李翔宇 吳琳 竇勇 黃瑩 翟勝利 周文禮

摘??? 要：為研究飼料中添加雨生紅球藻對(duì)菲律賓蛤仔生長(zhǎng)特性的影響，根據(jù)餌料中雨生紅球藻與螺旋藻的比例設(shè)置5個(gè)梯度處理，分別為1∶9，3∶7，5∶5，7∶3，9∶1，投喂菲律賓蛤仔兩周，監(jiān)測(cè)各處理菲律賓蛤仔的肥滿(mǎn)度及肝臟中多酚氧化酶（PPO）活性。結(jié)果表明，雨生紅球藻與螺旋藻為5∶5的處理菲律賓蛤仔肥滿(mǎn)度顯著高于其他處理（P<0.05），而9∶1的處理顯著低于其他處理（P< 0.05）;雨生紅球藻與螺旋藻為5∶5的處理菲律賓蛤仔PPO活性最高，其次是7：3的處理，二者顯著高于1∶9的處理（P<0.05）。綜合而言，菲律賓蛤仔的餌料中添加適量雨生紅球藻粉有助于其生長(zhǎng)及免疫性能提高，餌料中其與螺旋藻的比例5∶5為宜。

關(guān)鍵詞：菲律賓蛤仔;雨生紅球藻;肥滿(mǎn)度;多酚氧化酶

中圖分類(lèi)號(hào)：S963.22?????? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A????? DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2021.12.005

Effects of Haematococcus Pluvialis on Plumpness and Polyphenol Oxidase of Philippine Clam

LI Xiangyu1， WU Lin1， DOU Yong1， HUANG Ying1， ZHAI Shengli1， ZHOU Wenli1

（1.Tianjin Key Laboratory for Aquaculture Ecdogy and Cultivation Fisheries College，Tianjin? Agricultural University， Tianjin 300384， China;2.Tianjin Modern Chenhui Technology Group，Tianjin 301802，China）

Abstract： In order to study the effects of Haematococcus pluvialis on the growth characteristics of Philippine clam， the experiment set 5 gradient treatments basing on the proportion of Haematococcus pluvialis and Spirulina in the diet， which included 1∶9， 3∶7， 5∶5， 7∶3， and 9∶1. The Philippine clam was fed with the different treatment diets for two weeks， the plumpness and polyphenol oxidase （PPO） activity in liver of Philippine clam were monitored. The results showed that the clam's plumpness was significant higher than the other treatments when the ratio of Haematococcus pluvialis to Spirulina was 5∶5（P<0.05）， and the Philippine clam's plumpness was significant lower than the other treatments when the ratio of Haematococcus pluvialis to Spirulina was 9∶1 （P<0.05）. The PPO activity of Philippine clam were highest when the ratio of Haematococcus pluvialis to Spirulina was 5∶5， followed by the treatment of 7∶3， which the two treatments were significantly higher than the other treatment（P<0.05）.? In conclusion， adding appropriate amount of Haematococcus pluvialis in the diet of Philippine clam could approve the growth and specific immunity of Philippine clam， which the optimum ratio of Haematococcus pluvialis to Spirulina in the diet should be 5∶5.

Key words： Ruditapes philippinarum;Haematococcus pluviali;Plumpness;polyphenol oxidase

收稿日期：2021-08-04

基金項(xiàng)目：天津市企業(yè)科技特派員項(xiàng)目（20YDTPJC01470）; 天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金項(xiàng)目（TJAE201805）;自然資源部海洋生態(tài)動(dòng)力學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金項(xiàng)目（MED202013）;天津市寶坻區(qū)農(nóng)業(yè)科技計(jì)劃重大項(xiàng)目（201810）;天津市科技局生態(tài)環(huán)境治理重大專(zhuān)項(xiàng)（18ZXSZSF00080）; 天津市農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化與推廣項(xiàng)目（202001010）

作者簡(jiǎn)介：李翔宇（1996—），男，山西大同人，在讀碩士生，主要從事生物餌料開(kāi)發(fā)與應(yīng)用方面研究。

通訊作者簡(jiǎn)介：竇勇（1985—），男，山東淄博人，講師，博士，主要從事微藻生理生態(tài)方面研究。

菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）屬于軟體動(dòng)物門(mén)雙殼綱，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，肉質(zhì)鮮美，含有許多人體必需的微量元素[1]。菲律賓蛤仔作為我國(guó)主要的海洋經(jīng)濟(jì)貝類(lèi)之一，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，生長(zhǎng)迅速，繁殖周期短，適應(yīng)性較強(qiáng)，適合人工高密度養(yǎng)殖[2]。

