張 婷，李金貴，劉茂軍，鄭世學(xué)，馬玉忠*

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院，河北 保定 071001；2.揚州大學(xué) 獸醫(yī)學(xué)院，江蘇 揚州 225009；3.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，江蘇 南京 210014）

羔羊大腸桿菌病是一種常見病，傳染性強，致死率較高[1]。保定是全國育肥羊養(yǎng)殖規(guī)模較大的地區(qū)，年出欄量約為600萬只。近期羔羊腹瀉頻發(fā)，根據(jù)臨床癥狀，初步判定為大腸桿菌感染。本文對保定周邊縣（區(qū)）規(guī)模養(yǎng)殖場6家，唐縣2家、徐水區(qū)1家、易縣1家、曲陽縣1家、滿城縣1家進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，并對大腸桿菌進(jìn)行分離鑒別，用敏感藥物進(jìn)行治療試驗，以便為該地區(qū)羔羊大腸桿菌病的預(yù)防和臨床診治提供參考。

1 材料與方法

1.1 流行病學(xué)調(diào)查

采取走訪調(diào)查、就診統(tǒng)計形式，記錄保定地區(qū)的患病羊場的發(fā)病情況。從發(fā)病的季節(jié)、發(fā)病羊的年齡這兩個因素，分析保定地區(qū)大腸桿菌病的流行情況。

1.2 病料采集與分離培養(yǎng)

保定患病羔羊，采集心、肺、肝、脾、腎、肛門拭子等。進(jìn)行細(xì)菌分離，將分離后的菌分別使用麥康凱培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行鑒別，接種后置于37℃恒溫培養(yǎng)12～18 h，觀察記錄菌落生長情況和形態(tài)。將麥康凱中培養(yǎng)基的紅色單菌落，接種至伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基。革蘭氏染色后，在顯微鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)。

1.3 MALDI質(zhì)譜鑒定

將分離出的疑似大腸桿菌經(jīng)MALDI-TOF檢測，使用Bruker Daltonik MALDI-TyperTM微生物鑒定系統(tǒng)，對檢測菌株進(jìn)行系統(tǒng)匹配并評分。

1.4 治療

根據(jù)藥敏試驗和生產(chǎn)中的實際需求，本試驗采用新霉素進(jìn)行分組治療，共分為4組：A組10只健康羊；B組患病羊10只，采用敏感抗生素進(jìn)行治療；C組患病羊10只，使用白頭翁散進(jìn)行治療；D組為患病羊10只不給藥。

記錄治療0 d、3 d、7 d的體溫、腹瀉情況、飲食情況。通過使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS分析體溫變化、血常規(guī)變化，計算治愈率。

治愈率=（治愈數(shù)/總數(shù)）×100%

2 結(jié)果

2.1 發(fā)病情況

根據(jù)羔羊大腸桿菌病的發(fā)病情況（見表1），患病羊共1 870只，總發(fā)病率29.22 %（1 870/6 399），總死亡率為13.71%（877/6 399）。根據(jù)發(fā)病季節(jié)來看，夏季是一年中最易發(fā)病的季節(jié)，占總發(fā)病的44.17%（826/1 870），發(fā)病高峰期集中在7、8月份；春季次之，發(fā)病率為28.34%（530/1 870）；秋季和冬季的發(fā)病率分別為12.14%（227/1 870）和15.35%（287/1 870）。分別對2～4周齡、4～8周齡、9周齡的患病羔羊進(jìn)行發(fā)病統(tǒng)計，2～4周齡羔羊發(fā)病率為20.75%（388/1 870），4～8周齡的羔羊發(fā)病數(shù)最多，發(fā)病率高達(dá)76.79%（1 436/1 870），9周齡以上的羊發(fā)病率較低，發(fā)病率為2.46%（46/1 870）。

表1 保定地區(qū)各養(yǎng)殖場發(fā)病情況

2.2 臨床癥狀與病理變化

患病羔羊臨床表現(xiàn)最明顯的特征為腹瀉，初期排出黃綠色或褐色的粥樣便。患病羔羊有體溫升高癥狀，嚴(yán)重的可能會出現(xiàn)全身皮膚發(fā)紅。會出現(xiàn)咳嗽、呼吸困難的呼吸道癥狀。站立困難，有時會長時間坐臥不起，精神和食欲都會下降，眼眶凹陷。

