蔣 榮，殷海霞，顧佳美

（蘇州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 蘇州 215101）

由于眼部炎癥，如：眼瞼炎、瞼腺炎、淚囊炎、結(jié)膜炎、瞼板腺炎及角膜炎等，主要源于眼部感染細(xì)菌，而鹽酸左氧氟沙星因其抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)，被臨床醫(yī)生常用于眼部的抗菌治療[1,2]，但鹽酸左氧氟沙星滴眼液開啟使用后，外界細(xì)菌易侵入藥液，影響其質(zhì)量，因此，防腐劑的添加成為重要質(zhì)量保證[3,4]。羥苯乙酯是滴眼液中常用防腐劑之一，對(duì)霉菌和酵母菌的抑制作用強(qiáng)，且對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、陰性菌均有一定清除作用[5,6]。由于滴眼液主成分與防腐劑含量均為2015 版藥典規(guī)定檢驗(yàn)指標(biāo)，但分析方法不一，為保證藥品質(zhì)量，提高產(chǎn)品的檢驗(yàn)效率，本研究采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定藥品中左氧氟沙星與羥苯乙酯的含量，以對(duì)相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試劑

U3000 高效液相色譜系統(tǒng)（Thermo-fisher 公司）；XSE205DU 電子天平（梅特勒-特利多公司）。

左氧氟沙星對(duì)照品 （中國(guó)藥品食品檢定研究院）；羥苯乙酯對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；鹽酸左氧氟沙星滴眼液（山東博士倫福瑞達(dá)有限公司）；NaAc、NaClO4、H3PO4均為分析純，上海阿拉丁試劑有限公司；乙腈為色譜純（Merck 試劑）；試驗(yàn)用水為高純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Thermo Hypersil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：NH4Ac-NaClO4溶液（3.08mg·mL-1NaAc、5.38mg·mL-1NaClO4，H3PO4調(diào)節(jié) pH 值至 2.2）-乙腈 （85∶15）；流速 1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm，柱溫：40℃，進(jìn)樣體積：10μL。

2.2 溶液配制

2.2.1 混合對(duì)照品溶液配制 精密稱定鹽酸左氧氟沙星、羥苯乙酯對(duì)照品適量后，加水稀釋定容，得到鹽酸左氧氟沙星含量0.30mg·mL-1、羥苯乙酯0.03mg·mL-1的混合對(duì)照溶液。

2.2.2 空白輔料溶液配制 根據(jù)鹽酸左氧氟沙星處方組分濃度，按照相關(guān)制備工藝，配制得到不含有主成分鹽酸左氧氟沙星及防腐劑羥苯乙酯的空白輔料溶液。

2.2.3 供試品溶液配制 精密移取鹽酸左氧氟沙星滴眼液1mL 至10mL 容量瓶?jī)?nèi)，加水稀釋定容，即得供試品溶液。

2.3 專屬性考察

精密移取混合對(duì)照品溶液、空白輔料溶液及供試品溶液10μL 進(jìn)樣，考察分析方法的專屬性，相關(guān)圖譜見(jiàn)圖1。

圖1 液相色譜圖Fig.1 Liquid chromatograms of mixed control solution（A）,sample solution（B）and blank solution（C）

由圖1 可見(jiàn)，左氧氟沙星峰與羥苯乙酯峰及其它峰之間的分離度均大于1.5，具有良好的分離度，彼此之間無(wú)干擾，因此，該分析方法專屬性較好。

2.4 穩(wěn)定性考察

同一混合對(duì)照品與供試品溶液分別于配制后0、2、4、8、12、24h 后進(jìn)樣，記錄峰面積，考察相關(guān)樣品溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果顯示，混合對(duì)照品溶液中左氧氟沙星與羥苯乙酯的峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.32%、0.49%，供試品溶液中左氧氟沙星與羥苯乙酯的峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.51%、0.76%，表明在24h 內(nèi)，兩種溶液中左氧氟沙星與羥苯乙酯的穩(wěn)定性良好。

2.5 線性關(guān)系考察

分別取混合對(duì)照溶液中鹽酸左氧氟沙星濃度的80%～120%，羥苯乙酯濃度的50%～150%進(jìn)樣，記錄峰面積。以相應(yīng)對(duì)照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合回歸方程，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 兩種組分的線性回歸方程Tab.1 Linear regression equation of two components

由表1 可見(jiàn)，鹽酸左氧氟沙星在0.24～0.36mg·mL-1的濃度范圍內(nèi)，羥苯乙酯在0.015～0.045mg·mL-1的濃度范圍內(nèi)，兩種組分的峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

同一混合對(duì)照品溶液與供試品溶液，在“2.1 色譜條件”下重復(fù)進(jìn)樣6 次，計(jì)算得到混合對(duì)照溶液中鹽酸左氧氟沙星與羥苯乙酯的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.29%、0.37%，供試品溶液中鹽酸左氧氟沙星與羥苯乙酯的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.31%、0.52%，表明該分析方法結(jié)果精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

在不同試驗(yàn)時(shí)間、儀器和人員的條件下，重復(fù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定同一供試品溶液中鹽酸左氧氟沙星與羥苯乙酯的含量，以考察該分析方法的結(jié)果重現(xiàn)性，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 方法重現(xiàn)性結(jié)果Tab.2 Reproducibility results of the method

由表2 可知，不同試驗(yàn)條件下，得到不同組分測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于1.0%，且12 次測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.62%，表明該分析方法的結(jié)果重現(xiàn)性良好。

2.8 回收率考察

利用兩種物質(zhì)的對(duì)照品與空白輔料溶液，制得20mL 3 組不同濃度的供試品溶液，每組溶液各3份，在“2.1 色譜條件”下進(jìn)樣，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 回收率結(jié)果Tab.3 Recovery results of method

由表3 可知，不同濃度的各組分回收率均在98% ～102%范圍內(nèi)，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于1%，表明該分析方法結(jié)果回收率較好，結(jié)果準(zhǔn)確度高。

2.9 樣品含量測(cè)定

按照上述含量測(cè)定方法，分別測(cè)定3 批藥品的鹽酸左氧氟沙星與羥苯乙酯含量，并與藥典[7]及相關(guān)文獻(xiàn)[8]所列方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，見(jiàn)表4。

表 4 3 批樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=6, mg·mL-1）Tab.4 Contents of levofloxacin and ethylparaben in three batch sample（n=6, mg·mL-1）

由表4 可知，3 批樣品的測(cè)定結(jié)果與其它方法相比較無(wú)明顯差異，含量相差均不超過(guò)1%，同時(shí)該方法操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)效率較高，因此，適用于相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

3 結(jié)論

本研究建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定鹽酸左氧氟沙星滴眼液中主成分鹽酸左氧氟沙星與防腐劑羥苯乙酯的含量。在該色譜條件下，左氧氟沙星峰、羥苯乙酯峰與其它雜質(zhì)峰分離度較好，無(wú)干擾，測(cè)定結(jié)果具有較好的重復(fù)性、重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度，同時(shí)操作過(guò)程簡(jiǎn)便、可極大提高檢驗(yàn)效率，因此，適用于相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。