鄭明子，葉海軍，俞儀陽，嚴(yán)輝，蔣春號*，郭堅華*

1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，江蘇 南京 210095；2.江蘇省南通衛(wèi)生高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校，江蘇 海安 226600；3.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210095

a并列第一作者

浙貝母FritillariathunbergiiMiq.屬百合科(Liliaceae)貝母屬中藥材，是著名的“浙八味”之一。其以鱗莖入藥，具有清熱解毒、散結(jié)消腫、止咳化痰等功效[1]，目前主要分布于浙江、江蘇等省[2]。

生產(chǎn)規(guī)模的擴大和連年種植，導(dǎo)致浙貝母病蟲害問題日益突出。浙貝母根腐病由鐮刀菌引起，被侵染的植株鱗莖發(fā)生不同程度的腐爛，葉片因水分和營養(yǎng)的供給不足而發(fā)黃、枯萎[3]。目前，對于浙貝母根腐病以化學(xué)防治為主，而這種防治方法會帶來環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留等問題，尋求安全有效的防治方法迫在眉睫。“寧盾”是本課題組在前期實驗中篩選出的1種三菌合劑(即生防菌劑)，主要為蠟質(zhì)芽胞桿菌Bacilluscereus(AR156)、枯草芽胞桿菌B.subtilis(SM21)與沙雷氏菌沙雷氏菌Serratiasp.(XY21)。“寧盾”于2013年成功登記成微生物肥料[微生物肥(2013)準(zhǔn)字(1096)號]。本研究采用“寧盾”對浙貝母根腐病進行防控，為安全有效地提高浙貝母藥材質(zhì)量提供方法參考。

1 材料

酵母提取物(批號：20190702，北京奧博星生物技術(shù)有限公司)；其他試劑為分析純。LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、氯化鈉10 g用1 mol·L-1氫氧化鈉調(diào)pH為7.0～7.2，加超純水定容至1 L。

生防菌劑“寧盾”：從超低溫冰箱中取出已保存的種菌株，采用三線劃板法于LB平板上28 ℃活化，24 h后挑取單菌落，接入LB試管，置于28 ℃搖床里培養(yǎng) 18～20 h作為種子液；以1%的接種量將種子液接種于1 L大三角瓶培養(yǎng)基，繼續(xù)于28 ℃搖床培養(yǎng)24 h。將AR156、SM21、XY21菌液濃度分別調(diào)成終濃度為1×108CFU·mL-1，并按1∶1∶1的體積比混合。

浙貝母由江蘇省南通衛(wèi)生高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校葉海軍講師鑒定為FritillariathunbergiiMiq.。

2 方法

2.1 防病促生作用

于江蘇省南通市海安市韓南村(N 32°34′19.48″、E 120° 33′ 54.42″)選取土壤結(jié)構(gòu)疏松、有機質(zhì)含量豐富的地塊。地塊長10 m、寬3.6 m，行間距35 cm，株間距25 cm?！皩幎堋碧幚頌閷嶒灲M，清水處理為對照組。播種當(dāng)天噴淋苗床，在植物生長期于出苗后(苗期)、開花前、休眠期前分別灌根1次，田間用量75 kg·hm-2。每個處理設(shè)3個重復(fù)。各實驗小區(qū)采用完全隨機排列的方式。

在生防菌劑“寧盾”120、130、145 d時統(tǒng)計浙貝母的葉片數(shù)、株高、根系數(shù)。收獲期統(tǒng)計產(chǎn)量。

2.2 根腐病的防效統(tǒng)計

2020年5月，雨水充沛，田塊積水較多，根腐病高發(fā)。對浙貝母采用5點取樣法隨機取樣，統(tǒng)計根腐病發(fā)病情況。按參考文獻[4]方法計算病害嚴(yán)重度和防治效果。

病害嚴(yán)重度=[Σ(病級株數(shù)×代表級數(shù))/(植株總數(shù)×最高代表級值)]×100%

(1)

生物防治效果=(對照發(fā)病率-處理防病率)/對照發(fā)病率×100%

(2)

相對防效=(對照病害嚴(yán)重度-處理病害嚴(yán)重度)/對照病害嚴(yán)重度×100%

(3)

