忻 雅，肖文斐，阮松林，余 紅

(杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院 生物技術(shù)研究所，浙江 杭州 310024)

中國(guó)已經(jīng)成為世界上面積最大、產(chǎn)量最高的草莓生產(chǎn)國(guó)[1]。草莓市場(chǎng)需求旺盛，種植效益較高，但存在的化肥、農(nóng)藥使用過量，草莓各種病害頻發(fā)問題也影響了目前草莓產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。殺菌劑是一類用來防治植物病害的藥劑，目前在草莓上的炭疽病、灰霉病、白粉病、根腐病等主要病害都通過使用殺菌劑進(jìn)行防治。隨著生物防治技術(shù)的發(fā)展，目前在草莓上也開始研究和使用一些微生物來源的生防制劑進(jìn)行草莓根腐病[2]、白粉病[3]、炭疽病[4]、灰霉病[5]等主要病害的防治。但生防菌劑存在藥效不穩(wěn)、適應(yīng)性較低的問題，其防治效益低于化學(xué)防治，因此單獨(dú)使用有局限性。其中的植物免疫誘導(dǎo)劑是一類新型的生防制劑，主要通過激發(fā)植物自身的抗病性，達(dá)到抑制病原菌的目的[6]。為了解決生防制劑和化學(xué)防治存在的弱點(diǎn), 擬將兩者配合使用，達(dá)到優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)的目的。

草莓定植后到開花前這段時(shí)間是病害防治的關(guān)鍵時(shí)期，草莓苗移栽所帶的病菌、種植大棚土壤原有的土傳病菌等，容易引起炭疽病、根腐病、枯萎病的發(fā)生而造成大量的死苗。本研究首次嘗試在蓋大棚膜后對(duì)草莓植株和環(huán)境進(jìn)行消毒殺菌，既可防病，也可為隨后植物免疫誘導(dǎo)劑的高效使用創(chuàng)造較好的環(huán)境條件。本文開展了殺菌劑結(jié)合植物免疫誘導(dǎo)劑的篩選試驗(yàn)，通過性狀、產(chǎn)量和田間病情指數(shù)檢測(cè)，篩選出最佳方案，降低病害發(fā)生，提高草莓的產(chǎn)量和品質(zhì)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在杭州市西湖區(qū)轉(zhuǎn)塘街道杭州市農(nóng)科院試驗(yàn)基地進(jìn)行。供試草莓品種為紅頰。試驗(yàn)在一個(gè)單體大棚(寬度8 m，長(zhǎng)度45 m)內(nèi)進(jìn)行。為了解誘導(dǎo)劑和殺菌劑這2個(gè)因素對(duì)草莓灰霉病和農(nóng)藝性狀的影響，本試驗(yàn)采用裂區(qū)設(shè)計(jì)，誘導(dǎo)劑為主區(qū)(A)，分別為?？奠`1號(hào)(A1)，仟禾福 (A2)，清水對(duì)照(A0)。其中保康靈1號(hào)水劑300倍液使用，由杭州市農(nóng)科院生物所提供；仟禾福粉劑1000倍使用，由杭州安邦農(nóng)業(yè)生物科技有限公司生產(chǎn)。大棚殺菌劑為副區(qū)(B)，B1：46%氫氧化銅粉劑(600倍液，美國(guó)杜邦公司)；B2：70%代森聯(lián)(600倍液，德國(guó)巴斯夫)；B3：50%氯溴異氰尿酸(1200倍液，東寶農(nóng)化股份有限公司)；B4：春雷霉素(1000倍液，南寧市德豐富化有限公司)；B0：對(duì)照(清水)。

殺菌劑處理第1次施藥時(shí)間為2019年10月25日(24日蓋大棚膜)，第2次施藥在2019年11月5日，共2次。誘導(dǎo)劑處理：11月11日開始，每7天噴施1次，共噴5次。殺菌劑和誘導(dǎo)劑共15個(gè)小區(qū)，隨機(jī)分布，每小區(qū)200株草莓，用手持電動(dòng)噴霧器均勻噴濕葉片。每個(gè)小區(qū)選取長(zhǎng)勢(shì)均勻的60株掛牌，20株為一個(gè)重復(fù)，設(shè)3個(gè)重復(fù)，用于病情調(diào)查和植株性狀觀測(cè)。整個(gè)試驗(yàn)期除了以上藥劑，不使用其它化學(xué)農(nóng)藥，水肥按照常規(guī)管理。

