廖張蓉， 周永強(qiáng)， 葉洪波， 殷 鑫， 魏 鑫， 雷傳文， 周 英

(貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025)

長(zhǎng)葉紐子果ArdisiavirensKurz var.annamensis Pitard是紫金科紫金牛屬植物，為紐子果的變種，主要分布于貴州、廣西(上思)、云南等地[1]。紫金牛屬的植物在全世界約400～500種，其中我國就有72種，12變種[2]。該屬植物主要用于消炎、消腫、跌打損傷等病癥，其化學(xué)成分的類型主要有皂苷類、香豆素類、苯酚類、苯醌類、三萜類等[3]。本課題組對(duì)長(zhǎng)葉紐子果的根部化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從中分離得到9個(gè)化合物，且所有化合物均為首次從該植物中分離得到。

1 材料

DRX-500 AVANCE Ⅲ-600 MHz超導(dǎo)核磁共振共振儀、AVANCE NEO-400 MHz(德國Bruker公司)；RID-20A示差折光檢測(cè)器(日本島津公司)；SEP-LC52 MWD紫外檢測(cè)器(中國北京分離技術(shù)有限公司)；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵、DL-400循環(huán)冷卻器(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；SB-600DTY超聲波多頻清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；98-I-C數(shù)顯控溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司)； FW177中草藥粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)。C-18反相柱填料ODS-A-HG(日本YMC公司)；半制備柱(250 mm×10 mm，5 μm，日本島津公司)；柱層析硅膠(80～100、200～300目，青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠(北京索萊寶科技有限公司)。試劑均為重蒸后使用。

長(zhǎng)葉紐子果由貴州中醫(yī)藥大學(xué)江維克教授鑒定為紫金牛屬紫金科植物長(zhǎng)葉紐子果ArdisiavirensKurz var.annamensis Pitard.。

2 提取與分離

取15 kg長(zhǎng)葉紐子果干燥根粉碎成粗粉，用70%乙醇回流提取2次，2 h/次，回收溶劑濃縮成浸膏，總浸膏用蒸餾水加熱攪拌分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取。將300 g正丁醇層浸膏以硅膠(80～100目)拌樣，進(jìn)行柱層析，以二氯甲烷-甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脫，合并極性相同流分，得21個(gè)組分F1～F21，對(duì)其中F5、F6、F8、F12組分進(jìn)行分離。F5用填料為Sephadex LH-20柱重蒸之后的純甲醇進(jìn)行純化，得到多組化合物，對(duì)其中極性相似的化合物進(jìn)行合瓶得到2個(gè)組分(Fr5-1～Fr5-2)，其中Fr5-1無色結(jié)晶為化合物1(300 mg)，F(xiàn)r5-2利用半制備條件為甲醇-水(5∶7～7∶10)共30 min進(jìn)行分離，在保留時(shí)間為20.29、21.10、22.50、26.71 min分別得化合物4(4 mg)、5(5 mg)、6(8 mg)、7(4 mg)；F6用填料為Sephadex LH-20重蒸之后的純甲醇進(jìn)行純化得到2個(gè)組分(Fr6-1～Fr6-2)，從Fr6-1得化合物9(14 mg)，F(xiàn)r6-2利用半制備條件為甲醇-水(4∶6～6∶ 10)共30 min進(jìn)行分離，在保留時(shí)間為14 min得化合物2(8 mg)；F8用填料為Sephadex LH-20重蒸之后的純甲醇進(jìn)行純化得化合物3(16 mg)；F12用ODS進(jìn)行分段得到5個(gè)組分(Fr12-1～Fr12-5)，F(xiàn)r12-3利用半制備得化合物8(30 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色晶體。ESI-MSm/z: 327.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ：3.43 (1H, dd,J=9.5, 8.6 Hz, H-3), 3.63 (1H, m, H-4), 3.73 (1H, m, H-4a), 3.81(1H, t,J=9.0 Hz, H-2),3.93(3H, s, 9-OCH3),3.95～4.11(2H, m,H-11a and H-11b), 4.96(1H, d,J=10.4 Hz, H-10b), 7.09(1H, s, H-7);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 83.1 (C-2), 71.9 (C-3), 75.6 (C-4), 81.4 (C-4a), 165.8 (C-6), 119.4 (C-6a), 111.0 (C-7), 152.4 (C-8), 142.3 (C-9), 149.5 (C-10), 117.3 (C-10a), 74.2 (C-10b), 62.7 (C-11), 60.9 (9-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4-6]對(duì)照基本一致，故鑒定為巖白菜素。

