孫天浩，馬忠臣，張 歡，程科建，陳創(chuàng)夫，2，王 震，2*，張 倩

（1.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子832000；2.西部地區(qū)高發(fā)人獸共患傳染性疾病防治協(xié)同創(chuàng)新中心，新疆石河子832000；3.新疆農(nóng)墾科學(xué)院，新疆石河子832000）

布魯氏菌病（Brucellosis）是由布魯氏菌引起的一種嚴(yán)重危害人和家畜健康的人獸共患傳染病[1]。布魯氏菌屬于α-變形桿菌，是一種兼性胞內(nèi)病原菌，能夠感染哺乳動(dòng)物和人類。反芻動(dòng)物是易感動(dòng)物，主要表現(xiàn)為公畜的睪丸炎和附睪炎、母畜的流產(chǎn)和不孕。布魯氏菌病嚴(yán)重影響動(dòng)物的生產(chǎn)性能和繁殖性能。人類布魯氏菌病主要是通過(guò)直接接觸布魯氏菌感染的動(dòng)物或食用未經(jīng)消毒的動(dòng)物源性食品或奶制品而感染，造成類似于流感癥狀的波浪熱、脊柱炎、關(guān)節(jié)炎等非特異性癥狀[2]。布魯氏菌病不僅導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)損失、妨礙全球性貿(mào)易，而且嚴(yán)重威脅公共衛(wèi)生安全。所以，控制、根除布魯氏菌病已經(jīng)成為當(dāng)前經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展的重要任務(wù)，而疫苗接種是控制該病的主要手段。目前，布魯氏菌疫苗主要分為滅活疫苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗、DNA疫苗、突變株候選疫苗和異源表達(dá)疫苗等。文章主要介紹目前存在的布魯氏菌相關(guān)疫苗的研究現(xiàn)狀及其保護(hù)效果。

1 滅活疫苗

滅活疫苗可以為動(dòng)物提供安全有效的保護(hù)，降低動(dòng)物的免疫抑制，不污染牛奶和肉類，不引起孕畜的流產(chǎn)[3]。目前，布魯氏菌滅活苗的開(kāi)發(fā)取得一定的成果，主要有牛種布魯氏菌45/20和羊種布魯氏菌53H38滅活疫苗。

1.1 牛種布魯氏菌45/20滅活疫苗

牛種布魯氏菌45/20疫苗的菌種是1種粗糙型菌株，是由牛種布魯氏菌45株在豚鼠體內(nèi)連續(xù)傳代培養(yǎng)20代所獲得，故稱之為布魯氏菌45/20，將其滅活后制成的油包水型滅活疫苗，在20世紀(jì)20年代開(kāi)始使用[4]。該疫苗免疫牛群后，可提供免疫保護(hù)作用，并可用于孕畜。由于布魯氏菌45/20滅活疫苗為粗糙型菌株，動(dòng)物免疫后不產(chǎn)生抗O-鏈多糖的抗體，因此不干擾常規(guī)血清學(xué)診斷。但是，因?yàn)樵嫉?5/20菌株遺傳穩(wěn)定性差，在體內(nèi)環(huán)境中會(huì)轉(zhuǎn)化成S中間型[5]。而且該疫苗免疫動(dòng)物后會(huì)出現(xiàn)局部反應(yīng)，各批次間免疫效果差別較大。因此，此種疫苗未推向市場(chǎng)使用。

1.2 羊種布魯氏菌53H38滅活疫苗

20世紀(jì)60年代，Glenchur[6]等將S型羊種布魯氏菌菌株H38滅活后，加入礦物油佐劑乳化后接種綿羊，發(fā)現(xiàn)該疫苗能夠抵抗布魯氏菌的感染，并保護(hù)孕羊避免流產(chǎn)。但是，由該疫苗存在滅活過(guò)程中抗原表位易丟失，免疫劑量較大，干擾常規(guī)血清學(xué)診斷，接種部位容易引起局部反應(yīng)，不能誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)等缺點(diǎn)，因此限制該疫苗的大面積推廣。