我國(guó)是世界第一漁業(yè)大國(guó)，由于水產(chǎn)養(yǎng)殖的集約化發(fā)展，水生動(dòng)物疾病多發(fā)。病害發(fā)作已成為制約菲律賓蛤仔產(chǎn)業(yè)的重要因素[3]。目前主要通過(guò)在水產(chǎn)動(dòng)物的飼料中直接添加可食用的添加劑，以此來(lái)改善水產(chǎn)動(dòng)物發(fā)育周期，提高抗病能力。蝦青素（Astaxanthin）作為一種生物活性物質(zhì)和天然色素，近年來(lái)受到了極大的關(guān)注，其最大的市場(chǎng)是作為飼料添加劑，應(yīng)用到魚(yú)蝦蟹等水生動(dòng)物的飼料中[4]。蝦青素著色效果良好，可以進(jìn)入生物體并貯存在生物體組織中，使得某些動(dòng)物的肌肉組織和皮膚呈現(xiàn)出光鮮亮麗的顏色（如紅鱔魚(yú)、錦鯉等），因此天然蝦青素被我國(guó)農(nóng)業(yè)部指定為水產(chǎn)動(dòng)物的唯一著色劑[5]。同時(shí)，蝦青素在預(yù)防和治療魚(yú)類(lèi)，蝦和蟹等的疾病中也起著重要作用，一方面可以提高動(dòng)物的免疫力和動(dòng)物的存活率，對(duì)動(dòng)物良性的生長(zhǎng)、繁殖與存活具有重要的作用，另外，相關(guān)研究表明在飼料中添加不同劑量的蝦青素可以明顯提高動(dòng)物細(xì)胞中抗氧化酶如過(guò)氧化物酶和超氧化物歧化酶的生物活性，起到較好的抗氧化作用[6]。

雨生紅球藻（Haematococcus pluvialis）是一種富含蝦青素的單細(xì)胞藻，是大自然中天然蝦青素含量最高的生物，被公認(rèn)為獲取天然蝦青素最佳生物來(lái)源，可作為抗氧化劑和著色劑食用，亦可作為蛋白質(zhì)替代品，對(duì)水生動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育有積極的影響。郭春雨[7]研究表明，飼料中添加蝦青素可以提高河蟹生長(zhǎng)存活率，抗氧化能力和免疫性能，促進(jìn)卵黃蛋白積累;也有研究表明，在飼料中添加少量的雨生紅球藻可以改善虹鱒魚(yú)的生長(zhǎng)指數(shù)和免疫系統(tǒng)[8]。張寶龍等[9]研究中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加一定量的雨生紅球藻可以顯著促進(jìn)紅草金魚(yú)的生長(zhǎng)和免疫;還有研究結(jié)果表明，雨生紅球藻還可以改善七彩神仙魚(yú)的生長(zhǎng)率和增重率[10]。同時(shí)，在龍曉文等[11]研究中，飼料中添加雨生紅球藻粉可以提高中華絨螯蟹的性腺粗蛋白和肌肉總多不飽和脂肪酸以及頭胸甲中類(lèi)胡蘿卜素的含量。由此可見(jiàn)，在飼料中添加雨生紅球藻對(duì)水生動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育和免疫中起重要作用。

本試驗(yàn)以菲律賓蛤仔為研究對(duì)象，研究餌料中添加不同量雨生紅球藻對(duì)菲律賓蛤仔的生長(zhǎng)特性、肥滿(mǎn)度和肝臟中抗氧化酶PPO活性的影響，以及添加適量的雨生紅球藻對(duì)菲律賓蛤仔的肥滿(mǎn)度和多酚氧化酶的影響，旨在更加精確地探討添加雨生紅球藻的最適劑量，為菲律賓蛤仔的繁育和養(yǎng)殖提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料與設(shè)備

