李松 李宏 張明建 王仁泉 李鑫 秦開華

摘要：通過對多鱗白甲魚（Onychostoma macrolepis）胚胎發(fā)育特征研究，旨在為該魚的科學保護和合理開發(fā)提供技術支撐。結果顯示：多鱗白甲魚卵徑1.90±0.02mm，吸水后的卵徑可達2.60±0.03mm。在水溫19±1℃的條件下，經(jīng)歷80h孵化出膜，總積溫1 551.98h·℃。根據(jù)胚胎的外部形態(tài)特征可將胚胎發(fā)育分為受精卵、卵裂、囊胚、原腸胚、神經(jīng)胚、器官形成及出膜7個階段共26個時期。初孵仔魚全長6.00-7.00mm。

關鍵詞：多鱗白甲魚；胚胎發(fā)育

基金項目：多鱗白甲魚的人工繁殖技術研究（廣元市重點研發(fā)項目，項目編號：17ZDYF0116）。

多鱗白甲魚（Onychostoma macrolepis）隸屬于鯉形目、鯉科、鲃亞科、白甲魚屬（Onychostoma Günther）[1]。多鱗白甲魚具有豐富的地理遺傳資源，其原因是分布區(qū)域的不連續(xù)性，它主要分布于渭河水系，嘉陵江和漢水水系的中上游，淮河上游，山東泰山、伊河和洛河[2] 等不同地理區(qū)域的水系。資料顯示，分布我國最北的一種鲃亞科魚類是多鱗白甲魚，它對研究魚類生態(tài)適應性以及地理分布機制具有重要的作用 [3]。另外，調(diào)查資料表明多鱗白甲魚是秦巴山區(qū)[4]、長青自然保護區(qū)[5]和清江河特有魚類國家級水產(chǎn)種質(zhì)資源保護區(qū)的魚類資源多樣性重要物種。

當前，多鱗白甲魚的生態(tài)習性與開發(fā)利用[6]、親魚仿生態(tài)培育[7]和人工繁殖[3，8]都取得成功，同時對其資源保護[9]、生物學特性[10]、形態(tài)組織學[11]、脂肪代謝[12]、營養(yǎng)需求[13]和餌料[14-15]等方面也進行了相關的研究和報道。雖然，2008年陳紅菊等對泰山地區(qū)的多鱗白甲魚胚胎發(fā)育進行了研究[16]，但關于不同生活水系的環(huán)境差異對該魚在早期生活史的發(fā)育是否存在影響，未見報道?；诖耍疚囊郧褰佣圜[白甲魚為實驗對象，對其胚胎發(fā)育進行觀察和描述，同時記錄發(fā)育過程中的水溫，旨在詳細了解該魚的胚胎發(fā)育規(guī)律，對保護魚類資源和探索該魚室內(nèi)工廠化苗種培育具有重要的實踐意義，同時也為人工繁殖和養(yǎng)殖提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 受精卵的來源及孵化

2019年4-6月，在四川龍洋漁業(yè)有限公司繁殖場，挑選出馴養(yǎng)成熟的多鱗白甲魚親魚，經(jīng)干法授精獲得受精卵。將受精卵放入孵化框（50cm×25cm×20cm）中進行流水孵化。孵化期間，水流量為0.4-0.7t/h，水溫為18.0-20.0℃，溶解氧為7.5-9.0mg/L，氨氮<0.05mg/L。

1.2 胚胎的觀察及數(shù)據(jù)測量

用SZM體視顯微鏡對胚胎進行觀察及拍照。在人工授精后的1min內(nèi)及時取部分卵放置于玻璃皿中以觀察其發(fā)育，大致上按開始階段每30min觀察一次受精卵，每次隨機取30粒。隨后根據(jù)其發(fā)育情況，可隔1-2h觀察一次。實際上，平常要經(jīng)常觀察，還要根據(jù)胚胎發(fā)育實際情況加密觀察。每次觀察、照相的同時，詳細記錄好其形態(tài)發(fā)育特征、時間、溫度。因達到各發(fā)育期的時間存在個體差異，各發(fā)育期的劃分參照文獻[17]的方法，按照50%以上個體達到該時期特征的時間來劃分[18]。