化合物2：白色羽狀結(jié)晶。ESI-MSm/z: 507.1[M-H]-。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ：3.96 (1H, ddd,J=2.2, 6.7, 9.9 Hz, H-2), 3.55 (1H, dd,J=8.7, 10.0 Hz, H-3), 4.41 (1H, dd,J=6.7, 12.2 Hz, H-4a), 7.09 (1H, s, H-6), 5.04 (1H, d,J=10.5 Hz, H-10b), 4.11 (1H, dd,J=9.4, 10.5 Hz, H-11a), 3.85 (1H, d,J=9.1 Hz, H-11b), 7.09 (1H, s, H-2′), 7.09 (1H, s, H-6′), 3.90 (3H, s, H-3′and H-5′), 3.86 (3H, s, H-9);13C-NMR (151 MHz, CD3OD)δ: 81.3 (C-2), 71.8 (C-3), 75.4 (C-4), 80.5 (C-4a), 165.7(C-6), 111.2 (C-7), 152.4(C-8), 142.3 (C-9), 151.8 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.4 (C-10b), 64.9 (C-11), 126.1 (C-1′), 110.3 (C-2′), 149.3 (C-3′),149.3 (C-5′) 110.3 (C-6′), 167.7 (C-7′CO), 61.0(3′-OCH3and 5′-OCH3), 60.8(9-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]對(duì)照基本一致，故鑒定為 4-O-(3,5-二甲基沒食子?；?巖白菜素。

化合物3：白色簇狀。ESI-MSm/z: 479.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 3.53～3.59 (1H, m, H-3), 3.90 (3H, s, 9-OCH3), 3.95～3.99(1H, m, H-2), 4.13 (1H, d,J=9.8 Hz, H-4a), 4.39 (1H, dd,J=6.7, 12.2 Hz, H-11a), 5.02 (1H, s, H-11b), 5.05 (1H, s, H-10b), 7.10 (1H, s, H-7), 7.11 (2H, s, H-2′and H-6′);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ:80.7(C-2), 71.8 (C-3), 75.4(C-4), 81.3 (C-4a), 165.7 (C-6), 119.5 (C-6a), 111.2 (C-7), 152.4 (C-8), 140.1 (C-9), 149.3 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.4 (C-10b), 64.6(C-11), 61.0(9-OCH3), 121.0 (C-1′), 110.3 (C-2′，6′), 146.6(C-3′，5′), 142.3 (C-4′), 168.2(7′-CO)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]對(duì)照基本一致，故鑒定為11-O-沒食子酸?；鶐r白菜素。

化合物4：白色粉末。ESI-MSm/z: 477.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ：3.51～3.54 (1H, m，H-3), 3.55～3.58 (1H, m, H-4),3.82～3.88 (1H, m, H-2), 3.89 (3H, s, 9-OCH3), 3.91 (3H, s, 3′-OCH3), 3.97 (1H, ddd,J=2.2, 6.9, 9.3 Hz, H-4a), 4.10 (1H, dd,J=9.4, 10.5 Hz, H-11a), 4.39 (1H, dd,J=7.0, 12.2 Hz, H-11b), 5.03 (1H, d,J=10.4 Hz, H-10b), 7.00 (1H, d,J=8.5 Hz, H-5′), 7.08 (1H, s, H-7), 7.49 (1H, d,J=2.1 Hz, H-2), 7.60 (1H, dd,J=2.1, 8.5 Hz, H-6);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ：80.6 (C-2), 71.9 (C-3), 75.5 (C-4), 81.3 (C-4a), 165.7 (C-6), 119.4 (C-6a), 111.2 (C-7), 152.4 (C-8), 149.3 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.4 (C-10b), 64.4 (C-11), 123.7 (C-1′), 111.9 (C-2′), 147.6 (C-3′), 153.7 (C-4′), 123.5 (C-6′),167.8 (C-7′CO),60.9 (9-OCH3),56.4(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]對(duì)照基本一致，故鑒定為11-O-香草巖白菜素。