1.1.1 試驗(yàn)試劑 多酚氧化酶（PPO）試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.1.2 試驗(yàn)蛤仔及養(yǎng)殖條件 菲律賓蛤仔（R. philippinarum）選自天津市大神堂南部淺海區(qū)域，挑選無(wú)破損的個(gè)體，平均殼長(zhǎng)（3.7±0.15） cm。用海水沖洗干凈，在實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖槽（490 mm×320 mm×145 mm）中暫養(yǎng)24 h。飼養(yǎng)期間，鹽度2.5%，溫度（20±0.5） ℃，養(yǎng)殖期間連續(xù)曝氣，光照周期為12 h/12 h，期間換水1次，適應(yīng)后進(jìn)行分組試驗(yàn)。

1.1.3 試驗(yàn)餌料 雨生紅球藻粉蝦青素含量為5%。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 餌料的制備 按照雨生紅球藻：螺旋藻=1∶9，3∶7，5∶5，7∶3，9∶1的比例進(jìn)行分組混合，對(duì)照組只投喂螺旋藻粉，每次投喂總量為0.03 g。

1.2.2 分組養(yǎng)殖 選出780粒蛤仔進(jìn)行分組，每個(gè)養(yǎng)殖水槽中放養(yǎng)130粒。每天換水兩次（9：00和21：00），投喂餌料2次（8：00和20：00）。每隔3 d測(cè)定一次菲律賓蛤仔的殼長(zhǎng)、殼寬、殼高、軟體濕質(zhì)量和組織中的PPO活力值。

1.3 測(cè)定指標(biāo)

1.3.1 生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定 用游標(biāo)卡尺（精確到0.01 mm）測(cè)量菲律賓蛤仔的殼長(zhǎng)、殼寬、殼高等生態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)，然后用電子天平（精確到0.1 g）稱(chēng)質(zhì)量。

1.3.2 肥滿(mǎn)度的測(cè)定 取其中25個(gè)進(jìn)行生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)量，將表面游離的水分用吸水紙吸干，用剪刀剪開(kāi)貝殼，用鑷子將軟體部取出，然后用吸水紙吸干表面游離水分并稱(chēng)質(zhì)量，置于80 ℃的恒溫干燥箱中烘干12 h以上至恒質(zhì)量，稱(chēng)質(zhì)量。

肥滿(mǎn)度[12]=[WFM/（L×W×H）]×105

1.3.3 PPO活性的測(cè)定 取3粒蛤仔的肝臟，稱(chēng)量，按照質(zhì)量（g）與體積（mL）比為1∶5加入提取液，冰浴勻漿，轉(zhuǎn)速8 000 r·min-1，離心10 min，依照試劑盒說(shuō)明測(cè)定PPO活性。

PPO活力（U·g-1鮮質(zhì)量）=×××÷反應(yīng)時(shí)間（min）

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用SPSS 25.0進(jìn)行單因素方差分析，Duncan法進(jìn)行多重比較，顯著性水平設(shè)為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 肥滿(mǎn)度

由圖1可知，隨著養(yǎng)殖天數(shù)增加，雨生紅球藻與螺旋藻比5∶5處理菲律賓哈仔肥滿(mǎn)度呈先增加后降低的趨勢(shì)且4～13 d肥滿(mǎn)度均高于1 d，1∶9處理肥滿(mǎn)度呈升-降-升的趨勢(shì)，其中4，13 d肥滿(mǎn)度高于1 d，3∶7處理肥滿(mǎn)度呈先略有下降后持續(xù)增加的趨勢(shì)，其中7～13 d肥滿(mǎn)度均高于1 d，7∶3處理肥滿(mǎn)度呈降-升-降的趨勢(shì)，其中7 d肥滿(mǎn)度高于1 d，9∶1處理肥滿(mǎn)度呈持續(xù)下降的趨勢(shì)，對(duì)照組肥滿(mǎn)度呈先下降后上升的趨勢(shì)，其中13 d肥滿(mǎn)度高于1 d。將圖1中5次取樣肥滿(mǎn)度作為重復(fù)，對(duì)各處理數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果（表1）表明，雨生紅球藻與螺旋藻比例為9∶1的菲律賓蛤仔的肥滿(mǎn)度顯著小于其它組別，而雨生紅球藻與螺旋藻比例為5∶5的肥滿(mǎn)度顯著高于其他組。由此可見(jiàn)，適宜雨生紅球藻與螺旋藻配比的餌料有助于菲律賓哈仔肥滿(mǎn)度的增加，以5∶5效果最佳。2.2 PPO活力