2 減毒活疫苗

減毒活疫苗對(duì)于抵抗胞內(nèi)病原體具有重要作用，弱毒疫苗可用于控制牛、羊和豬種布魯氏菌病。目前，常用的減毒活疫苗包括牛種布魯氏菌減毒活疫苗S19和RB51；羊種布魯氏菌減毒疫苗Rev.1和M5-90；豬種布魯氏菌活疫苗S2。

2.1 牛種布魯氏菌S19疫苗

牛種布魯氏菌活疫苗S19是1923年發(fā)現(xiàn)的天然減毒的光滑型布魯氏菌的突變株。該菌株缺少一個(gè)由702 bp編碼的赤蘚醇代謝基因，從而表現(xiàn)出對(duì)赤蘚醇的敏感性[7]。S19疫苗已在全球多個(gè)地區(qū)用于牛布魯氏菌病的預(yù)防，目前仍然在印度和阿根廷被廣泛使用。牛種布魯氏菌S19疫苗可產(chǎn)生較高的免疫力，抵抗牛感染布魯氏菌后引起的流產(chǎn)。使用S19疫苗免疫牛群后，約有65%～75%的牛能夠受到完全保護(hù)，其余25%～35%的牛群雖然會(huì)受到感染，但并不引起流產(chǎn)癥狀[8]。研究表明，S19疫苗能夠阻止70%～91%的牛群發(fā)生流產(chǎn)，但其保護(hù)效果取決于免疫劑量[9]。減少疫苗劑量的使用未影響抗體滴度的持久性，而且持續(xù)時(shí)間與全劑量免疫基本相同。因此，Erasmus等[10]建議，在流產(chǎn)布魯氏菌流行的地區(qū)減少S19疫苗的使用劑量。然而，在懷孕期間免疫S19卻可引起孕牛的流產(chǎn)，而且在孕期的后3個(gè)月使用該疫苗，其流產(chǎn)率明顯高于其他孕期[11]。研究發(fā)現(xiàn)，懷孕母牛皮下注射S19疫苗可造成3.2%的流產(chǎn)率，靜脈注射則可導(dǎo)致100%流產(chǎn)，即使降低其使用劑量（標(biāo)準(zhǔn)劑量的1/20到1/100）仍可觀察到流產(chǎn)現(xiàn)象[12]。也有報(bào)道稱，使用該疫苗后，奶牛的產(chǎn)奶量降低[5]，而且該疫苗通過(guò)受損皮膚和污染的灰塵引起人的感染[13]。

目前，S19疫苗被指定用于犢牛（4～12月齡）的免疫，犢牛接種S19疫苗也存在一定的副作用，如公?；驙倥５牟G丸炎和關(guān)節(jié)炎等[14]。Wyn-Jones等[15]研究發(fā)現(xiàn)，流產(chǎn)布魯氏菌S19的抗原物質(zhì)存在于免疫動(dòng)物的膝關(guān)節(jié)、滑膜和淋巴結(jié)中，同時(shí)光滑型布魯氏菌疫苗S19由于具有完整的O側(cè)鏈抗原，因此產(chǎn)生的抗體不能使用標(biāo)準(zhǔn)的血清學(xué)方法區(qū)分自然感染和疫苗免疫。因此，目前對(duì)S19的改造主要集中在如何降低其毒力，同時(shí)保留其良好的免疫原性。最新研究顯示，環(huán)1，2-葡聚糖合成酶基因突變株具有疫苗開(kāi)發(fā)潛力的1株候選株，其不僅可產(chǎn)生不依賴于O抗原的免疫反應(yīng)，也保留其對(duì)野生型流產(chǎn)布魯氏菌2308的免疫保護(hù)效果[16]。但這些疫苗的研究還有待在動(dòng)物身上進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。