用電子游標卡尺（永康市飛爾工貿(mào)有限公司，精確度0.01mm，測量范圍0-150mm）測量卵徑。用Corel DRAW X4 SP2軟件處理胚胎照片。胚胎發(fā)育各時期的積溫為胚胎某發(fā)育階段的時間與水溫的乘積[19]。

2 結果

2.1 胚胎發(fā)育各階段經(jīng)歷時間和積溫

在水溫（19±1）℃條件下，多鱗白甲魚整個胚胎發(fā)育過程可分為受精卵、卵裂、囊胚、原腸胚、神經(jīng)胚、器官形成及出膜7個階段共26個時期（表1，圖1），胚胎從受精卵到孵化出膜歷時80h，積溫1 551.98h·℃，其中受精卵耗時1h 20min，積溫26.67h·℃，卵裂期耗時9h5min，積溫173.82h·℃，囊胚期耗時5h 30min，積溫100.25h·℃，原腸期耗時11h 51min，積溫228.75h·℃，神經(jīng)胚期耗時2h 14min，積溫43.67h·℃，器官形成期耗時33h，積溫638.82h·℃，出膜期耗時17h，積溫340.00h·℃。

2.2 多鱗白甲魚胚胎發(fā)育分期及特征

2.2.1 胚盤隆起階段

受精卵圓球形，呈金黃色，卵膜堅韌，卵徑1.90±0.02mm。遇水產(chǎn)生較強黏性，20min后充分吸水，黏性減弱，卵周隙逐漸變大，吸水后卵徑2.60±0.03mm（圖1A）。受精后1h20min，原生質(zhì)集中在卵子的動物極而形成隆起的胚盤（圖1B）。

2.2.2 卵裂階段

受精后2h4min，胚盤表面出現(xiàn)明顯的分裂溝，胚盤進行第1次卵裂形成大小相等的2個卵裂球（圖1C）。3h11min胚盤第2次分裂為4個相同的細胞（圖1D）。3h50min進行第3次卵裂，兩條分裂溝平行分裂一次，形成兩列，每列四個，進入8細胞期（圖1E）。受精后4h47min和5h56min，胚胎發(fā)育分別進入32細胞期（圖1F）和64細胞期（圖1G）。此后，隨著細胞的不斷分裂，受精后10h25min，胚胎發(fā)育進入多細胞期（圖1H），細胞很小，排列極不規(guī)則。

2.2.3 囊胚期

受精后12h 50min，胚盤開始變高，表面趨近光滑，只有個別細胞及邊緣的分裂細胞能夠看清，整個胚層如小丘，胚體進入囊胚早期（圖1I）。隨著胚胎進一步發(fā)育，高聳的細胞團開始降低，受精后14h 40min，囊胚層變矮變平，胚胎進入囊胚中期（圖1J）。此后，囊胚層繼續(xù)降低，受精后15h 55min，整個胚層更為扁平，囊胚細胞向卵黃部分下包1/3，胚胎發(fā)育進入囊胚晚期（圖1K）。

2.2.4 原腸胚期

受精后22h 24min，胚層內(nèi)卷，形成胚環(huán)，胚層下包卵黃囊近1/2進入，胚胎發(fā)育進入原腸早期（圖1L）。隨著胚胎細胞繼續(xù)下包并向內(nèi)卷入，受精后24h 10min，囊胚層細胞下包卵黃囊約2/3，胚盾出現(xiàn)，胚胎發(fā)育進入原腸中期（圖1M）。受精后27h 46min，胚盤下包3/4，胚盾膨大，胚胎發(fā)育進入原腸晚期（圖1N）。

