王斌，梁偉龍，林欽賢，張華勇，康志英

(1.廣州市香雪制藥股份有限公司，廣東 廣州 510663；2.四川香雪制藥有限公司，四川 南充 637000；3.寧夏隆德縣六盤山中藥資源開發(fā)有限公司，寧夏 固原 756300)

鄰苯二甲酸酯(phthalic acid esters，PAEs)，又稱酞酸酯，是鄰苯二甲酸形成的酯的統(tǒng)稱，主要作為增塑劑(塑化劑)使用，添加到塑膠中以增強(qiáng)彈性、透明度、耐用性和使用壽命，鄰苯二甲酸二辛酯(DEHP)為其最重要的品種[1]。PAEs在多種產(chǎn)品中使用，例如玩具[2]、食品包裝材料[3]、藥品[4-8]、化妝品[9-10]、洗滌劑[11]等?，F(xiàn)代研究表明：PAEs具有高穩(wěn)定性、低揮發(fā)性，易擴(kuò)散到空氣、飲用水、土壤或與之接觸的物品中，可通過(guò)呼吸、皮膚接觸和飲食等途徑進(jìn)入人體，改變?nèi)梭w雌激素水平，導(dǎo)致細(xì)胞突變、致畸、內(nèi)分泌失調(diào)、生殖系統(tǒng)及腎臟損害等[12]。

廣藿香油，別名百秋李油，為唇形科刺蕊草屬植物廣藿香[Pogostemoncablin(Blanco) Benth.]的干燥地上部分提取的揮發(fā)油[13]，為廣藿香的主要有效成分。目前市場(chǎng)上出售的廣藿香油以塑料瓶或桶裝為主，鄰苯二甲酸酯類塑化劑在包裝、運(yùn)輸、儲(chǔ)存過(guò)程中的遷移是一個(gè)安全隱患，但關(guān)于廣藿香油中塑化劑的檢測(cè)研究較少，因此，本文基于采用氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術(shù)，建立一種操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、檢測(cè)限低、準(zhǔn)確性高的廣藿香油中鄰苯二甲酸酯類塑化劑的檢測(cè)方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 QP2010 Ultra型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(日本島津公司)；DB-5MS毛細(xì)管柱(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm，安捷倫科技有限公司)；XS-204型萬(wàn)分之一電子天平、MX5型百萬(wàn)分之一電子天平(梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易有限公司)；KQ-500VDE型超聲波發(fā)生器(昆山市超聲儀器有限公司)；RE-52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；SHZ-88型恒溫振蕩器(常州恒德儀器制造有限公司)；TDZ5-WS型離心機(jī)(上海喬躍電子有限公司)；TC-15型電熱套(海寧市新華醫(yī)療器械廠)；XH-D型調(diào)速旋渦混合器(無(wú)錫沃信儀器有限公司)。

1.2 材料 鄰苯二甲酸二甲酯(DMP，純度：99.2%)、鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP，純度：99.9%)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP，純度：99.7%)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP，純度：98.9%)、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP，純度：99.9%)、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP，純度：97.9%)、鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP，純度：98.5%)、鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP，純度：96.6%)、鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP，純度：98.3%)、鄰苯二甲酸二戊酯(DPP，純度：98.4%)、鄰苯二甲酸二己酯(DHXP，純度：98.4%)、鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP，純度：99.8%)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP，純度：99.5%)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP，純度：95.4%)、鄰苯二甲酸二壬酯(DNP，純度：98.5%)均購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司；正己烷(Merck公司)；氦氣(深圳天藍(lán)工業(yè)氣體有限公司，純度≥99.999%)。市售廣藿香油及自提廣藿香油，經(jīng)廣州市香雪制藥股份有限公司康志英制藥高級(jí)工程師鑒定為唇形科刺蕊草屬植物廣藿香 [Pogostemoncablin(Blanco) Benth.]的干燥地上部分經(jīng)水蒸氣蒸餾提取的揮發(fā)油。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 柱溫為程序升溫：初始溫度為60 ℃，保持1 min，之后以20 ℃·min-1升至220 ℃，再以5 ℃·min-1升至250 ℃，保持1 min，再以20 ℃·min-1升至290 ℃，保持7.5 min；檢測(cè)器溫度為260 ℃，進(jìn)樣口溫度為260 ℃；載氣：氦氣；流速1 mL·min-1；進(jìn)樣方式：自動(dòng)，不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL；電離方式：電子轟擊源(EI)；離子源溫度：230 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；采集模式：選擇離子掃描模式(SIM)；離子源電壓：70 eV；溶劑延遲：7 min。15種鄰苯二甲酸酯類塑化劑質(zhì)量濃度為1 mg·L-1的GC-MS總離子流圖見(jiàn)圖1，其具體的定性和定量離子見(jiàn)表1。