由圖2可知，隨著養(yǎng)殖天數(shù)的增加，雨生紅球藻與螺旋藻比為5∶5，7∶3，9∶1處理的菲律賓蛤仔PPO活力均呈增加趨勢(shì)，對(duì)照和3：7處理PPO活力呈先升高后降低的趨勢(shì)且4～13 d PPO活力均高于1 d，1∶9處理PPO活力呈先降低后升高的趨勢(shì)。將圖2中5次取樣PPO活性作為重復(fù)，對(duì)各處理數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果（圖3）表明，雨生紅球藻與螺旋藻比為1∶9的菲律賓蛤仔PPO活力值最低，顯著低于雨生紅球藻與螺旋藻比為5∶5和7∶3的處理，后二者之間差異不顯著。由此可見(jiàn)，適宜雨生紅球藻與螺旋藻配比的餌料有助于提高于菲律賓蛤仔PPO活力，其中以5∶5和7∶3效果較好。

3 結(jié)論與討論

貝類(lèi)常用肥滿(mǎn)度（肥滿(mǎn)指數(shù)）來(lái)衡量肉質(zhì)的肥瘦程度，肥滿(mǎn)度也成為條件指數(shù)（Index of condition）[12]。相關(guān)研究[13-15]表明，肥滿(mǎn)度與養(yǎng)殖密度、繁殖期、水溫有著極為密切的關(guān)系。本研究中，在菲律賓蛤仔餌料中添加雨生紅球藻藻粉，對(duì)于菲律賓蛤仔肥滿(mǎn)度具有顯著影響，其添加量過(guò)高或過(guò)低均不利于菲律賓哈仔肥滿(mǎn)度的增加，其中以二者配比5∶5最佳。雨生紅球藻對(duì)菲律賓哈仔肥滿(mǎn)度的影響可能與其含有蝦青素有關(guān)。蝦青素作為飼料添加劑，對(duì)許多水生動(dòng)物的生長(zhǎng)有重要影響[16-18]。黃璞儀等[10]研究表明，蝦青素對(duì)彩色神仙魚(yú)的增重率和生長(zhǎng)率有顯著影響。

在一些哺乳動(dòng)物上的結(jié)果也表明，蝦青素在機(jī)體營(yíng)養(yǎng)和健康方面具有積極的調(diào)控作用[19-20]。蝦青素除了本身就具有抗氧化作用外，也對(duì)機(jī)體的抗氧化酶系統(tǒng)有重要的調(diào)節(jié)作用[21-23]，以提高水生動(dòng)物對(duì)環(huán)境脅迫的適應(yīng)性。龍曉文等[11]研究中發(fā)現(xiàn)飼料中添加蝦青素可顯著提高中華絨螯蟹的CAT活性。韓星星等[24]研究發(fā)現(xiàn)，大黃魚(yú)肝臟T-SOD活性隨著蝦青素添加水平的加大而顯著上升。多酚氧化酶（Polyphenol oxidaes）是大多數(shù)貝類(lèi)先天免疫防御系統(tǒng)中的重要酶[25]。有研究表明，無(wú)脊椎動(dòng)物中黑色素的含量與免疫能力有關(guān)[26-27]。雙殼軟體動(dòng)物中PPO可以被誘導(dǎo)，這種激活過(guò)程通常是由病原體模式識(shí)別受體（PRR）觸發(fā)的[28]。近年來(lái)，有報(bào)道顯示南美白對(duì)蝦的PPO活性[29-31]已被研究用于抑制南美白對(duì)蝦的變黑。也有研究表明，用弧菌刺激菲律賓蛤后，其血淋巴多酚氧化酶活性也顯著提高[32-33]。本研究中，在菲律賓蛤仔的餌料中適當(dāng)添加雨生紅球藻藻粉對(duì)菲律賓蛤仔的PPO活性有一定影響，其添加量過(guò)高或過(guò)低均不利于菲律賓蛤仔PPO活性的增加，其中當(dāng)雨生紅球藻與螺旋藻比為5∶5的菲律賓蛤仔PPO活力值最高，其次是7∶3處理。