表2 臨床指標(biāo)（n=10）

剖檢腹瀉嚴(yán)重瀕死的病羊，可見腹部皮下水腫。皺胃黏膜出血，消化不完全，可見乳凝塊；腸管水腫、出血，腸管內(nèi)充氣，腹腔有積液。

2.3 分離鑒定

血瓊脂培養(yǎng)基中有菌落生長，未見溶血；麥康凱培養(yǎng)基中可見規(guī)則的紅色圓形菌落，邊緣規(guī)則，表面光滑；伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基中長出紫黑色菌落，周圍伴有綠色金屬光澤。革蘭氏染色鏡檢，可見陰性短桿菌，兩端鈍圓、顏色略微深。對疑似大腸桿菌進(jìn)行MALDI檢測，與大腸桿菌同源性進(jìn)行匹配評分，確定檢測菌株為大腸桿菌。

2.4 治療

選取敏感抗生素新霉素進(jìn)行治療。治療0 d、3 d、7 d的臨床指標(biāo)如表2，3 d時，B組體溫、WBC均降低，C組恢復(fù)較慢，新霉素治療的見效時間更短。經(jīng)7 d治療，B組體溫、WBC與A組無差異，與D組差異極顯著，治愈率為80%；C組的體溫和WBC與A組無差異，與D組有顯著差異，治愈率為80%；在這7 d中，B組、C組未出現(xiàn)患病羊的死亡，D組共有3只羊病死。B組、C組在7 d的治愈率相同，這兩種藥對大腸桿菌病的治療都有明顯效果。

3 討論

大腸桿菌是腸道中常見菌，但致病性大腸桿菌可引起機體發(fā)病，對畜牧養(yǎng)殖業(yè)造成了很大的危害[2]。羊的養(yǎng)殖在畜牧業(yè)中占有很大比例，因此，對羔羊的大腸桿菌病的防控和大腸桿菌的檢測有很大的意義[3,4]。本試驗通過對保定地區(qū)大腸桿菌病的流行情況調(diào)查，為養(yǎng)殖業(yè)提供幫助，以減少大腸桿菌病帶來的損失。

保定地區(qū)的羔羊大腸桿菌病散在發(fā)生，在唐縣、徐水區(qū)、易縣、曲陽縣、滿城縣這些地區(qū)，一年四季都有發(fā)病。在保定地區(qū)的養(yǎng)殖場中，唐縣的肉羊養(yǎng)殖規(guī)模較大，因此造成了相對較為嚴(yán)重的傳播，大腸桿菌病的發(fā)病率在本次調(diào)查中最高。因此，需要加強防范，注重改善飼養(yǎng)條件和日常消毒。保定地區(qū)的四季特點明顯，冬季寒冷干燥，夏季較熱。雖然一年內(nèi)均有羔羊感染大腸桿菌，但是發(fā)病的季節(jié)性明顯，進(jìn)入春季后發(fā)病率開始上升，夏季為高發(fā)季節(jié)，入秋之后發(fā)病趨勢減緩，冬季、秋季發(fā)病較少。這一結(jié)果與栗子明[5]的研究結(jié)果相似。由此看來，需提前做好預(yù)防措施，保定地區(qū)夏季炎熱，是羔羊大腸桿菌病的發(fā)病高峰期，可以在春季對畜舍進(jìn)行徹底的消毒，大腸桿菌對一般的消毒劑都比較敏感。還可通過飼喂微生物制劑等，使羔羊的免疫能力提高。

大腸桿菌可根據(jù)溶血能力分為可溶血性和不溶血性2種[6]，王顯峰[7]分離的羊源性大腸桿菌在鮮血瓊脂培養(yǎng)基中出現(xiàn)了β溶血。本試驗中的鮮血瓊脂培養(yǎng)基均未出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，說明本試驗分離的為不溶血型大腸桿菌。本試驗使用的MALDI-TOF鑒定大腸桿菌，在臨床上對病原菌的鑒別更佳準(zhǔn)確、便捷[8]。

本試驗篩選出的敏感藥物有：多粘菌素B、新霉素等，考慮到規(guī)模性養(yǎng)殖場的用藥成本，本試驗選擇了敏感性較高且成本相對較低的新霉素。經(jīng)過7 d的治療，白頭翁散、新霉素對羔羊大腸桿菌病均能有效治療，新霉素的見效時間更快。相比于其他研究，本試驗經(jīng)過流行病學(xué)調(diào)查對保定的大腸桿菌發(fā)病特點有所了解，治療方案更佳接近生產(chǎn)實際。所選取的抗生素，是經(jīng)藥敏試驗篩出的敏感藥物，更有針對性的用于該地區(qū)的大腸桿菌病治療，且用藥成本低。使用的白頭翁散，既保留了白頭翁對大腸桿菌的抑菌性，同時使用方便，易于在臨床中給藥。