曹碧珍

（莆田市城廂區(qū)霞林街道辦事處，福建莆田 351100）

康乃馨又名香石竹、麝香石竹等，其瓶苗微型花攜帶輕巧方便又經(jīng)濟實惠。隨著社會的發(fā)展，人們開始重視綠色環(huán)保，用花卉美化人居環(huán)境成為新時尚?？的塑坝性S多變種與雜交種，在溫室里培育可以連續(xù)不斷開花?？的塑半x體快速繁殖就是利用植物細胞的全能性，取植物的部分組織，在人為控制的無菌環(huán)境條件下，應(yīng)用培養(yǎng)基培育出一株完整的植株。通過研究瓶苗微型花卉不僅豐富了瓶苗花卉品種，而且大大縮短了植株從幼苗到開花的時間，根據(jù)需要隨時誘導(dǎo)開花，甚至可以使開花時間不再受季節(jié)限制，既節(jié)約種植面積，又降低栽培設(shè)施費用[1-3]。瓶苗微型花卉為花卉產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供新的方向，滿足了市場對鮮花的需求，也給人們帶來了更大的經(jīng)濟效益。因此，研究瓶內(nèi)開花技術(shù)，總結(jié)花芽的分化規(guī)律，掌握開花的調(diào)控機理具有非常重要的意義。目前，瓶苗主要是被用作母苗應(yīng)用于科學(xué)研究，并推廣供觀賞?；诖?，探討康乃馨快速繁殖及微型化技術(shù)，為花卉快速繁殖及工廠生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 培育

1.1 實驗材料、儀器 實驗材料為質(zhì)量優(yōu)良的康乃馨種子,實驗試劑包括75%酒精、0.12%的升汞、萘乙酸（NAA）、多效唑（PP333）、赤霉素（GA）、細胞分裂素（6-BA）、蒸餾水、蔗糖、瓊脂等。實驗儀器包括試管、量筒、燒杯、玻璃棒、玻璃瓶、移液管、剪刀、鑷子、酒精燈、pH試紙、標簽紙、電爐、METTLERPM200電子天平、高壓蒸氣滅菌鍋、超凈工作臺、培養(yǎng)架等。

1.2 實驗方法 （1）比對種子滅菌時間對康乃馨萌發(fā)的效果。在無菌的條件下將康乃馨種子在75%的酒精中浸泡10 s，后用無菌水清洗3～4次，然后用0.12%的升汞對康乃馨進行滅菌，各組滅菌時間分別為8、9、10、11、12 min。滅菌完用無菌水反復(fù)洗5～6次，后用無菌濾紙吸干水分，再接種到基本MS培養(yǎng)基上。每個滅菌時間處理接種5瓶，每瓶8粒種子，作標記置于培養(yǎng)室中，溫度控制為（26±1)℃，光照時間為13 h/d，光照強度控制在2 000 Lx條件下培養(yǎng)。一個月后統(tǒng)計每組的污染率及萌發(fā)率，分析康乃馨種子最佳滅菌時間。

（2）濃度不同的多效唑（PP333）對康乃馨瓶苗壯苗矮化培養(yǎng)的影響。把1.2 cm無菌康乃馨莖段接種到含有0.25、0.50、0.75、1.00、1.25 mg/L多效唑PP333的MS培養(yǎng)基上，同樣在溫度為(26±1)℃，光照時間為13 h/d，光照強度為2 000 Lx的培養(yǎng)室里培養(yǎng)，觀察瓶苗生長狀況。

（3）濃度不同的細胞分裂素（6-BA）、赤霉素（GA）和萘乙酸（NAA）對康乃馨增殖的影響。種子萌發(fā)約3 cm長時，把無菌康乃馨瓶苗切成1～2 cm莖段，且每個莖段留一個葉片，接種到含有不同濃度的細胞分裂素6-BA、植物生長激素NAA和赤霉素GA的MS培養(yǎng)基上，做一個三因素四水平的正交試驗。每瓶培養(yǎng)基接種5個莖段，然后置于溫度為(26±1)℃，光照時間13 h/d，光照強度為2 000 Lx的培養(yǎng)室里培養(yǎng)，30 d后觀察芽苗生長情況及其增殖系數(shù)。

（4）不同基本培養(yǎng)基對康乃馨瓶苗生根的影響。分別以MS、1/2MS、1/3MS以及1/4MS（MS培養(yǎng)基是最常用的培養(yǎng)基，成分是在配制1 L培養(yǎng)基時加硝酸銨1.65%、硝酸鉀1.6 g、氯化鈣0.44 g、硫酸鎂0.37 g、磷酸二氫鉀0.17 g、碘化鉀0.83 mg、硼酸5.2 mg、硫酸錳22.3 mg、硫酸鋅3.6 mg、鉬酸鈉0.25 mg、硫酸銅0.025 mg、氯化鈷0.025 mg、硫酸鐵27.8 mg、蔗糖30 g以及瓊脂7 g）作為康乃馨不同的生根培養(yǎng)基，在無菌條件下，每個處理組4瓶且每瓶接種5個，在(26±1)℃下光照時間13 h/d光照強度為2 000 Lx的溫室中進行培養(yǎng)，觀察康乃馨的生根情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 滅菌時間對康乃馨種子萌發(fā)的影響 本試驗使用0.12%升汞對康乃馨種子進行滅菌，安排不同滅菌時間進行比較，接種15 d后統(tǒng)計種子萌發(fā)與污染情況，見表1。從表1可以看出，滅菌效果受滅菌時間影響很大，康乃馨種子的最佳滅菌時間為10 min，種子的未染菌萌發(fā)率為91.4%。