綜合雨生紅球藻添加比例對(duì)菲律賓蛤仔肥滿(mǎn)度和PPO活性的影響，以餌料中雨生紅球藻與螺旋藻的比例為5∶5為宜，菲律賓蛤仔的肥滿(mǎn)度與PPO活性均可達(dá)到最高值。但考慮到本試驗(yàn)飼喂周期（2周）相對(duì)較短，未來(lái)可以進(jìn)一步加長(zhǎng)投喂時(shí)間，在現(xiàn)有的投喂基礎(chǔ)上，進(jìn)一步設(shè)計(jì)投喂梯度，以便更加精確地探討添加雨生紅球藻的最適劑量。

參考文獻(xiàn)：

[1] 徐津， 李連軍， 楊最素， 等. 菲律賓蛤仔提取物及生物活性的研究進(jìn)展[J]. 浙江海洋學(xué)院學(xué)報(bào)， 2013， 32（4）： 357-360.

[2] CHIESA S， MARZANO F N， MINERVINI G， et al. The invasive Manila clam Ruditapes philippinarum（Adams and Reeve， 1850） in Northern Adriatic Sea： Population genetics assessed by an integrated molecular approach[J]. Fisheries Research，2011，110（2）：259-267.

[3] 費(fèi)來(lái)華， 邵雁群. 櫛孔扇貝不同組織SOD， CAT和MPO活力的比較分析[J].海洋湖沼通報(bào)， 2008（3）： 128-132.

[4] 肖素榮， 李京東. 蝦青素的特性及應(yīng)用前景[J]. 中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)， 2011， 17（5）： 33-35.

[5] 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告：第318號(hào)[EB/OL]. （2003-12-09）[2021-08-02]. https：//www.doc88.com/p-9631902468703.html？r=1

[6] 陳峰， 姜悅. 微藻生物技術(shù)[M]. 北京： 中國(guó)輕工業(yè)出版社， 1999.

[7] 郭春雨. 蝦青素對(duì)中華絨螯蟹的影響及作用機(jī)理[D]. 保定： 河北大學(xué)， 2011.

[8] SHEIKHZADEH N， TAYEFI-NASRABADI H， OUSHANI A K， et al. Effects of Haematococcus pluvialis supplementation on antioxidant system and metabolism in rainbow trout （Oncorhynchus mykiss）[J]. Fish Physiology and Biochemistry， 2012， 38（2）： 413-419.

[9] 張寶龍， 曲木， 竇艷君， 等. 飼料中不同著色劑對(duì)紅草金魚(yú)生長(zhǎng)、體色及免疫力的影響[J]. 飼料研究， 2017（13）： 36-44.

[10] 黃璞袆， 賈銘宇， 劉濤， 等. 蝦青素對(duì)七彩神仙魚(yú)生長(zhǎng)和形體的影響[J]. 吉林農(nóng)業(yè)C版， 2011（3）： 93-94.

[11] 龍曉文， 趙磊， 麻楠， 等. 飼料中添加雨生紅球藻粉對(duì)中華絨螯蟹成體雄蟹生化組成的影響[J]. 動(dòng)物學(xué)雜志， 2018， 53（2）： 278-291.

[12] 張福綏， 何義朝， 劉祥生， 等. 膠州灣貽貝肥滿(mǎn)度的研究[M]//貝類(lèi)學(xué)論文集， 北京： 科學(xué)出版社， 1986： 80-88.

[13] 孫虎山， 王宜艷. 芝罘灣長(zhǎng)竹蟶肥滿(mǎn)度的研究[J]. 海洋湖沼通報(bào)， 1995， 16（3）： 63-68.

[14] 李永仁， 劉利華， 陳麗梅， 等. 天津海域菲律賓蛤仔肥滿(mǎn)規(guī)律研究[J]. 天津農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2015， 21（2）： 14-16， 39.

[15] 王宜艷， 孫虎山， 王為綱， 等. 養(yǎng)馬島紫彩血蛤肥滿(mǎn)度的研究[J]. 海洋通報(bào)， 1997， 16（6）： 27-30.

