顧海洋

（江蘇省響水縣畜禽改良站，江蘇響水 224600）

1 前言

生豬人工授精技術(shù)能夠克服生豬體格大小、時(shí)間和區(qū)域的差別，充分利用雜種優(yōu)勢，減少疾病傳播、特別是生殖道傳染病傳播，提高優(yōu)良公豬的配種效能和種用價(jià)值，促進(jìn)生豬品種改良和提高商品豬質(zhì)量及其整齊度。生豬精液稀釋與保存是生豬人工授精技術(shù)的一個(gè)核心環(huán)節(jié)，如果操作不嚴(yán)謹(jǐn)，影響精液質(zhì)量，影響到生豬人工授精的成功率和受孕質(zhì)量，從而影響生豬人工授精技術(shù)的應(yīng)用效果。

2 生豬精液稀釋技術(shù)要點(diǎn)

生豬精液稀釋的目的就是提高良種公豬利用率，擴(kuò)大精液容量，增加輸精頭數(shù)，同時(shí)延長精子的保存時(shí)間及受精能力。生豬精液稀釋，有以下幾項(xiàng)技術(shù)要點(diǎn)：

2.1 采精前的準(zhǔn)備

2.1.1 人員的準(zhǔn)備。采精員和化驗(yàn)員需更換潔凈工作衣、帽，戴口罩，穿長膠鞋。先修剪手指甲，用消毒液洗手，再用清水（冬天用40℃溫水）浸泡，擦干后，戴一次性無毒塑料手套。

2.1.2 器械的準(zhǔn)備。集精杯（內(nèi)置無毒塑料袋并覆蓋四層紗布或一層精液過濾紙）、載玻片、蓋玻片、精液處理器皿、精液密度儀等器械殺菌消毒，確保無菌。采精前1h，將消毒后的與精液接觸的器械預(yù)熱至37℃，顯微鏡載物臺(tái)恒溫板、精液密度儀預(yù)熱至37℃。

2.1.3 稀釋液的準(zhǔn)備。稀釋液的溫度應(yīng)略低精液傳入精液處理室時(shí)的精液溫度。

2.1.4 采精室、精液處理室的準(zhǔn)備。采精前，需要開啟空調(diào)，保證室內(nèi)溫度在22℃～28℃，空調(diào)的風(fēng)向應(yīng)避開精液采精和精液化驗(yàn)的方向。采精室、精液處理室要保持清潔衛(wèi)生，避免陽光直射。

2.2 稀釋液

稀釋液用來稀釋精液，延長精子壽命，降低精子新陳代謝的速率，為精子提供營養(yǎng)；稀釋液中防凍成分，可以使精液低溫保存，稀釋液中的抗生素可以抑制精液中細(xì)菌生長。

2.2.1 制劑和配方。稀釋劑有短效稀釋劑、中效稀釋劑和長效稀釋劑，可以自配，也可以購買商品稀釋劑。實(shí)際工作中，精液保存3d以內(nèi)，選擇短效稀釋劑，稀釋劑自配，成本較低。精液保存4～6d，選擇中效稀釋劑；精液保存7d以上，選擇長效稀釋劑。精液保存4d以上，選擇商品稀釋劑，雖然成本較高，但具有良好的穩(wěn)定性，不同批次之間沒有較大的差異。稀釋劑保存在低溫避光的環(huán)境中。江蘇地區(qū)自配公豬精液稀釋劑的配方為：葡萄糖50～60g，檸檬酸三鈉3～5g，乙二胺四乙酸二鈉1g，青霉素鈉50萬單位，硫酸鏈霉素0.5g（或慶大霉素10萬單位，或卡那霉素50萬單位），二次蒸餾水或注射用水1000g。葡萄糖用分析純或注射用，檸檬酸三鈉和乙二胺四乙酸二鈉用分析純。

2.2.2 稀釋用水。稀釋水應(yīng)選擇二次蒸餾水或注射用水。

2.2.3 配制稀釋液。自配稀釋劑，用電子天平準(zhǔn)確稱取藥品，放入蒸餾水中用磁力攪拌器攪拌達(dá)到充分溶解，再過濾一次，然后在水浴鍋內(nèi)進(jìn)行預(yù)熱，以備使用。商品稀釋劑，將稀釋劑溶解在25℃～35℃的水中，水溫不得超過40℃，會(huì)對(duì)抗生素造成破壞。稀釋劑在水中完全溶解后，需要靜置1h以上，使稀釋液的滲透壓與pH值穩(wěn)定后，才能投入使用。剩余稀釋液應(yīng)密封后置于冰箱中冷藏，時(shí)間不得超過24h。

