，葛根中的主要活性成分葛根素、大豆苷、大豆苷元在葛葉中同樣存在，且含量較高[6]，部分葛葉中總黃酮含量還高于葛根。曾慧婷等[1]研究表明，野葛和贛葛2 號葛葉中總黃酮含量分別為1.83%和2.38%，分別比根中總黃酮含量高49.3%和13.3%。葛葉中還含有較高的粗蛋白、微量元素和維生素，由此可見，葛葉具有較大的開發(fā)利用價值。目前關于葛葉粉對肉雞生長性能的影響尚未見報道。在本研究中，肉雞飼糧中添加1%～3%葛葉粉對肉雞ADG、ADFI 和F/G 均無顯著影響，說明葛葉粉的添加不會影響肉雞飼料的適口性，添加量不超過3%對肉雞的生長無不良影響，從飼料資源的開發(fā)利用來看，在肉雞飼糧中適量的葛葉粉是可行的。本研究結(jié)果與野葛提取物對動物生長性能的影響結(jié)果類似。田青[13]和劉瑞玲[14]報道，葛根素可一定程度提高肉鴨的生長性能，但與對照組差異不顯著。劉博等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在AA 肉雞基礎飼糧中添加10 mg?kg?1葛根總黃酮，對肉雞ADFI 無顯著影響，但提高了肉雞的ADG，降低了肉雞的F/G，而添加250 mg?kg?1和1 250 mg?kg?1葛根總黃酮，對AA肉雞的生長性能無顯著影響。高靖等[16]研究表明，葛根提取物對哺乳母豬的采食量、料乳比等生長性能無顯著影響。呂夢云[5]報道，葛藤黃酮提取物對肉雞的生產(chǎn)性能無顯著影響，也有其他黃酮類提取物對肉雞生長性能無顯著影響的報道[17-19]。

血清生化指標是反映機體物質(zhì)代謝變化和組織功能正常的重要指標之一[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，添加3%的葛葉粉顯著提高了肉雞血清總蛋白和白蛋白含量、降低了血清尿素氮含量，說明葛葉粉促進了肉雞體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成代謝，蛋白質(zhì)利用率提高，有利于機體生長，這與王芳芳等[21]對葛根異黃酮的研究結(jié)果一致。血清中甘油三酯、總膽固醇和脂蛋白含量是體內(nèi)脂肪代謝的重要指標[22]。本研究中，添加3%的葛葉粉顯著提高了肉雞低密度脂蛋白含量，顯著降低了甘油三酯、總膽固醇和高密度脂蛋白含量，表明葛葉粉促進了肉雞脂類代謝，且對肉雞無毒副作用，這可能與葛根提取物中黃酮類物質(zhì)具有調(diào)節(jié)血清和肝臟脂質(zhì)代謝的作用有關[23]。谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶是機體內(nèi)重要的轉(zhuǎn)氨酶，當血清中兩種酶含量升高，說明肝細胞受到一定程度的損傷[24]，因此也是反映肝臟和心臟健康狀況的重要指標[25]。本研究添加葛葉粉顯著降低了肉雞血清谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性，提示葛葉粉具有一定保護肉雞肝臟的作用，已有研究表明，葛根素對急性肝損傷具有保護作用[26]。

正常情況下，動物代謝過程產(chǎn)生的活性氧自由基會被體內(nèi)固有抗氧化系統(tǒng)清除，自由基的生成和清除處于動態(tài)平衡中，一旦平衡被破壞，過量的自由基攻擊細胞膜、蛋白質(zhì)、DNA 等生物大分子，引起細胞損傷和凋亡[27]。機體內(nèi)T-AOC、SOD、GSH-Px活力和MDA 含量反映了機體抗氧化能力及脂質(zhì)過氧化程度。有研究表明，葛根素具有較強的抗氧化、抗腫瘤和抗凋亡效果，保護血管和神經(jīng)活性[28]。徐曉虹[29]報道，葛根素能顯著降低血清MDA 含量，使衰老小鼠體內(nèi)血清SOD 的活性顯著升高。李德生等[30]報道，在母豬飼糧中添加葛根素類異黃酮物質(zhì)能夠顯著降低母豬血清中MDA 含量。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加1%～3%葛葉粉可顯著提高肉雞血清T-AOC 和GSH-Px 活性，且添加3%葛葉粉顯著降低了血清MDA 含量，此結(jié)果與上述結(jié)論基本一致，其原因可能與葛葉中含有豐富的異黃酮類物質(zhì)有關，其能夠顯著改善機體抗氧化水平。

血清免疫球蛋白和細胞因子是反映機體免疫功能的指標。已有研究表明，野葛提取物具有提高機體免疫力作用。徐洋等[31]研究表明，基礎日糧中添加0.1%葛根素提取物，肉牛血清中IgG、IgM 含量相比對照組顯著提高了9.45%、8.33%。葛根素對T 淋巴細胞免疫功能同樣有促進作用[32]。徐松琪[33]發(fā)現(xiàn)，葛根提取物可提高哺乳母豬血清IgA 和IgG含量，呂夢云[5]研究表明，葛藤黃酮提取物顯著提高了肉雞免疫性能。在本研究中，添加葛葉粉顯著提高了肉雞血清IgG 和IgM 含量，顯著降低了IL-1β和IL-2 含量，這提示飼糧中添加一定水平的葛葉粉具有改善肉雞免疫功能的作用。

綜上，飼糧中添加1%～3%葛葉粉對肉雞生長性能無負面影響，能在一定程度上提高肉雞抗氧化性能和免疫功能，有利于機體健康。葛葉粉可應用到肉雞飼料中，添加3%效果更好。