1.2 測(cè)定項(xiàng)目與方法

葉片性狀觀察：2019年12月3日，在第4次誘導(dǎo)劑處理后，對(duì)不同處理草莓功能葉的長(zhǎng)度、寬度進(jìn)行測(cè)量，用丙酮法[7]測(cè)定葉綠素含量。

草莓葉片光合參數(shù)測(cè)定：2019年12月5日，選取不同誘導(dǎo)劑處理(A0B0、A1B0、A2B0)的草莓功能葉，利用便攜式LI-6400 光合儀(美國(guó)LI-COR公司) 通過控光進(jìn)行光響應(yīng)曲線測(cè)定[8]。每個(gè)材料每處理下測(cè)定重復(fù)3片葉，取平均值。測(cè)定凈光合速率(Pn)、氣孔導(dǎo)度(Gs)、胞間CO2濃度(Ci)和蒸騰速率(Tr)等參數(shù)，以比較不同誘導(dǎo)劑對(duì)草莓葉片光合能力的影響。

灰霉病病情指數(shù)調(diào)查：2019年12月2日、12月25日、2020年1月21日、2月17日、3月13日對(duì)不同處理的草莓植株進(jìn)行灰霉病調(diào)查，并計(jì)算病情指數(shù)。按病斑面積占整體面積的比例分0、1、3、5、7、9級(jí)。病情指數(shù)=[∑(各級(jí)病葉、果數(shù)×該病級(jí)值)/(調(diào)查總?cè)~、果數(shù)×最高病級(jí)值)]×100。

草莓灰霉病相對(duì)防效計(jì)算：相對(duì)防效(%)=[(對(duì)照區(qū)病指-處理區(qū)病指)/對(duì)照區(qū)病指]×100%。

草莓產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)：統(tǒng)計(jì)2019年12月21日到2020年3月13日不同殺菌劑和誘導(dǎo)劑處理的草莓產(chǎn)量。

數(shù)據(jù)采用Excel 2007進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，通過DPS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，并用Duncan’s檢驗(yàn)方法對(duì)顯著性差異(P<0.05)進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同殺菌劑和誘導(dǎo)劑處理后草莓葉片性狀比較

殺菌劑和誘導(dǎo)劑處理對(duì)草莓葉片長(zhǎng)度、寬度和葉綠素含量都有不同程度的影響(表1)。與清水對(duì)照(A0)相比，?？奠`1號(hào)(A1)處理后的葉片長(zhǎng)度、寬度和葉綠素含量分別提高了4.6%、5.1%和13.8%，仟禾福(A2)分別提高了5.7%、6.4%和5.4%。而殺菌劑對(duì)葉片生長(zhǎng)的影響并不大，效果最好的是70%代森聯(lián)(B2)，葉片長(zhǎng)度和葉綠素含量分別提高了10.5%和1.4%。

2.2 不同誘導(dǎo)劑處理對(duì)草莓葉片光合參數(shù)的影響

圖1表示了保康靈1號(hào)和仟禾福處理后草莓葉片凈光合速率Pn、氣孔導(dǎo)度Gs、胞間CO2濃度Ci、蒸騰速率Tr隨光合有效輻射PAR的變化情況。隨著PAR的升高，葉片的Pn、Gs和Tr都升高，同時(shí)Ci逐漸降低。在PAR強(qiáng)度為1000 μmol/(m2·s)左右時(shí)，凈光合速率Pn值表現(xiàn)為仟禾福處理的葉片與對(duì)照幾乎一致，遠(yuǎn)低于?？奠`1號(hào)處理。因此可以看出，保康靈1號(hào)可以明顯提高草莓葉片的光合能力，與表1的葉綠素含量提高13.8%相吻合。