2.2 牛種布魯氏菌RB51疫苗

1996年，為解決S19疫苗血清學(xué)試驗(yàn)不能區(qū)分自然感染和菌苗免疫的缺點(diǎn)，Luis等[17]將牛種布魯氏菌2308株在含有利福平和青霉素的胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，篩選出的1株具有利福平耐藥性的粗糙型布魯氏菌菌株RB51。臨床使用表明，RB51疫苗免疫犢牛表現(xiàn)出比其他疫苗更優(yōu)異的免疫保護(hù)效果；其接種犢牛（4～12月齡）后未表現(xiàn)出任何臨床體征，也不會(huì)在注射部位引起局部反應(yīng)。而且在接種2周后細(xì)菌即可在血液中被清除，不會(huì)從鼻腔分泌物、唾液、尿液中排出，其免疫保護(hù)作用通過(guò)細(xì)胞免疫介導(dǎo)，牛接種該疫苗后在不同布魯氏菌感染環(huán)境中，1年內(nèi)能保護(hù)全部動(dòng)物避免流產(chǎn)。另外，RB51疫苗株的LPS缺少O-側(cè)鏈，不會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗O-側(cè)鏈抗體，可通過(guò)傳統(tǒng)的血清學(xué)檢測(cè)，而且RB51的保護(hù)效果明顯優(yōu)于S19疫苗[18]。

RB51疫苗主要用于牛的免疫，也可用于綿羊和山羊，但其對(duì)懷孕綿羊的保護(hù)力較低，也不能提供足夠的保護(hù)力以抵抗綿羊種布魯氏菌的感染[19]。除用于家畜外，RB51疫苗也在野生動(dòng)物如美洲野牛、駝鹿中使用。研究發(fā)現(xiàn)，與未免疫的野牛相比，接種RB51疫苗（1.2×1010～6.1×1010CFUs）后其流產(chǎn)率從62%降低至15%。但RB51疫苗的重復(fù)免疫并未增加其免疫保護(hù)效果[20]。另有研究表明，RB51對(duì)麋鹿具有致病性，可導(dǎo)致71%麋鹿流產(chǎn)[21]。而RB51疫苗的缺點(diǎn)主要表現(xiàn)為對(duì)人的感染以及對(duì)利福平的耐藥作用[22]。由于利福平是人類治療布魯氏菌病最有效的抗生素[23]，也是妊娠患者、青少年、心內(nèi)膜炎和神經(jīng)性布魯氏菌患者使用最為常見(jiàn)的抗生素。因此，該疫苗具有的利福平耐藥作用對(duì)于此類人群感染該菌株后的治療極為不利。

2.3 羊種布魯氏菌Rev.1

羊種布魯氏菌Rev.1疫苗被認(rèn)為是控制羊布魯氏菌病的最好疫苗，目前已經(jīng)通過(guò)世界衛(wèi)生組織（WHO）和世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）的認(rèn)證[24]。這種疫苗是由光滑型羊種布魯氏菌野毒株6056在含有鏈霉素的培養(yǎng)介質(zhì)中篩選獲得。因此，該菌株具有鏈霉素抗性。Rev.1疫苗通過(guò)皮下注射使用時(shí)可產(chǎn)生較高的抗體滴度，但不利于疫苗免疫和自然感染動(dòng)物的區(qū)別。而通過(guò)結(jié)膜接種后，血清學(xué)應(yīng)答反應(yīng)較低，有利于免疫動(dòng)物的區(qū)分。因此，Rev.1常采用結(jié)膜免疫途徑用于小反芻動(dòng)物布病的防控。Rev-1疫苗對(duì)山羊的保護(hù)力可持續(xù)4.5年，與未免疫組相比，其組織感染率從92%下降至16%。因此，Rev.1疫苗被多個(gè)國(guó)家用于布病的防控，如塔吉克斯坦于2004年使用Rev.1對(duì)13 006只小反芻動(dòng)物進(jìn)行免疫接種。5年后，與未免疫地區(qū)相比，布病陽(yáng)性率下降80%[25]。20世紀(jì)末葡萄牙也利用Rev.1疫苗控制本地區(qū)的布魯氏菌病，共免疫動(dòng)物2.4萬(wàn)頭，畜群的血清陽(yáng)性率從8.4%下降至1.2%。同時(shí)，該疫苗還具有交叉保護(hù)的能力，可以抵抗流產(chǎn)布魯氏菌的感染[26]。