化合物5：白色粉末。ESI-MSm/z: 477.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 3.49～3.54 (1H, m，H-3), 3.58 (1H, dd,J=4.6, 11.3 Hz, H-4), 3.87 (3H, s, 9-OCH3), 3.94 (3H, s, 4′-OCH3), 3.98 (1H, ddd,J=2.3, 7.8, 10.0 Hz, H-2), 4.08～4.14 (1H, m, H-4a), 4.30 (1H, dd,J=7.8, 12.2 Hz,H-11a), 4.97 (1H, dd,J=2.3, 12.1 Hz, H-11b), 5.05 (1H, d,J=10.4 Hz, H-10b), 6.84～6.88 (1H, m, H-7), 7.09 (1H, d,J=1.5 Hz, H-5′), 7.60 (1H, d,J=1.5 Hz, H-2′), 7.62 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6′)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ：80.6 (C-2), 72.2 (C-3), 75.5 (C-4), 81.3 (C-4a), 165.6 (C-6), 119.5(C-6a), 111.2 (C-7), 152.5 (C-8), 149.4 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.4 (C-10b), 64.4 (C-11), 122.0 (C-1′), 116.0(C-2′), 148.8(C-3′), 153.2 (C-4′), 113.6 (C-5′),125.4 (C-6′), 167.8 (C-7′CO),60.9 (9-OCH3), 56.6 (4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]對(duì)照基本一致，故鑒定為11-O-異香草巖白菜素。

化合物6：白色粉末。ESI-MSm/z: 507.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 3.48 (1H, m, H-3), 3.68 (1H, m, H-4), 3.85 (3H, s, 9-OCH3), 3.93 (6H, s, 3，5′-OCH3), 4.00 (1H, m, H-2), 4.12(1H, m, H-4a), 4.25 (2H, dd,J=8.3, 12.0 Hz, H-11a，11b), 5.05 (H, d,J=1.8 Hz, H-10b), 7.09 (1H, d,J=1.5 Hz, H-7), 7.39 (2H, s, H-2′，6′);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ:80.5 (C-2), 72.4(C-3), 75.5 (C-4), 81.2 (C-4a), 165.6 (C-6), 119.5(C-6a), 111.2 (C-7), 152.7 (C-8), 149.5 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.3 (C-10b), 64.4 (C-11), 119.5 (C-1′), 108.3(C-2′，6′), 142.4 (C-4′),167.7 (C-7′CO),60.9 (9-OCH3), 56.9(3′，5′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9-10]對(duì)照基本一致，故鑒定為11-O-丁香?；鶐r白菜素。

