李博
大慶油田總醫(yī)院,黑龍江 大慶 163001
在惡性腫瘤診斷中組織病理診斷一直是金標(biāo)準(zhǔn)[1],也是主要方式,在病理組織切片制作過程中,免疫組化技術(shù)就是主要的一種,是通過染色反應(yīng),對(duì)細(xì)胞內(nèi)抗原或組織進(jìn)行定位,在惡性腫瘤診斷、鑒別、預(yù)后判定等方面被廣泛應(yīng)用。有著操作簡(jiǎn)單、標(biāo)本保存時(shí)間長(zhǎng)、定位準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)[2]。為了進(jìn)一步確定其應(yīng)用價(jià)值本院進(jìn)行了此次研究,詳情如下:
1.1一般資料 將90例2019年9月-2020年9月在本院做病理組織檢驗(yàn)患者的病理組織標(biāo)本作為本次研究對(duì)象,并利用數(shù)字表法分組,隨機(jī)分成各45片(例)。對(duì)照組患者35~65歲,中間值(49.62±5.58)歲,男女比例20:25,標(biāo)本來源:8例胃癌、7例乳腺癌、12例肺癌、18例肝癌。研究組患者37~68歲,中間值(43.71±5.26)歲,男女比例21:24,標(biāo)本來源:9例胃癌、6例乳腺癌、13例肺癌、17例肝癌。比較兩組標(biāo)本及患者的基礎(chǔ)信息無顯著差異(P>0.05),不會(huì)對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生影響。
1.2方法
1.2.1對(duì)照組 在病理組織切片制作過程中采用傳統(tǒng)方法,①病理組織離體后30分鐘內(nèi)固定處理,放到低溫環(huán)境中或是放在固定液中保存。之后將其放到10%中性緩沖甲醛溶液內(nèi),處理8~24小時(shí)[3]。②經(jīng)過處理的標(biāo)本通過熱修復(fù)法,修復(fù)和引導(dǎo)抗原,抗原修復(fù)時(shí)間為3~15分鐘,修復(fù)液pH值7.5~8.5,修復(fù)溫度大于100℃。③根據(jù)病理組織切片制作流程規(guī)范操作,為了防止發(fā)生邊緣效應(yīng),要均勻添加試劑、劑量充足,脫蠟時(shí)間充足,試劑面積比切片組織大0.05~0.35cm。
1.2.2研究組 在病理組織切片制作過程中采用免疫組化技術(shù),①在室溫環(huán)境中,進(jìn)行常規(guī)脫蠟切片操作,之后在3%雙氧水中浸泡組織標(biāo)本20分鐘,再對(duì)組織切片反復(fù)沖洗三次,沖洗液為磷酸鹽緩沖液,每次沖洗時(shí)長(zhǎng)為5分鐘,共沖洗15分鐘[4]。②在1000mL燒杯中放入pH值為6的檸檬酸緩沖液(700mL),加熱到沸騰狀態(tài),將組織切片放入其中,繼續(xù)加熱15分鐘取出,所有切片滴加一抗后進(jìn)行過夜孵育,冰箱溫度為40℃。③取出組織切片,使用磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗三次,每次5分鐘[5]。④在室溫狀態(tài)下,所有切片滴加二抗,進(jìn)行15分鐘的孵育,之后再次使用磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗三次,每次5分鐘。⑤把組織切片放到顯色劑中5~10分鐘,取出后用蘇木精襯染、水洗,再用脫水透明樹膠封固。
1.3觀察指標(biāo) 對(duì)兩組病理組織切片制作質(zhì)量做評(píng)估,顯微鏡下不容易觀察,對(duì)比不明顯,氣泡或褶皺較多、組織結(jié)構(gòu)受損、編號(hào)不清,則為差質(zhì)片;顯微鏡下比較容易觀察,沒有脫片、非特異性著色等情況,無氣泡或污染,褶皺少,無組織結(jié)構(gòu)受損,則為良質(zhì)片;顯微鏡下非常容易觀察,染色明顯,可見清晰的細(xì)胞形態(tài)、沒有裂痕損害情況,薄厚均勻,組織結(jié)構(gòu)完整,則為優(yōu)質(zhì)片。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 借助SPSS22.0軟件處理研究數(shù)據(jù),x2檢驗(yàn)定數(shù)資料,用百分比描述,統(tǒng)計(jì)學(xué)意義成立時(shí)P<0.05。
研究組差質(zhì)片2片(4.44%)、良質(zhì)片16片(35.56%)、優(yōu)質(zhì)片27片(60.00%),制片優(yōu)良率為95.56%;對(duì)照組差質(zhì)片12片(26.67%)、良質(zhì)片18片(40.00%)、優(yōu)質(zhì)片15片(33.33%),制片優(yōu)良率為73.33%,統(tǒng)計(jì)學(xué)意義成立(P<0.05)。
在惡性腫瘤病理組織學(xué)診斷中,免疫組化技術(shù)是主要技術(shù),有著較高的準(zhǔn)確率[6]。所謂免疫組化,主要是定位、定性、定量分析病理組織中的抗原,從根本上講,免疫組化顯色屬于酶催化作用,在與抗原抗體復(fù)合物中的過氧化物、底物、堿性磷酸酶產(chǎn)生反應(yīng)過程中,產(chǎn)生的復(fù)合物帶有相應(yīng)的顏色,同時(shí)在組織、細(xì)胞抗原中沉淀,所以可以體現(xiàn)出組織病理的陽(yáng)性表達(dá)情況。細(xì)胞標(biāo)本、石蠟切片是兩種常用的病理組織標(biāo)本,后者應(yīng)用率更高[7]。與傳統(tǒng)的制作病理組織切片的技術(shù)相比較,免疫組化技術(shù)不僅準(zhǔn)確性高,而且敏感性好、反應(yīng)時(shí)間短,能鑒別腫瘤細(xì)胞屬性、確定腫瘤分期、判定腫瘤性質(zhì)。另外,有研究表明[8],在未分化的惡性腫瘤分類診斷中,免疫組化技術(shù)也有著良好的效果。
在此次研究中,利用免疫組化技術(shù)的研究組,制片優(yōu)良率為95.56%,利用傳統(tǒng)制片技術(shù)的對(duì)照組僅為73.33%,統(tǒng)計(jì)學(xué)意義成立(P<0.05)。充分說明,免疫組化技術(shù)的運(yùn)用有助于改善病理組織制片質(zhì)量,染色明顯,組織結(jié)構(gòu)完整不容易受損,不容易產(chǎn)生氣泡或褶皺,細(xì)胞形態(tài)清晰可見,在顯微鏡下更容易觀察。
總而言之,在制作病理組織切片中免疫組化技術(shù)有著較高的應(yīng)用價(jià)值,制片質(zhì)量更高,有助于提高病理檢驗(yàn)水平,值得深入推廣應(yīng)用。