Rev.1疫苗在綿羊或山羊布魯氏菌病的防控中發(fā)揮重要作用，但也存在某些弊端。如通過(guò)皮下注射或結(jié)膜免疫的Rev-1均可從母羊陰道分泌物中分離到細(xì)菌，而且在泌乳山羊的奶液中檢測(cè)到布魯氏菌[27]，Rev-1疫苗仍然具有一定毒力。研究發(fā)現(xiàn)，Rev-1疫苗免疫綿羊1 d后即可進(jìn)入血液中，并在血液中持續(xù)存在60 d以上，其菌血癥的持續(xù)存在可能使其具有在動(dòng)物間的傳播能力[26]。此外，Rev-1也可感染人類，尤其是獸醫(yī)工作者，而且其毒力比S19疫苗更強(qiáng)。

2.4 羊種布魯氏菌M5-90疫苗

羊種布魯氏菌M5-90疫苗是我國(guó)哈爾濱獸醫(yī)研究所對(duì)布魯氏菌強(qiáng)毒株H28在雞成纖維細(xì)胞上連續(xù)致弱90代后培育而成的減毒活疫苗。20世紀(jì)80年代，石宗舫等[28]對(duì)該疫苗在山羊上的免疫效果進(jìn)行評(píng)估，發(fā)現(xiàn)該疫苗具有較好的免疫效果，免疫15個(gè)月后仍能抵抗布魯氏菌野毒株的感染。該疫苗在免疫效果、抗體消長(zhǎng)規(guī)律和效價(jià)等方面與S2弱毒苗相似，但該疫苗不能用于孕畜的免疫。魯志平[29]使用M5-90疫苗免疫山羊后其流產(chǎn)率高達(dá)100%。程君生等[30]對(duì)M5-90的毒力進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，該菌株的毒力高于S2疫苗株和A19疫苗株，說(shuō)明該疫苗仍具有一定的毒力，對(duì)人和動(dòng)物具有潛在的致病性，而且常規(guī)血清學(xué)方法難以區(qū)分疫苗免疫和自然感染。

2.5 豬種布魯氏菌活疫苗S2

豬種布魯氏菌2號(hào)菌株（S2）是從流產(chǎn)母豬體內(nèi)分離，經(jīng)過(guò)連續(xù)傳代獲得的1種光滑型減毒株。自1958年開(kāi)始，我國(guó)將S2疫苗添加到飲水中制成口服疫苗，可有效保護(hù)82.7%綿羊、82.1%山羊、75.0%母豬和71.4%奶牛免受感染。連續(xù)使用S2疫苗口服免疫豬群2年，可使血清學(xué)陽(yáng)性從62.8%～75.0%降低至0～2.4%。小鼠試驗(yàn)表明，S2的毒力低于Rev-1和S19，但其仍具有潛在的致病性；S2疫苗與Rev-1和S19疫苗相比，其短期免疫力無(wú)顯著差異，但其長(zhǎng)期免疫力顯著低于Rev-1和S19疫苗[31]。S2通過(guò)結(jié)膜免疫雖然可對(duì)綿羊提供一定的保護(hù)力，但明顯不如Rev-1疫苗[32]，說(shuō)明S2疫苗可能不適合結(jié)膜免疫途徑。

