文│肖其偉（甘肅省酒泉市肅州區(qū)東洞鎮(zhèn)人民政府）

2019年11月初，甘肅省酒泉市肅州區(qū)某規(guī)模化豬場(chǎng)發(fā)生疫情，主要是2周齡內(nèi)仔豬出現(xiàn)大面積腹瀉，部分仔豬有類似神經(jīng)癥狀，且對(duì)豬群緊急免疫接種PRV弱毒疫苗后基本無效。對(duì)該場(chǎng)內(nèi)死亡的仔豬進(jìn)行剖檢，無菌采集病變明顯的組織樣品，低溫送至當(dāng)?shù)貏?dòng)物疫病專業(yè)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行細(xì)菌分離與病原診斷。其結(jié)果發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)疫情主要原因是豬鏈球菌、PCV2和PEDV混合感染所致，且分離得到菌株對(duì)氨芐西林、頭孢噻肟和恩諾沙星等較敏感。

一、材料與方法

1.病料來源。該場(chǎng)仔豬腹瀉嚴(yán)重，且伴隨神經(jīng)癥狀瀕臨死亡的2頭仔豬肺、腎、小腸和淋巴結(jié)等組織發(fā)生病變。

2.主要試劑。PCR預(yù)混液、核酸染料、瓊脂糖粉末、DL2000marker和cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒等均購自寶生物工程（大連）有限公司；動(dòng)物組織DNA/RNA核酸提取試劑盒購自鄭州智杰生物技術(shù)有限公司；不同藥敏紙片購自河北利華藥業(yè)有限公司；普通瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基由本試驗(yàn)自配。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.細(xì)菌分離與鑒定。將75%酒精浸泡的手術(shù)刀擦拭干凈并再次灼燒后，切開腹股溝淋巴結(jié)深處組織，用無菌接種后蘸取少量組織液在普通液體培養(yǎng)基中攪拌，將培養(yǎng)基在37℃的搖床（220轉(zhuǎn)/分鐘）培養(yǎng)12小時(shí)。其后，蘸取少量培養(yǎng)液分別在普通瓊脂和鮮血瓊脂培養(yǎng)基表面平板劃線，置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，16～24小時(shí)后觀察培養(yǎng)基表面是否出現(xiàn)菌落，對(duì)獲得的菌落進(jìn)行革蘭氏染色法，根據(jù)菌落形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行初步鑒定。

2.細(xì)菌藥敏試驗(yàn)。將單一菌落擴(kuò)菌后均勻涂布在普通瓊脂培養(yǎng)基表面，待液面稍干貼上含有抗生素的藥敏紙片，37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)12～16小時(shí)后，衡量抑菌圈直徑大小。

3.病毒性病原檢測(cè)。將病變組織樣品（淋巴結(jié)、肺、小腸和腎等）切碎后混合，放在滅菌研缽中，加入適量生理鹽水，反復(fù)研磨后過濾獲得上清，使用試劑盒提取組織上清中核酸（含DNA和RNA），同時(shí)將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用RT-PCR法檢測(cè)樣品中是否存在PEDV、PRV、PRRSV、PCV2、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬德爾塔冠狀病毒（PDcoV）和豬輪狀病毒（PoRV）核酸。反應(yīng)結(jié)束后，取5微升產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂凝膠電泳，并觀察結(jié)果。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.臨床癥狀及病理變化。筆者隨養(yǎng)殖人員進(jìn)入發(fā)病豬場(chǎng)內(nèi)，見大量因嚴(yán)重腹瀉而極度消瘦的仔豬。仔豬腹瀉呈噴射狀，且肛門處沾滿糞污；部分仔豬有神經(jīng)癥狀，如轉(zhuǎn)圈、磨牙等。該場(chǎng)暴發(fā)疫情以來，仔豬發(fā)病率達(dá)60%左右，病死率達(dá)75%。將病豬剖檢發(fā)現(xiàn)，其全身淋巴結(jié)腫大；腎表面有出血點(diǎn)；小腸中可見少量?jī)?nèi)容物，腸壁薄且充血嚴(yán)重。

2.細(xì)菌分離鑒定與藥敏試驗(yàn)結(jié)果。將培養(yǎng)基置于恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)后，可見2種培養(yǎng)基表面均出現(xiàn)光滑、濕潤的菌落，進(jìn)一步染色鑒定發(fā)現(xiàn)視野可見成對(duì)或成排的短鏈狀革蘭氏陽性菌，根據(jù)其形態(tài)學(xué)特征可確定為豬鏈球菌。進(jìn)一步藥敏試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，分離純化的菌株，對(duì)氨芐西林、頭孢噻肟、頭孢氨芐、阿莫西林和恩諾沙星高度敏感，其抑菌圈直徑均大于28毫米；對(duì)氟苯尼考、慶大霉素、四環(huán)素、林可霉素、鏈霉素等常見抗生素耐藥，抑菌圈直徑均低于10毫米。

3.病毒性病原檢測(cè)結(jié)果。分子生物學(xué)診斷結(jié)果顯示，檢測(cè)的2份病料組織樣品中均為PCV2和PEDV核酸陽性，但未檢測(cè)出其他病原核酸。

四、診斷結(jié)果及討論

綜合發(fā)病豬群臨床癥狀、剖檢病變特征和實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，最終判定該場(chǎng)仔豬發(fā)生嚴(yán)重疫情由PCV2、PEDV和豬鏈球菌混合感染所致。

PCV2在我國豬場(chǎng)流行廣泛，可導(dǎo)致病畜出現(xiàn)系列臨床癥狀，如呼吸困難、消瘦和皮炎等。但PCV2感染導(dǎo)致病畜死亡率較低，可使病畜出現(xiàn)免疫抑制，從而導(dǎo)致病畜更加容易感染其他病原。豬鏈球菌屬于機(jī)會(huì)致病菌，在豬場(chǎng)內(nèi)廣泛存在，當(dāng)豬群免疫力較好時(shí)感染該病不表現(xiàn)明顯臨床癥狀；豬群因應(yīng)激、營養(yǎng)不良或其他因素導(dǎo)致免疫力下降時(shí)，該病便表現(xiàn)出嚴(yán)重癥狀，如敗血癥、關(guān)節(jié)炎，甚至死亡。PEDV是導(dǎo)致仔豬腹瀉的主要病原之一，但其引發(fā)的臨床癥狀與其他腸道腹瀉病相似，病原確定常需實(shí)驗(yàn)室診斷。

目前，豬群多種病原混合感染情況較為常見，對(duì)于此類疫病確診也需要依靠實(shí)驗(yàn)室相關(guān)技術(shù)。對(duì)于細(xì)菌性病原的治療可以通過菌株敏感藥物的使用，而病毒性疫病防控暫時(shí)沒有特效藥物，只能依靠疫苗緊急免疫接種、抗病毒藥物的使用和對(duì)癥治療。