趙耀光，王留

水蛭超微粉調(diào)節(jié)兔肝臟脂代謝相關(guān)酶活性研究

趙耀光，王留

（商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 商丘 476100）

應(yīng)用試劑盒檢測(cè)添加0.05 %、0.10 %、0.15 % 水蛭超微粉的高脂飼料喂養(yǎng)兔血液、肝臟組織上清液乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、羥甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMGCR）、膽固醇7 α羥化酶（CYP7A1）的活性，研究水蛭超微粉對(duì)兔肝臟脂代謝相關(guān)酶活性的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明，0.15 % 水蛭超微粉能夠顯著降低高脂飼料喂養(yǎng)兔ACC、FAS、HMGCR活性，顯著提高（P<0.05）高脂飼料喂養(yǎng)兔CYP7A1活性。

水蛭，中藥超微粉；高脂飼糧；脂代謝；酶活性

脂代謝是指脂類(lèi)在生物有機(jī)體內(nèi)的消化、吸收、遠(yuǎn)轉(zhuǎn)、分解、轉(zhuǎn)化、排泄等一系列生物轉(zhuǎn)化過(guò)程，是機(jī)體的基本代謝活動(dòng)之一，對(duì)機(jī)體血脂平衡和體脂沉積有重要的調(diào)節(jié)作用。脂代謝過(guò)程在脂代謝相關(guān)酶的作用下進(jìn)行，脂代謝相關(guān)酶活性增強(qiáng)或降低會(huì)造成脂代謝紊亂，引起機(jī)體血脂的異常和體脂的過(guò)度沉積，引發(fā)代謝障礙綜合性疾病，如內(nèi)分泌失調(diào)、動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病、肝功能障礙、神經(jīng)功能紊亂等。臨床應(yīng)用活血化瘀類(lèi)中藥調(diào)節(jié)脂代謝是治療脂代謝障礙綜合性疾病的主要方法之一。水蛭超微粉是中藥水蛭飲片經(jīng)超微粉碎處理加工而成的一種粉狀中藥散劑，具有活血化瘀、舒肝通經(jīng)、消腫止痛等功效。試驗(yàn)研究表明，水蛭超微粉能夠調(diào)節(jié)高脂飲食誘導(dǎo)的兔血脂水平，提高機(jī)體的抗氧化功能，顯著改善高脂飲食引起的血液流變學(xué)變化，恢復(fù)血液的正常流動(dòng)性[1-2]。本研究以大耳白兔為試驗(yàn)動(dòng)物，研究在高脂配方日糧飼喂條件下，添加不同劑量的水蛭超微粉對(duì)脂代謝相關(guān)酶活性的影響，探索水蛭超微粉降血脂和調(diào)節(jié)脂代謝作用的機(jī)理，為水蛭超微粉新型制劑的開(kāi)發(fā)與利用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組與處理

50只3月齡健康大耳白兔在動(dòng)物飼養(yǎng)室適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，隨機(jī)分成5組，每組10只。正常對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，高脂對(duì)照組飼喂高脂配方日糧，水蛭超微粉低、中、高劑量組分別飼喂添加0.05 %、0.10 %、0.15 % 水蛭超微粉的高脂配方日糧。試驗(yàn)期40 d，試驗(yàn)期內(nèi)每天觀(guān)察兔的飲食情況和發(fā)病情況。

1.2 水蛭超微粉的制備

中藥水蛭超微粉由課題組自制，制備方法詳見(jiàn)參考文獻(xiàn)[1]。

1.3 樣本的采集及處理

1.3.1 血清樣品制備 試驗(yàn)期結(jié)束后，每組隨機(jī)抽取試驗(yàn)兔5只，心臟采血分離血清，-20 ℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 肝組織上清液制備 試驗(yàn)兔采血后，頸椎脫位致死，迅速打開(kāi)腹腔切取肝臟組織0.5 g，用冷的生理鹽水沖洗肝臟組織并用濾紙吸干表面殘留液體，加入預(yù)冷的滅菌生理鹽水5 ml，冰浴中勻漿處理，勻漿液以2000 r/min冷凍離心10 min，取上清液-20 ℃ 凍存。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)及方法

血清和肝臟組上清液乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、羥甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMGCR）、膽固醇7 α羥化酶（CYP7A1）活性檢測(cè)采用試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程公司。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 水蛭超微粉對(duì)兔血清脂代謝相關(guān)酶活性的影響

由表1可知：高脂對(duì)照組兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性與正常對(duì)照組相比均差異顯著（P＜0.05），HMGCR酶活性與正常對(duì)照組相比均差異不顯著（P＞0.05）。0.05 % 劑量組兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性與正常對(duì)照組相比均差異顯著（P＜0.05），與高脂對(duì)照組相比均差異不顯著（P＞0.05）；HMGCR酶活性與正常對(duì)照組、高脂對(duì)照組相比均差異不顯著（P＞0.05）。0.10 % 劑量組兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性與正常對(duì)照組相比均差異顯著（P＜0.05），與高脂對(duì)照組相比均差異不顯著（P＞0.05）；HMGCR酶活性與正常對(duì)照組、高脂對(duì)照組相比均差異顯著（P＜0.05）。0.15 % 劑量組兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性與正常對(duì)照組相比均差異不顯著（P＞0.05），與高脂對(duì)照組相比均差異顯著（P＜0.05）；HMGCR酶活性與正常對(duì)照組、高脂對(duì)照組相比均差異顯著（P＜0.05）。