3 布魯氏菌亞單位疫苗

亞單位疫苗不會(huì)引起動(dòng)物的感染和流產(chǎn)，因此對(duì)動(dòng)物和人類是安全的。隨著研究的深入，布魯氏菌的保護(hù)性抗原逐漸被挖掘，并將具有免疫原性的布魯氏菌表面分子和抗原成分制成亞單位疫苗。目前，通過(guò)小鼠模型對(duì)多個(gè)亞單位疫苗進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括嘧啶合成酶、Bp26、InfC、L7/L12、Omp16、Omp19、Omp25、Omp28、Omp31、P39、S-腺苷-L-半胱氨酸水解酶、DnaK、SurA和SodC等。Omp31是布魯氏菌的外膜蛋白，對(duì)小鼠模型的感染具有保護(hù)作用[33]。非脂化的外膜蛋白Omp19作為亞單位疫苗可產(chǎn)生Th1細(xì)胞反應(yīng)[34]。DNAK和SurA蛋白可誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫和豐富的細(xì)胞毒性反應(yīng)[35]，脂蛋白L7/L12可誘導(dǎo)Th1細(xì)胞因子的產(chǎn)生，產(chǎn)生有效的細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)[36]。此外，其他純化的重組抗原也可對(duì)布魯氏菌病產(chǎn)生保護(hù)作用。研究發(fā)現(xiàn)，使用聚微粒包裹綿羊種布魯氏菌外膜蛋白制備的亞單位疫苗免疫公羊后，可產(chǎn)生與Rev.1類似的保護(hù)力[37]。利用流產(chǎn)布魯氏菌可溶性抗原和亞甲基十八烷基二甲基溴化銨共同免疫公牛，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)。野牛通過(guò)肌肉注射免疫Bp26和TFDNA疫苗后，抗體的產(chǎn)生和T細(xì)胞增殖能力顯著增強(qiáng)[38]。最近，Leclerq等[39]發(fā)現(xiàn)，外膜蛋白（GBOMP）可有效提高小鼠對(duì)布魯氏菌的抵抗能力。流產(chǎn)布魯氏菌LPS、外膜蛋白及免疫佐劑的聯(lián)合使用可誘導(dǎo)高效的免疫應(yīng)答反應(yīng)并抵抗布魯氏菌的感染；布魯氏菌外膜囊泡（GBMOMV）亞單位疫苗不僅是該類疫苗的重要組成成分，而且還具有納米佐劑的作用，可產(chǎn)生較好的免疫保護(hù)作用。因此，亞單位疫苗具有較大的發(fā)展?jié)摿?，而且由于布魯氏菌菌株間的基因同源性高達(dá)94%以上。所以，亞單位疫苗可為不同種的布魯氏菌病提供保護(hù)作用[40]。

目前，雖然這類疫苗具有一定的保護(hù)效果，但其有效性仍低于現(xiàn)有弱毒苗RB51、S19或Rev.1等，而且其制造成本較高。因此，該類疫苗存在一定的局限性。此外，這些疫苗大多通過(guò)小鼠模型進(jìn)行評(píng)價(jià)，在家畜中的有效性仍需經(jīng)過(guò)大量試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

4 布魯氏菌DNA疫苗

DNA疫苗可誘導(dǎo)機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)（Th1和CTL），并保護(hù)機(jī)體免受多種病原體的入侵。對(duì)布魯氏菌病DNA疫苗的研究顯示，其可誘導(dǎo)強(qiáng)烈的Th1應(yīng)答反應(yīng)，對(duì)流產(chǎn)布魯氏菌具有一定的抵抗作用[41]。目前，用于布魯氏菌病DNA疫苗的靶基因主要有OMP31、L7、L12、BLS和SOD等，這些布魯氏菌DNA疫苗可在一定程度上預(yù)防布魯氏菌的感染[42]，而且其可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生單一蛋白的免疫應(yīng)答，從而有利于布魯氏菌病的臨床診斷。