2.2.5 神經(jīng)胚期

神經(jīng)胚期（圖10）是出現(xiàn)在受精后的29h，此時胚層幾乎完全下包，僅剩卵黃栓，神經(jīng)板初步形成，胚體明顯隆起及處于側臥狀態(tài)。受精后30h，隨著胚盤的繼續(xù)下包，胚體前端隆起，后端變寬變薄，卵黃栓逐漸變小，胚體延長，胚孔封閉，胚胎發(fā)育進入胚孔封閉期（圖1P）。

2.2.6 器官形成期

受精后33h 21min，在胚體中前部出現(xiàn)1-4對肌節(jié)，腦區(qū)膨大，整個胚體處于側臥狀態(tài)（圖1Q）。眼基（圖1R）和眼囊（圖1S）分別于受精后36h 36min和38h 49min出現(xiàn)，肌節(jié)13±2～17±2對。41h 48min尾端略突出，腦明顯分化，尾芽逐漸游離卵黃囊（圖1T）。受精后43h 51min，肌節(jié)增至20-22對，卵黃囊開始拉長，頭尾距離增加，腦區(qū)顯著隆起，此時胚胎發(fā)育進入聽囊期（圖1U）。受精后53h 13min，胚體微弱地抽搐（21次/min），腦區(qū)發(fā)達，明顯隆起，胚體和卵黃囊繼續(xù)拉長，此時胚胎發(fā)育進入肌肉效應期（圖1V）。57h 22min胚體和卵黃拉得更長，胚體擺動，頭部與卵黃連接處出現(xiàn)心臟原基（圖1W）。耳石出現(xiàn)在受精后的59h 37min，此時胚體伸直，頭部仍卷曲于卵黃囊前端，胚體擺動加強，卵黃囊呈棒槌形，前寬后窄（圖1X）。受精后63h，心臟開始跳動，胚體不斷翻滾（圖1Y）。

2.2.7 出膜期

受精后80h，胚體在卵膜內(nèi)劇烈翻滾，尾部破膜而出，心跳85～90次/min（圖1Z）。初孵仔魚體透明，卵黃囊棒槌狀，常靜止水底。

3 討論

3.1 四川省青川縣清江河與泰山多鱗白甲魚胚胎發(fā)育的比較

陳紅菊等[16]（2008年）報道了泰山赤鱗魚（多鱗白甲魚）的胚胎發(fā)育特征，獲得了泰山赤鱗魚卵徑、孵化時間、胚胎發(fā)育時序等基礎數(shù)據(jù)。本研究的孵化水溫（19±1℃）與陳紅菊等[16]（2008年）基本保持一致。比較發(fā)現(xiàn)，清江河和泰山的多鱗白甲魚胚胎發(fā)育都經(jīng)歷受精卵、卵裂、囊胚、原腸胚、神經(jīng)胚、器官形成及出膜7個階段，但清江河多鱗白甲魚卵徑（1.90mm）稍大于泰山多鱗白甲魚（1.65～1.82mm）。同樣的，清江河多鱗白甲魚受精卵孵化歷時長于泰山多鱗白甲魚（80h>46h 50min）。功能器官的發(fā)育時序，清江河多鱗白甲魚也要長于泰山多鱗白甲魚。綜上所述，清江河和泰山多鱗白甲魚的胚胎發(fā)育存在差異，可能是由于生活的環(huán)境條件不同，如海拔高度（西部山區(qū)普遍高于東部山區(qū)）、水文條件、營養(yǎng)條件等，而自身做出的一種生活策略選擇。

3.2 多鱗白甲魚胚胎發(fā)育與鲃亞科其他魚類的比較

魚類胚胎發(fā)育具有種的特異性[9]，在不同的水溫條件下，胚胎發(fā)育歷時以及胚胎發(fā)育到某個時期的時間都是不相同的。多鱗白甲魚與鲃亞科其他魚類胚胎發(fā)育比較見表2。

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