2.3 精液質(zhì)量檢測

精液質(zhì)量檢測的目的是檢查種公豬的配種能力、繁殖問題、確定精液稀釋倍數(shù)、檢查精液的處理方法是否正確和檢查精液產(chǎn)品的質(zhì)量。

精液采集后，放置時(shí)間不宜超過15min，要在30min之內(nèi)處理完畢。新鮮精液質(zhì)量要求：顏色為乳白色或淺灰白，無膿性分泌物。采精重量≥150mL；精子密度≥1億/mL；精子活力≥0.7；精子畸形率 ≤20%。

2.3.1 外觀檢測。主要評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)為精液重量（1mL/g）、顏色以及氣味等。成年公豬一次射出的精液重量為150～600mL，精液中精子數(shù)量為200～800億個(gè)。公豬的品種不同，精液重量也存在較大的差異。正常的精液為乳白色或灰白色。乳白色說明精液比較濃，精子密度高，2億/mL以上，屬于正常精液；灰白色說明精液比較稀，精子密度也達(dá)到1億/mL，也是正常精液，可以使用。精液顏色為黃色說明精液中混有尿液，多因?yàn)楣i包皮積尿；淺褐色說明精液中混有血液，多因?yàn)楣i陰莖或輸精管有損傷出血；淺綠色說明精液中混雜膿性細(xì)胞，多由于公豬患附睪炎或前列腺炎癥，這些都屬于不正常精液，不可以使用。正常精液的氣味略帶腥味，如果在檢測中發(fā)現(xiàn)有其他異味或惡臭味，則代表公豬生殖系統(tǒng)有炎癥，不可以使用。精液中含有血液，伴有臭味，公豬可能患有生殖器官疾病，需要將其及時(shí)淘汰。

2.3.2 精液實(shí)驗(yàn)室檢測。精液實(shí)驗(yàn)室檢測包括精子活力、精子密度以及精子畸形率等。精子活力是指精液在37℃的環(huán)境中，直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子數(shù)量占精子總數(shù)量的百分比，實(shí)行“十級(jí)一分制”、0.1～1.0評(píng)定法，如直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子數(shù)量占精子總數(shù)量的80%，評(píng)為0.8。精子活力檢測使用恒溫載物臺(tái)，在溫度上升至35℃～37℃時(shí)，使用100～400倍的顯微鏡觀察精子，原精液精子活力低于0.7的應(yīng)廢棄。精子密度是指每mL精液中精子的數(shù)量，用分光光度計(jì)能夠準(zhǔn)確的檢測出精子密度，正常種公豬精液精子密度為2～3億/mL。精子畸形率則是指精液中畸形精子數(shù)量占精子總數(shù)量的百分比。正常的精子形似蝌蚪，頭部和尾部完整，而畸形的精子包括頭部畸形、尾部畸形以及頂體缺陷等。精子畸形率高于20%的精液不得使用。檢測精子畸形率用400～600倍的顯微鏡觀察，每兩周應(yīng)檢測一次。

2.4 精液稀釋倍數(shù)

精液質(zhì)量檢測合格后，按照《種豬常溫液》（GB23238-2009）中的要求，精液稀釋后每個(gè)輸精劑量中有效精子數(shù)地方品種需達(dá)到10億個(gè)，其他品種需達(dá)到25億個(gè)，輸精量為地方品種40mL，其他品種需達(dá)到80mL的標(biāo)準(zhǔn)。例如，一頭長白公豬采集精液量為250mL，精子活力為0.8，精子密度為2億/mL，有效精子數(shù)為250mL×2億/mL×0.8=400億，可以確定輸精份數(shù)為400億÷25億/份=16份，稀釋過程中需要加入的稀釋液量16份×80mL/份-250mL=1030mL。

2.5 精液稀釋操作要點(diǎn)

精液稀釋采用等溫稀釋，精液與稀釋液溫差不得超過1℃，應(yīng)根據(jù)精液溫度調(diào)節(jié)稀釋液溫度，不得反向操作。將稀釋液沿杯壁緩慢加入到精液中，輕輕搖動(dòng)或沿一個(gè)方向攪拌，混合均勻。高倍稀釋時(shí)，先低倍稀釋（1：1）～（1：2），30s后再加入余下的稀釋液。