多個(gè)布魯氏菌抗原的聯(lián)合表達(dá)也是提高該類疫苗免疫保護(hù)作用的重要手段之一。研究顯示，同時(shí)表達(dá)L7、L12和OMP16的DNA疫苗能夠刺激T淋巴細(xì)胞的增殖及γ干擾素的釋放，攻毒保護(hù)力亦明顯高于單抗原的DNA疫苗。同時(shí)表達(dá)L7、L12、BCSP31和SOD的DNA疫苗，其抵抗野毒感染的能力高于疫苗株RB51和S19[43]。多抗原串聯(lián)表達(dá)與細(xì)胞因子如白介素的聯(lián)合表達(dá)是提高該類疫苗免疫效果的另一個(gè)重要手段，其可以增強(qiáng)細(xì)胞毒性反應(yīng)和延長(zhǎng)免疫保護(hù)期。雖然該類疫苗具有安全性高等優(yōu)點(diǎn)，但至今尚無(wú)有效的布魯氏菌DNA疫苗問(wèn)世。

5 布魯氏菌基因突變株候選疫苗

由于現(xiàn)有布魯氏菌弱毒苗普遍存在安全性低、殘余部分毒力或干擾血清學(xué)診斷等缺點(diǎn)。因此，通過(guò)基因工程手段對(duì)現(xiàn)有弱毒苗的毒力基因或O抗原基因進(jìn)行缺失突變已成為改造現(xiàn)有疫苗的主要方法。

5.1 流產(chǎn)布魯氏菌突變株候選疫苗

流產(chǎn)種布魯氏菌突變株候選疫苗的研發(fā)主要表現(xiàn)為毒力的降低，如構(gòu)建的脂質(zhì)A脂肪酸運(yùn)輸基因bacA突變株、亞鐵螯合酶基因hemH突變株和Ⅳ型分泌系統(tǒng)virB突變株等候選疫苗其毒力均明顯降低，但其保護(hù)效果仍有待于進(jìn)一步研究[44]。磷酸甘油酸酯激酶pgK突變株候選疫苗在小鼠模型中具有同S19和RB51疫苗相同的保護(hù)力[45]。野生型布魯氏菌葡萄糖磷酸變位酶pgm突變株和鋅吸收系統(tǒng)znuA突變株候選疫苗具有S19同等的保護(hù)效果[46]。而且流產(chǎn)布魯氏菌pgm缺失株候選疫苗產(chǎn)生的抗體不依賴于O側(cè)鏈抗原，因此可用于與野毒布魯氏菌的區(qū)分[47]。

5.2 羊種布魯氏菌突變株候選疫苗

由于羊種布魯氏菌疫苗Rev.1和M5-90均不能對(duì)野毒布魯氏菌進(jìn)行有效區(qū)分，因此對(duì)這類疫苗的改造主要集中于LPS的缺失，包括核心多糖和O鏈多糖。研究人員對(duì)wa突變株、per突變株和wbkF突變株候選疫苗的研究顯示，在布魯氏菌感染過(guò)程中其抵抗母羊流產(chǎn)的能力弱于Rev.1[48]。在另一項(xiàng)研究中，研制的6種羊種布魯氏菌rpoB基因突變株候選疫苗均能夠?qū)π∈蟾骨唤臃N布魯氏菌野毒株的感染起保護(hù)作用，其中2株候選疫苗的保護(hù)作用類似于Rev.1，且均優(yōu)于RB51疫苗，而且也不誘導(dǎo)O抗原抗體的產(chǎn)生；隨后研究的14株羊種布魯氏菌LPS基因突變株中的兩株候選疫苗具有與Rev.1相同的保護(hù)力，但其接種劑量卻比Rev.1高1 000倍[22]。最近研究發(fā)現(xiàn)，口服給藥可能是布魯氏菌減毒的另一個(gè)模式；羊種布魯氏菌16MΔznuA疫苗候選株口服免疫后，對(duì)鼻內(nèi)感染羊種布魯氏菌強(qiáng)毒株16M的抵抗力優(yōu)于RB51疫苗株[49]。