表1 不同殺菌劑和誘導(dǎo)劑處理后 草莓葉片農(nóng)藝性狀比較

2.3 不同殺菌劑和誘導(dǎo)劑處理對(duì)草莓灰霉病發(fā)病情況的影響

分5個(gè)不同時(shí)期調(diào)查了草莓灰霉病發(fā)病情況，發(fā)現(xiàn)殺菌劑和誘導(dǎo)劑處理對(duì)草莓灰霉病病情指數(shù)有不同程度的影響(表2)。與清水對(duì)照(A0)相比，?？奠`1號(hào)(A1)處理后病情指數(shù)顯著降低了36.1%，仟禾福(A2)處理降低了10.7%。而殺菌劑B1～B4處理后分別降低了3.6%、18.8%、7.1%和10.7%，只有B2(70%代森聯(lián))達(dá)到了顯著水平。

從殺菌劑和誘導(dǎo)劑的結(jié)合效果來看，以效果較好的?？奠`1號(hào)和70%代森聯(lián)為例，與空白對(duì)照A0B0相比，單獨(dú)的誘導(dǎo)劑A1B0病情指數(shù)降低了27.0%，用殺菌劑處理后再使用誘導(dǎo)劑的A1B2則降低了36.9%，因此殺菌劑前處理提高了誘導(dǎo)劑的抗病效果(9.9%)。

計(jì)算出不同殺菌劑的平均相對(duì)防效,如圖2所示，代森聯(lián)效果最好，相對(duì)防效為18.8%，其次是春雷霉素(10.7%)。計(jì)算出不同誘導(dǎo)劑的平均相對(duì)防效,如圖3所示，?？奠`1號(hào)的相對(duì)防效是36.1%，是仟禾福相對(duì)防效的3.4倍。因此70%代森聯(lián)結(jié)合誘導(dǎo)劑?？奠`1號(hào)處理草莓植株，可以顯著降低草莓灰霉病的病情指數(shù)。

圖1 不同誘導(dǎo)劑處理后草莓葉片Pn、Ci、Gs、Tr的變化

2.4 不同處理對(duì)草莓產(chǎn)量的影響

對(duì)草莓產(chǎn)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如圖4所示，殺菌劑都能不同程度提高草莓的產(chǎn)量，但都沒有達(dá)到顯著水平。氯溴異氰尿酸的效果最好，產(chǎn)果量比對(duì)照提高了6.01%，其次是代森聯(lián)(5.47%)。如圖5所示，不同誘導(dǎo)劑處理的草莓累計(jì)產(chǎn)量都比對(duì)照有所提高，保康靈1號(hào)比對(duì)照提高了16.6%，仟禾福提高了13.1%。

圖2 不同殺菌劑處理后的灰霉病相對(duì)防效

圖3 不同誘導(dǎo)劑處理后的灰霉病相對(duì)防效

3 討論

本研究首次嘗試使用不同的殺菌劑清潔草莓植株和大棚環(huán)境，結(jié)果發(fā)現(xiàn)70%代森聯(lián)有防治草莓灰霉病和提高草莓產(chǎn)量的綜合效果。而誘導(dǎo)劑?？奠`1號(hào)可以提高產(chǎn)量16.6%，平均灰霉病相對(duì)防效36.1%，防效是仟禾福的3.4倍。

圖4 不同殺菌劑處理后的草莓產(chǎn)量

圖5 不同誘導(dǎo)劑處理后的草莓產(chǎn)量

已有研究表明，單獨(dú)使用保康靈1號(hào)對(duì)玉米[9]、水稻[10]、葡萄[11]等作物有較好的防病效果且具有促生長(zhǎng)作用。而本文在使用殺菌劑代森聯(lián)后使用誘導(dǎo)劑保康靈1號(hào)，灰霉病病情指數(shù)比單獨(dú)使用誘導(dǎo)劑降低了9.9%，因此表明施用殺菌劑可以提高后續(xù)誘導(dǎo)劑的使用效果。本研究中的仟禾福是以氨基酸為主料、螯合微量元素及茶皂素等復(fù)配而成的水溶性肥料，雖然也可以增加草莓[12]、黃瓜[13]和茶葉[14]的產(chǎn)量，但在本研究中的增產(chǎn)和抗灰霉病效果沒有誘導(dǎo)劑?？奠`1號(hào)好。本研究結(jié)果顯示，殺菌劑70%代森聯(lián)與誘導(dǎo)劑?？奠`1號(hào)的聯(lián)合使用，明顯提高了草莓的產(chǎn)量和灰霉病抗性，這可為化學(xué)農(nóng)藥減量提供依據(jù)。