[16] PAN C H， CHIEN Y H， CHENG J H. Effects of light re-gime， algae in water， and dietary astaxanthin on pigmentation， growth， and survival of black tiger prawn Penaeus monodon post-larvae[J]. Zoological Studies， 2001， 40（4）： 371-382.

[17] MENASVETA P， WORAWATTANAMATEEKUL W， LATSCHA Y， et al. Correction of tiger prawn （Penaeus monodon Fabricus） coloration by astaxanthin[J]. Aquacultural Engineering， 1993， 12（4）： 203-213.

[18] LEE S H， MIN D B. Effects， quenching mechanisms， and kinetics of carotenoids in chlorophyll-sensitized photooxidation of soybean oil[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 1990， 38（8）： 1630-1634.

[19] VARADY K A， WANG Y， JONES P J. Role of policosanols in the prevention and treatment of cardiovascular disease[J]. Nutrition Reviews， 2003， 61（11）： 376-383.

[20] 王吉橋， 樊瑩瑩， 徐振祥， 等. 飼料中β胡蘿卜素和蝦青素添加量對(duì)仿刺參幼參生長(zhǎng)及抗氧化能力的影響[J]. 大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)， 2012， 27（3）： 215-220.

[21] BERTRAM J S， VINE A L. Cancer prevention by retinoids and carotenoids： independent action on a common target[J]. Biochimica et Biophysica Acta-Molecular Basis of Disease， 2005， 1740（2）： 170-178.

[22] KUMLU M， FLETCHER D J， FISHER C M. Larval pigmentation， survival and growth of Penaeus indicus fed the nematode Panagrellus redivivus enriched with astaxanthin and various lipids[J]. Aquaculture Nutrition， 1998， 4（3）： 193-200.

[23] SUGUMARAN M. Roles of the insect cuticle in host defence reactions[J]. New Directions in Invertebrates Immunology， 1996（84）： 355-374.

[24] 韓星星， 王秋榮， 葉坤， 等. 葉黃素和蝦青素對(duì)大黃魚(yú)體色及抗氧化能力的影響[J]. 漁業(yè)研究， 2018， 40（2）： 104-110.

[25] LUNA-ACOSTA A， BREITWIESER M， RENAULT T， et al. Recent findings on phenoloxidases in bivalves[J]. Marine Pollution Bulletin， 2017， 122（1/2）： 5-16.

[26] ROLFF J， SIVA-JOTHY MT. Invertebrate ecological immunology[J]. Science， 2003， 301（5632）： 472-475.

[27] S?DERH?LL K， CERENIUS L. Role of the prophenoloxidase-activating system in invertebrate immunity[J]. Current Opinion in Immunology， 1998， 10（1）： 23-28.

[28] ALADAILEH S， NAIR S V， RAFTOS D A. Induction of phenoloxidase and other immunological activities in Sydney rock oysters challenged with microbial pathogen-associate molecular patterns[J]. Fish & Shellfish Immunology， 2007， 23（6）： 1196-1208.

[29] 段秀霞， 施文正， 邱偉強(qiáng)， 等. 南美白對(duì)蝦多酚氧化酶的提取及其性質(zhì)研究[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2017， 44（3）： 136-142.

[30] 孫江萍， 趙莉， 俞文英， 等. 酸性電解水對(duì)南美白對(duì)蝦中多酚氧化酶活性的影響[J]. 食品科學(xué)， 2018， 39（9）： 7-12.

[31] 周雅琪， 黃佳茵， 陳美玉， 等. 亞?；撬釋?duì)南美白對(duì)蝦多酚氧化酶活性及酶構(gòu)象的影響[J]. 食品科學(xué)， 2021， 42（4）： 100-106.

[32] RICHARD G， LE BRIS C， GUéRARD F， et al. Immune responses of phenoloxidase and superoxide dismutase in the Manila clam Venerupis philippinarum challenged with Vibrio tapetis-part II： combined effect of temperature and two V. tapetis strains[J]. Fish & Shellfish Immunology， 2015， 44（1）： 79-87.

[33] LE BRIS C， RICHARD G， PAILLARD C， et al. Immune responses of phenoloxidase and superoxide dismutase in the Manila clam Venerupis philippinarum challenged with Vibrio tapetis-Part I： Spatio-temporal evolution of enzymes' activities post-infection[J]. Fish & Shellfish Immunology， 2015， 42（1）： 16-24.