2.6 精液稀釋后檢查與分裝

在精液稀釋操作完成后，應(yīng)在5min后進(jìn)行精子活力檢查，檢查合格，進(jìn)行精液分裝。如果檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)精子活力下降，需要查明原因，采取改進(jìn)措施。精液分裝采用袋裝、瓶裝或管裝，應(yīng)選用對(duì)精子無毒害作用且滅菌的一次性塑料制品。地方品種以40mL、其他品種以80mL為單位，將精液分裝至精液袋、瓶或管中，排出空氣后密封。精液分裝完成后，需要在包裝瓶上粘貼標(biāo)簽，一個(gè)品種一個(gè)顏色便于區(qū)分，標(biāo)注產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)單位、生產(chǎn)日期、批號(hào)、公豬品種、公豬耳號(hào)和精液保質(zhì)期等信息。

3 生豬精液保存技術(shù)要點(diǎn)

精液的保存，要恒溫、避光、防水、防震。自然狀態(tài)下，精子的壽命只有幾個(gè)小時(shí)。精液保存方法按溫度分：常溫保存，溫度為15℃～25℃；低溫保存，溫度為0℃～5℃；冷凍保存，溫度為-79℃～-196℃。精液保存原理：精子自身所產(chǎn)生的酸性物質(zhì)和稀釋液中的酸性物質(zhì)使精液的pH降低到一定的水平（通常把pH調(diào)整到6.35左右），能夠抑制精子的代謝，從而延長精子的存活時(shí)間，抗生素主要是抑制微生物的繁殖。生豬精液3～4h內(nèi)使用，放在常溫（20℃左右室溫）保存即可。5h以上使用的精液，應(yīng)置于22℃～25℃下1～2h后，放到4米深旱井中保存或17℃恒溫冰箱內(nèi)避光保存，也可用12～15層紗布或干毛巾包嚴(yán)直接放入17℃恒溫箱（或旱井）內(nèi)。保存時(shí)注意平放，增大接觸面積。里面放溫度計(jì)，隨時(shí)監(jiān)測溫度變化。常溫保存的精液一般能夠存活7d，但一般保存期限為3d以內(nèi)。保存的精液每隔4～8h搖動(dòng)一次并記錄，搖動(dòng)時(shí)應(yīng)輕緩均勻。每批精液應(yīng)留樣備查，同批號(hào)的精液在保質(zhì)期內(nèi)應(yīng)抽樣檢查并記錄。

4 生豬精液稀釋保存注意事項(xiàng)

在生豬精液稀釋保存過程中，為了避免精液受到外界因素的影響，需要重點(diǎn)關(guān)注以下注意事項(xiàng)：

4.1 嚴(yán)格控制溫度

精液稀釋與保存過程中，為防止冷應(yīng)激或熱應(yīng)激，需要嚴(yán)格控制溫度，不能使用過冷過熱的容器，精液不能直接放置冰冷的桌面上。分裝后的精液，不能立即放入17℃恒溫冰箱內(nèi)，應(yīng)先留在冰箱外l～2h，以免因溫度下降過快而刺激精子，造成死精增多。

4.2 在無塵環(huán)境中稀釋

精液稀釋要在無塵環(huán)境中進(jìn)行，所有使用的設(shè)施要嚴(yán)格消毒，顯微鏡用專門的擦拭紙擦拭，載玻片和蓋玻片清水清洗后烘干。

4.3 抗生素的添加

抗生素應(yīng)在稀釋精液時(shí)添加，太早易失去效果。

4.4 檢測精子活力預(yù)熱

輸精前檢測精子活力必須是精液在35℃～37℃的水浴鍋內(nèi)預(yù)熱10min之后才能檢測精子活力，預(yù)熱不夠，無法正確判斷精子活力。

4.5 定期倒置容器

在精液保存過程中，精子可能沉淀到容器底部，因此需要每天倒置容器2次，保證精子均勻分布。

5 結(jié)語

總而言之，在生豬人工授精技術(shù)的應(yīng)用過程中，精液稀釋與保存的操作規(guī)范是影響生豬人工授精技術(shù)應(yīng)用效果的關(guān)鍵因素。因此，工作人員必須嚴(yán)格執(zhí)行相關(guān)規(guī)范，避免因操作不當(dāng)而對(duì)精液品質(zhì)造成不利影響，保證生豬人工授精技術(shù)的應(yīng)用效果。