5.3 豬種布魯氏菌突變株候選疫苗

對(duì)豬種布魯氏菌突變株候選疫苗的研究主要體現(xiàn)為毒力基因的缺失，如豬種布魯氏菌芳香族氨基酸生物合成基因aroC突變株、布魯氏菌毒力因子bvfA突變株和一氧化氮還原酶norD基因突變株在小鼠模型評(píng)價(jià)中其毒力明顯減弱。而豬種布魯氏菌赤蘚醇代謝基因eryC和雙組份調(diào)控系統(tǒng)ntrC基因缺失株在小鼠體內(nèi)毒力未發(fā)生明顯下降[50]，說(shuō)明這些突變株并未完全減毒。

6 異源表達(dá)的布魯氏菌疫苗

使用活疫苗載體異源表達(dá)布魯氏菌保護(hù)性抗原可為各種抗原提供有效表達(dá)途徑[51]。目前，許多弱毒疫苗載體已被批準(zhǔn)用于人類，并被證實(shí)是安全的。使用減毒沙門氏菌表達(dá)布魯氏菌的L7/L12和嘧啶合成酶融合蛋白的重組活疫苗對(duì)抵抗野生型流產(chǎn)布魯氏菌的能力明顯優(yōu)于重組蛋白[52]。然而，與布魯氏菌活疫苗104M相比，沙門氏菌為基礎(chǔ)的疫苗提供相對(duì)較低的保護(hù)力。在減毒的豬沙門氏菌中表達(dá)流產(chǎn)布魯氏菌保護(hù)性抗原BCSP31并通過(guò)口服免疫小鼠和豬后，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，但其保護(hù)效果不如乳酸球菌中表達(dá)流產(chǎn)布魯氏菌L7、L12所產(chǎn)生的IgA滴度高，并且在小鼠模型中的保護(hù)效果不如S19[53]。RB51作為一種活疫苗載體重組同源性抗原，以增強(qiáng)其免疫保護(hù)力，在RB51中過(guò)表達(dá)sodC和wboA，可抵抗野生型豬種布魯氏菌1330的侵染[54]。一些病毒載體也被用于布魯氏菌抗原的表達(dá)，L7、L12在牛痘病毒中的表達(dá)雖然可以誘導(dǎo)抗L7、L12抗體的產(chǎn)生，但免疫保護(hù)能力較低[55]。在有復(fù)制缺陷的塞姆利基森林病毒中表達(dá)流產(chǎn)布魯氏菌轉(zhuǎn)錄起始因子IF3和sodC，雖然可抵抗野生型流產(chǎn)布魯氏菌2308的感染，但與RB51疫苗相比其保護(hù)水平仍然很低[56]。

7 展望

理想的布魯氏菌疫苗應(yīng)具有安全無(wú)毒、免疫效果好，能夠防止兩性動(dòng)物（公和母）的感染、防止孕畜流產(chǎn)、接種一次疫苗可長(zhǎng)期預(yù)防、不污染牛奶和肉類等特點(diǎn)。盡管當(dāng)前布魯氏菌商品苗（主要為弱毒活疫苗）對(duì)控制和預(yù)防動(dòng)物布魯氏菌病是有效的，但仍需要對(duì)其安全性和毒力進(jìn)行優(yōu)化和改善。隨著布魯氏菌全基因組序列的完成，越來(lái)越多的功能基因被不斷發(fā)現(xiàn)和研究，必將會(huì)有更多的靶基因可以用于疫苗的改造或利用，這也為開(kāi)發(fā)具有應(yīng)用前景的布魯氏菌新型疫苗提供更廣泛的空間。