3 結(jié)果與分析

3.1 生防菌劑“寧盾”處理對浙貝母地上部生長指標(biāo)的影響

在播種后的120、130、145 d采用5點取樣隨機測量其生長指標(biāo)，包括葉片數(shù)、株高、根系數(shù)。與對照組相比，實驗組在播種120 d后，浙貝母葉片數(shù)增加了16.67%(見圖1)；130 d后，實驗組浙貝母根系提前分蘗，分蘗量比對照組增加了16.67%(見圖2)。以上結(jié)果表明，按此濃度施用生防菌劑“寧盾”能發(fā)揮較好的促生效果。在播種145 d后，實驗組浙貝母株高明顯提高(見圖3)，比對照組增加了12.12%。綜上所述，生防菌劑“寧盾”對浙貝母地上部有很好的促生效果。

注：A.對照組；B.實驗組；下同。圖1 播種120 d后浙貝母生長情況

圖2 播種130 d后浙貝母生長情況

圖3 播種145 d后浙貝母生長情況

3.2 生防菌劑“寧盾”處理對浙貝母鱗莖的病害防治效果及促生情況

根腐病作為浙貝母的一種常見病害，嚴(yán)重影響浙貝母的產(chǎn)量及品質(zhì)。研究結(jié)果顯示，生防菌劑“寧盾”能顯著降低浙貝母根腐病的發(fā)生，相對防效達到90.9%(見表1、圖4)。同時，生防菌劑“寧盾”能顯著促進浙貝母根系發(fā)育生長，與對照組相比，根系促生率達75.78%。綜上所述，生防菌劑“寧盾”對浙貝母根腐病有很好的防效，對浙貝母鱗莖也有良好的促生效果。

表1 不同處理對浙貝母的病害防治和促生效果

注：A.清洗前；B.清洗后；左側(cè)為實驗組；右側(cè)為對照組。圖4 播種后200 d浙貝母鱗莖

4 分析與討論

浙貝母在生長過程中容易發(fā)生灰霉病、黑斑病、根腐病等[5]，且隨連作日益嚴(yán)重。浙貝母根腐病為茄鐮刀菌藍色變種Fusariumsolanivarcoeruleum導(dǎo)致的土傳病害。浙貝母根腐病多發(fā)于低洼積水地塊，主要危害根莖組織，表現(xiàn)為鱗莖腐爛，莖、葉也因為水分、養(yǎng)分供應(yīng)不足萎蔫，直至死亡[6]。目前，浙貝母根腐病以化學(xué)防治為主，日孜旺古麗·蘇皮等[7]提出，在根腐病發(fā)病初期及時用 45%代森銨500倍液，以每株10 g 量對病株及周圍未出現(xiàn)癥狀的植株進行灌根，可達到良好的防治效果；也可選用 50%甲基托布津或50%多菌靈800～1000倍液浸種30 min[8]。但是，目前越來越多的人認識到化學(xué)防治在用藥安全方面的隱患，因而健康安全的生物防治成為近年來的研究熱點。

“寧盾”對土傳病害具有良好的防治效果。目前結(jié)果表明，“寧盾”中AR156能夠同時激發(fā)水楊酸和乙烯茉莉酸信號通路，植物通過產(chǎn)生系統(tǒng)誘導(dǎo)抗性來抵御病原微生物的入侵[9]。此外，AR156對扁豆有促生效果，對其果實品質(zhì)有明顯提升作用[10]。

本研究探討了“寧盾”對浙貝母根腐病的防效和促生效果。生長指標(biāo)(葉片數(shù)、株高、根系數(shù))統(tǒng)計結(jié)果顯示，“寧盾”對浙貝母具有促進生長的作用；根腐病防治效果統(tǒng)計顯示，其對浙貝母根腐病的防治效果顯著，在浙貝母病害的綠色防控中具有良好應(yīng)用前景。

由于實驗田地前期使用化學(xué)防治，對“寧盾”的效果可能存在一定影響。同時，由于本次實驗田塊屬于連作地，根腐病的發(fā)生導(dǎo)致土壤微生態(tài)并不利于“寧盾”存活，隨著“寧盾”的連續(xù)使用，浙貝母根腐病的防治效果和促生情況都將有所提升。在后續(xù)研究中，本團隊將針對浙貝母多種常見病蟲害開展研究，以期形成完整的浙貝母病害綠色防控體系。