2.2 水蛭超微粉對(duì)兔肝臟脂代謝相關(guān)酶活性的影響

由表2可知：高脂對(duì)照組兔血清ACC、FAS、HMGCR、CYP7A1酶活性與正常對(duì)照組相比均差異顯著（P＜0.05）。0.05%劑量組兔血清ACC、FAS、HMGCR、CYP7A1酶活性與正常對(duì)照組相比均差異顯著（P＜0.05），與高脂對(duì)照組相比均差異不顯著（P＞0.05）。0.10 % 劑量組兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性與正常對(duì)照組相比均差異顯著（P＜0.05），與高脂對(duì)照組相比均差異不顯著（P＞0.05）；HMGCR酶活性與正常對(duì)照組比均差異不顯著（P＞0.05），與高脂對(duì)照組相比均差異顯著（P＜0.05）。0.15 % 劑量組兔血清ACC、FAS、HMGCR、CYP7A1酶活性與正常對(duì)照組相比均差異不顯著（P＞0.05），與高脂對(duì)照組相比均差異顯著（P＜0.05）。

表1 兔血清脂代謝相關(guān)酶活性檢測(cè)結(jié)果

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)小寫(xiě)字母不同表示差異顯著（P＜0.05）；字母相同表示差異不顯著（P＞0.05）。下表同

表2 兔肝臟脂代謝相關(guān)酶活性檢測(cè)結(jié)果

3 討論與結(jié)論

3.1 水蛭超微粉對(duì)兔ACC酶活性的影響

乙酰輔酶A羧化酶（ACC）催化乙酰輔酶A產(chǎn)生丙二酸單酰輔酶A，丙二酸單酰輔酶A在脂肪酸合成酶的作用下合成脂肪酸[3]。乙酰輔酶A羧化酶活性增強(qiáng)時(shí)會(huì)引起動(dòng)物血液和肝臟內(nèi)脂肪合成量增多，增加高脂血癥和脂肪肝的發(fā)病概率。本試驗(yàn)顯示，在飼糧中添加0.15 % 劑量的水蛭超微粉能夠顯著降低高脂飲食兔血清和肝臟內(nèi)ACC活性。

3.2 水蛭超微粉對(duì)兔FAS酶活性的影響

脂肪酸合成酶（FAS）是催化乙酰輔酶A和丙二酸單酰輔酶A生成長(zhǎng)鏈脂肪酸，長(zhǎng)鏈脂肪酸與甘油發(fā)生酯化反應(yīng)生成甘油三酯，脂肪酸合成酶的活性決定了甘油三酯的合成速度。甘油三酯是動(dòng)物血脂和體脂的主要成分，當(dāng)脂肪酸合成酶活性增強(qiáng)時(shí)，動(dòng)物機(jī)體內(nèi)甘油三酯合成量增加，導(dǎo)致動(dòng)物血脂含量升高引發(fā)高脂血癥，或體脂過(guò)度沉積引發(fā)肥胖[3]。劉作華等[4]研究表明，提高豬日糧的能量水平能夠顯著提高豬肌肉組織、肝臟組織、脂肪組織內(nèi)脂肪酸合成酶的活性，使動(dòng)物體內(nèi)脂肪的合成能力提高，體脂沉積增加。本試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，在飼糧中添加0.15 % 劑量的水蛭超微粉能夠顯著降低高脂飲食兔血清和肝臟內(nèi)FAS活性。

3.3 水蛭超微粉對(duì)兔HMGCR酶活性的影響

羥甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMGCR）催化肝臟膽固醇的合成，調(diào)節(jié)HMGCR的活性可以維持機(jī)體血清膽固醇代謝的平衡。飼料中膽固醇和脂肪的含量可以影響HMGCR活性[5]梁婧婧等[6]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加甘薯糖蛋白能夠競(jìng)爭(zhēng)性抑制羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶活性，減少膽固醇的生成。陳詠然等[7]試驗(yàn)表明，添加50 mg/kg染料木黃酮可顯著降低高能日糧喂養(yǎng)肉雞肝臟羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶的活性。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.1 % ~ 0.15 % 水蛭超微粉能夠顯著降低高脂飲食兔血液和肝臟HMGCR活性。

3.4 水蛭超微粉對(duì)兔CYP7A1酶活性的影響

膽固醇7 α羥化酶（CYP7A1）調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇和膽汁酸的代謝，增強(qiáng)CYP7A1活性可以促進(jìn)肝臟內(nèi)膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸，促進(jìn)體內(nèi)膽固醇的排出，所以調(diào)節(jié)CYP7A1活性是調(diào)節(jié)機(jī)體膽固醇代謝的重要途徑[8]。李瑞[5]研究顯示，乳桿菌能夠顯著提高育肥豬肝臟中CYP7A1活性。王先科[9]試驗(yàn)結(jié)果表明，每天給高脂飼喂的SD大鼠灌服苜蓿皂苷150~240 mg·kg-1體重，能夠極顯著提高大鼠肝臟CYP7A1活性。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，0.15 % 水蛭超微粉能夠顯著增強(qiáng)高脂飲食兔血液和肝臟CYP7A1活性。

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S853.72

A

1007-1733（2021）01-0017-03

河南省高等學(xué)校重點(diǎn)科研項(xiàng)目（20B230008）

（2020–10–05）