圖1 15種PAEs GC-MS總離子流圖 注：15種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的出峰順序依次為：1-DMP、2-DEP、3-DIBP、4-DBP、5-DMEP、6-BMPP、7-DEEP、8-DPP、9-DHXP、10-BBP、11-DBEP、12-DCHP、13-DEHP、14-DNOP、15-DNP

表1 15種PAEs的定性和定量離子

2.2 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的制備 精密稱取上述15種標(biāo)準(zhǔn)品各約0.1 mg，用正己烷配制成濃度為10 mg·L-1的儲(chǔ)備液，于4 ℃冰箱中避光保存，備用。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備 將上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用正己烷稀釋至每1 mL分別含0.05、0.1、0.3、0.5、1.0 mg的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，即得。

2.4 供試品溶液的制備 取本品溶液約2 g，精密稱定，置50 mL具塞反應(yīng)管中，加入2 mL蒸餾水，渦旋混勻，再準(zhǔn)確加入正己烷20 mL，渦旋1 min，劇烈振搖1 min，超聲提取30 min，1 000 r·min-1離心5 min，取上清液轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，于40 ℃下蒸干，轉(zhuǎn)移至1 mL量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻，0.22 μm濾膜濾過(guò)，即得。

2.5 線性范圍 取“2.3”項(xiàng)下的15種PAEs的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析。試驗(yàn)采用逐級(jí)稀釋的方法，以信噪比(S/N)等于3，進(jìn)樣量為1 μL時(shí)計(jì)算方法的檢出限，以峰面積(Y)對(duì)溶度(X)進(jìn)行線性回歸。15種PAEs的回歸方程和線性范圍見(jiàn)表2。

表2 15種PAEs的回歸方程和檢出限

2.6 精密度試驗(yàn) 取“2.3”項(xiàng)下濃度為1.0 mg·mL-1混合對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄各成分的峰面積。結(jié)果顯示15種PAEs的峰面積RSD均小于2.0%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.7 加標(biāo)回收率試驗(yàn) 為驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性，對(duì)陰性樣品進(jìn)行了0.05、0.3 mg·L-12個(gè)劑量的加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)水平分別進(jìn)行了6次的平行試驗(yàn)，計(jì)算平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 15種PAEs加標(biāo)回收率結(jié)果(n=6)

2.8 測(cè)定法 將不同來(lái)源的廣藿香油按“2.4”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，其計(jì)算公式如下：

式中：W-樣品含量(mg·kg-1)；C-樣品溶液中塑化劑的濃度(mg·L-1)；Co-方法空白中塑化劑的濃度(mg·L-1)；V-樣品溶液的體積(mL)；f-稀釋倍數(shù)；m-樣品的質(zhì)量(g)。

表4試驗(yàn)結(jié)果顯示：市售廣藿香油中，除S3及S7未檢測(cè)到塑化劑外，其余批次均有不同程度的檢出，其中S1檢出DBP為0.042 mg·kg-1，S2檢出DBP為0.058 mg·kg-1，S6檢出DEHP為0.035 mg·kg-1，根據(jù)原衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于通報(bào)食品及食品添加劑鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)最大殘留量的函[14]規(guī)定：DEHP、DINP、DBP最大殘留量分別為1.5、9.0和0.3 mg·kg-1，以上檢測(cè)的3批次的廣藿香油塑化劑的殘留量均符合規(guī)定；而在自提廣藿香油中均未檢出塑化劑，結(jié)果提示市售塑料瓶裝廣藿香油的塑化劑在儲(chǔ)存過(guò)程中的遷移可能是其污染的途徑之一。

表4 塑化劑檢測(cè)結(jié)果(n=3)

3 結(jié)論與討論

PAEs一般呈無(wú)色透明油狀黏稠液體，水溶性低，水解慢，易溶于有機(jī)溶劑和類脂[15]，提取溶劑常用正己烷、甲醇等，但甲醇的極性較大，提取的雜質(zhì)較多，存在一定困難，本試驗(yàn)考察了索氏提取、超聲提取、液-液萃取、固相萃取等提取方式，發(fā)現(xiàn)超聲提取分離率高，提取時(shí)間短，因此本試驗(yàn)選擇正己烷超聲提取。另外，試驗(yàn)前必須對(duì)檢測(cè)試劑、玻璃制品、超純水系統(tǒng)等進(jìn)行凈化處理，并且在測(cè)定試劑空白時(shí)，進(jìn)行比較和扣除。

農(nóng)藥殘留、提取工藝、包裝材料、運(yùn)輸儲(chǔ)存過(guò)程中塑化劑的遷移可能是中藥油脂污染的重要來(lái)源[15]，因此建立中藥油脂有效合理的安全性評(píng)價(jià)方法及限度至關(guān)重要。PAEs危害嚴(yán)重，但在目前實(shí)際生產(chǎn)和生活中尚不能完全離開它們，如何減少或去除PAEs的污染已經(jīng)成為科學(xué)工作者亟待解決的問(wèn)題。