表1 滅菌消毒時間對康乃馨種子萌發(fā)的影響

2.2 不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑對康乃馨增殖的影響 不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑對康乃馨增殖的影響結(jié)果通過增殖實驗正交法分析極差R得出影響效果（如表2）：細胞分裂素6-BA＞植物生長激素NAA＞赤霉素GA；再通過細胞分裂素6-BA、植物生長激素NAA和赤霉素GA對康乃馨增殖的影響進行實驗，通過比較平均值k1、k2、k3、k4得出（表3），實驗得出的結(jié)論是細胞分裂素6-BA的最適增殖濃度為1.00 mg/L，植物生長激素NAA的最適增殖濃度為0.75 mg/L，赤霉素GA的最適增殖濃度為0.15 mg/L。

表2 增殖實驗正交法因素水平表

表3 6-BA、NAA和GA對康乃馨增殖的影響

表4 不同濃度PP333對康乃馨壯苗的影響

2.3 PP333濃度對康乃馨瓶苗壯苗矮化培養(yǎng)的影響 PP333是三唑類植物生長延緩劑，能延緩植物的生長發(fā)育，提高植物抗逆性，培育結(jié)果如表4。PP333濃度不同，對康乃馨的生長影響明顯，低濃度影響不大，高濃度影響過大，植株長得過矮。PP333最適濃度為0.75 mg/L，此條件下植株矮壯健康，長勢良好。因此，康乃馨最佳壯苗矮化培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.00 mg/L+NAA 0.75 mg/L+PP333 0.75 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂9 g/L。

2.4 基本培養(yǎng)基對康乃馨瓶苗生根的影響 用1/2MS、1/3MS、1/4MS作康乃馨的生根培養(yǎng)基，培育結(jié)果如表5。從表5可知，培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分的含量對康乃馨生根影響不同，用1/2MS培養(yǎng)基康乃馨的生根率最高，說明在一定范圍內(nèi)減少培養(yǎng)基中大量元素含量對康乃馨瓶苗的生根有促進作用。因此，最佳的生根培養(yǎng)基配方是1/2MS+NAA 0.75 mg/L+GA 0.15 mg/L+PP333 0.75 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂9 g/L。

表5 不同濃度基本MS培養(yǎng)基下康乃馨瓶苗生根率

3 討論與結(jié)論

3.1 討論 康乃馨的最佳滅菌時間為10 min，未染菌萌發(fā)率為91.4%?？的塑暗脑鲋吃囼炦^程中用到了三種植物生長調(diào)節(jié)劑，即NAA、6-BA和GA。NAA的作用是多方面的，包括刺激生長、促進生根、疏花疏果、防止落花落果、誘導(dǎo)開花、抑制抽芽、促進早熟和增產(chǎn)等。試驗得出，培養(yǎng)康乃馨的最適NAA濃度為0.75 mg/L；6-BA作為一種常用的植物生長調(diào)節(jié)劑，能夠促進細胞分裂、促進種子發(fā)芽、抑制或促進莖葉的伸長生長、抑制或促進根的生長、促進側(cè)芽生長、促進花芽形成和開花等，對康乃馨增殖來說最適的6-BA濃度是1.0 mg/L。GA可刺激葉和芽的生長，解除休眠，促進開花結(jié)果，還有增產(chǎn)作用，試驗得出，0.15 mg/L赤霉素對康乃馨的增殖效果最好。

多效唑是一種植物生長調(diào)節(jié)劑，具有延緩植物生長，抑制莖稈伸長，促進植物分蘗、矮化，增加植物抗逆性能，縮短節(jié)間、提高產(chǎn)量等效果。本試驗中，多效唑濃度太低（0.25 mg/L）時，對康乃馨生長影響不明顯，植株長得細高，沒有達到壯苗的作用。當濃度太高時，即濃度為1.25 mg/L時，植株過于矮壯。所以多效唑濃度要適宜，本試驗中康乃馨的最適多效唑濃度為0.75 mg/L。

實驗表明，康乃馨的最佳生根基礎(chǔ)培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基，因為植物在生根過程中并不需要太多的營養(yǎng)。

康乃馨瓶苗離體快繁和微型化技術(shù)可以縮短植株從幼苗到開花的時間，使得開花時間不再受季節(jié)限制，也減少了種植面積?；ɑ芪⑿突罄诜N植，且對降低栽培設(shè)施費用的投資也同樣起到了十分重要的作用因此，康乃馨瓶苗離體快繁和微型化技術(shù)有助于推動花卉產(chǎn)業(yè)發(fā)展。

3.2 結(jié)論 通過康乃馨瓶苗離體快繁和微型化技術(shù)試驗得出結(jié)論：用0.12%升汞消毒的康乃馨外植體的最適滅菌時間為10 min，此時種子的未染菌萌發(fā)率為91.4%，污染率又極低；康乃馨的最適增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.75 mg/L+GA 0.15 mg/L+糖30 g/L+瓊 脂9 g/L；康乃馨最適壯苗矮化培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.75 mg/L+PP333 0.75 mg/L+糖30 g/L+瓊 脂9 g/L；康乃馨最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.75 mg/L+GA 0.15 mg/L+PP333 0.75 mg/L+糖30 g/L+瓊脂9 g/L。

研究康乃馨瓶苗快繁和微型化技術(shù)，有助于帶動瓶苗花卉產(chǎn)業(yè)多元化發(fā)展?？的塑鞍瘔衙缟L轉(zhuǎn)入生殖生長機理還需要繼續(xù)研究，將該研究成果推廣應(yīng)用將創(chuàng)造出更多的經(jīng)濟效益。