化合物7：白色粉末。ESI-MSm/z: 491.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ：3.58 (H, s，H-3), 3.85 (1H, d,J=9.4 Hz, H-4), 3.87 (3H, s, 9-OCH3), 3.91 (3H, s, 3′-OCH3), 3.92 (3H, s, 4′-OCH3), 3.97～4.01 (1H, m, H-2), 4.09～4.15 (1H, m, H-4a), 4.34(1H, dd,J=7.7, 12.2 Hz, H-11a), 4.97～5.01(1H, m, H-11b), 5.06 (1H, d,J=10.5 Hz, H-10b), 7.06(d,J=8.5 Hz, H-7), 7.10 (1H, s, H-5′), 7.60 (1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 7.74 (1H, dd,J=2.1, 8.5 Hz, H-6′);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ：80.5 (C-2), 72.4 (C-3), 75.5 (C-4), 81.3 (C-4a), 119.5(C-6a), 111.2 (C-7), 152.6 (C-8), 150.1 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.3 (C-10b), 64.4 (C-11), 123.3 (C-1′), 112.0 (C-2′), 155.1 (C-4′), 113.3 (C-5′),125.1 (C-6′), 167.6 (C-7′CO),60.9 (9-OCH3), 56.5 (3′-OCH3), 56.6 (4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對(duì)照基本一致，故鑒定為11-O-(3′，4′-二甲氧基苯甲酰)巖白菜素。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm/z: 1 058.6[M-H]-。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ： 0.73 (1H, dd,J=2.1, 11.7 Hz，H-5), 0.85 (3H, s, H-24), 0.90 (3H, s, H-25), 0.98 (3H, s, H-29), 1.06 (3H, s, H-23), 1.14 (3H, s, H-26),1.28 (3H, s, H-27),1.76 (1H, m, H-2), 1.87 (1H, m, H-2), 1.97 (1H, m, H-19), 2.51 (1H, dd,J=12.5, 14.5 Hz, H-19), 3.00 (1H, d,J=7.6 Hz, H-28), 3.13 (1H,dd,J=9.4, 4.5 Hz, H-3), 3.17～3.21(2H, m, glu′-4，2), 3.35(6H, s, xyl-2，5，3；glu′-5，5，4), 3.37～3.41 (2H, m, glu′-3，2)，3.48(1H, d,J=7.7 Hz, H-28),3.53～3.54(2H, m, xyl-4), 3.54～3.55(2H, m, ara-5), 3.56(1H, m, glu-3), 3.60 (1H, dd,J=6.7, 12.0 Hz, glu′-6), 3.67 (1H, dd,J=5.7, 12.0 Hz, glu-6), 3.79～3.81 (2H, m, ara-2，3), 3.84 (1H, dd,J=2.2, 12.0 Hz, glu′-6), 3.86～3.90 (1H, m, ara-4), 3.93 (1H, d,J=5.2 Hz, H-16), 4.00 (1H, dd,J=5.3, 11.4 Hz, xyl-5), 4.23 (1H, dd,J=3.1, 12.7 Hz, ara-5), 4.39～4.41 (1H, m, ara-1), 4.52 (2H, dd,J=4.2, 7.7 Hz, glu-1 and xyl-1), 4.70 (1H, d,J=7.7 Hz, glu′-1), 9.41 (1H, s, H-30);13C-NMR (151 MHz, CD3OD)δ: 37.8(C-1), 27.2(C-2), 91.4(C-3), 40.6(C-4), 56.8(C-5), 18.7(C-6), 35.1(C-7), 43.4(C-8), 51.3(C-9), 40.2(C-10), 19.8(C-11), 32.7(C-12), 88.2(C-13), 45.3(C-14), 37.0(C-15), 77.6(C-16), 44.7(C-17), 54.0(C-18), 33.9(C-19), 49.9(C-20), 30.9(C-21), 32.7(C-22), 28.3(C-23), 16.7(C-24), 16.7(C-25), 18.8(C-26), 20.1(C-27), 78.4(C-28), 24.3(C-29), 209.3(C-30);arabinose: 105.6(C-1), 79.4(C-2), 74.3(C-3), 80.2(C-4), 65.8(C-5); Glucose: 104.8(C-1), 85.1(C-2), 77.6(C-3), 70.9(C-4), 78.0(C-5), 63.3(C-6); xylose: 107.3(C-1), 75.9(C-2), 77.9(C-3), 71.1(C-4), 67.4(C-5); Glucose′: 104.3(C-1), 76.0(C-2), 77.8(C-3), 72.0(C-4), 77.8(C-5), 62.4(C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]對(duì)照基本一致，故鑒定為百兩金皂苷A。

化合物9：無色油狀液體。ESI-MSm/z: 277.2[M-H]-。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ：0.98 (6H, t,J=7.4 Hz, H-15，16), 1.49 (4H, m, H-13，14), 1.69 (4H, m, H-11，12), 4.29 (4H, t,J=6.6 Hz, H-9，10), 7.61 (2H, dd,J=3.3, 5.7 Hz, H-7，8), 7.72 (2H, dd,J=3.3, 5.7 Hz, H-5，6);13C-NMR (151 MHz, CD3OD)δ:14.0(C-15，16), 20.3 (C-13，14), 31.7(C-11，12), 66.6 (C-9，10)，129.9 (C-7，8), 132.3 (C-5，6), 133.6 (C-3，4), 169.3(C-1，2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]對(duì)照基本一致，故鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯。

4 討論

巖白菜素具有較好的止咳作用，2015年版《中國藥典》一部將其收載為鎮(zhèn)咳祛痰藥，主要用于治療慢性支氣管炎類疾病，而且不產(chǎn)生耐藥性，不良反應(yīng)小，在紫金牛屬的其他植物走馬胎、朱砂根中也均發(fā)現(xiàn)了該成分[13-14]，同時(shí)還有明顯的消炎作用[15],在長(zhǎng)葉紐子果中首次被分離出來。另外，三萜類具有很好的抗腫瘤作用[16-18]。本課題組從長(zhǎng)葉紐子果中分離出1個(gè)巖白菜素、6個(gè)巖白菜的衍生物、1個(gè)三萜類和1個(gè)其他類，可為該植物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與臨床應(yīng)用考察提供參考。