陳明曦，李艷梅，孫 婷，于治國，王東凱

（沈陽藥科大學 藥學院，遼寧 沈陽 110016）

中藥以副作用小、療效確切、成本低廉等優(yōu)點，在我國幾千年歷史中被廣泛應用于各類疾病的防治。與傳統(tǒng)藥物相同，中藥同樣需要采用可靠的手段來證明其安全性和有效性，因此實現中藥現代化亟需新方法和先進的分析技術手段。近年來，液相色譜與各類型質譜的聯(lián)用技術（liquid chromatograph/mass spectrometer，LC/MS）憑借在分離復雜樣品、測定化合物結構以及定性和定量分析等方面的獨特優(yōu)勢[1]，成為中藥質量研究的有力工具。

1 液相色譜與質譜聯(lián)用技術

目前已有多種類型質譜被用來分析氣態(tài)離子質荷比，常見的有基于離子飛行速度和飛行距離進行分離的飛行時間質譜（time of flight mass spectrometer，TOF），通過電勢場進行傳輸的四極桿質譜（quadrupole mass spectrometer，QMS）和磁場或電場周期性運動的離子阱質譜（ion trap mass spectrometer，ITMS）[2-3]。為獲取更高分辨力、準確性、靈敏度和更快的分析速度等優(yōu)質性能，分析技術由單一質量分析器快速向混合質量分析器發(fā)展，出現了不同類型質譜組合與色譜聯(lián)用的現代分析技術[4]。此外，超臨界流體色譜[5-6]、二維色譜[7-8]、離子淌度質譜[9-10]等先進的色譜與質譜技術也被快速應用于液質聯(lián)用技術，為中藥質量研究提供了更多的可能。

1.1 液相色譜與四極桿質譜聯(lián)用

四極桿質譜常用電噴霧離子化（electrospray ionization，ESI）和大氣壓化學離子化（atmospheric chemical ionization，APCI）作為液質聯(lián)用接口技術，具有成本低、操作簡單、體積相對較小等優(yōu)點，被廣泛應用于色譜與質譜聯(lián)用?；谝患壻|譜的單離子檢測（single ion monitor，SIM）通常用作已知化合物的定量分析，通過只掃描一個離子以提高目標離子的靈敏度，排除其它離子干擾。M.Dan等[11]在正離子模式下，采用 LC/ESI-MS 法測定三七不定根中皂苷含量，經驗證方法靈敏準確。

在選擇反應檢測（selected-reaction monitoring，SRM）模式下，需要二級質譜（MS/MS）進行結構鑒定或提高目標成分選擇性和靈敏度時，則應使用三重四極桿質譜（triple quadrupole mass spectrometer，TQMS）與色譜聯(lián)用[2]。三重四極桿質譜與色譜聯(lián)用技術在中藥多組分檢測、鑒別和定量方面發(fā)揮重要作用。袁圓等[12]采用液相色譜-串接四極桿質譜儀，對 16 種市售含烏頭屬中藥制劑中 8 種生物堿進行含量測定。李曉嬌等[13]建立 LC-MS/MS（三重四極桿質譜檢測器）正負譜實時切換的分析方法同時測定血漿中黃連解毒湯 13 種主要活性成分。

1.2 液相色譜與離子阱質譜聯(lián)用

離子阱具有強大的全掃描和選擇離子掃描功能，通過碰撞誘導解離（collision-induced dissociation，CID）實現二級或多級質譜（multilevel mass spectrometry，MSn）掃描，而 MSn 是獲得詳細結構信息的必要手段。Han T.等[14]建立了高相液相色譜-二極管陣列檢測與離子阱質譜聯(lián)用的方法對中藥蒼耳子進行了化學特征鑒定和定量分析。李娜等[15]采用液相色譜/離子阱質譜聯(lián)用的分析方法推測出人參莖葉提取液中人參皂苷 Rg1、Re 加熱后發(fā)生脫糖、脫羥基、環(huán)合等反應，生成多種降解產物。

三重四極桿復合線性離子阱質譜（quadrupole-ion trap mass spectrometer，QTrap）兼具三重四極桿和線性離子阱質譜的 MS/MS 和 MSn 掃描功能[16]，如中性缺失（neutral loss，NL）掃描、前體離子（precursor ion，PI）掃描、多反應檢測（multiple-reaction monitoring，MRM）掃描和全掃描，可實現高通量的定量定性分析。Jin Y.R.等[17]建立高效液相色譜串聯(lián) QTrap 質譜法，在MRM 模式下同時測定紫杉醇類化合物中 19 個二萜類化合物。

1.3 液相色譜與飛行時間質譜聯(lián)用

飛行時間質譜具有較高的全光譜檢測靈敏度和質量準確性，每次進樣可以全譜采集樣本中所有的m/z，大大提高數據采集效率，在中藥活性成分鑒別、代謝產物研究以及中藥表征和定量分析等領域得到廣泛應用。

三重四極桿復合飛行時間質譜（Q-TOF）在一級四極桿中進行前體離子碎片化，在 TOF 檢測產物離子，通過區(qū)別相同標示質量但不同精確質量的干涉峰和質量峰，可滿足質量分辨率高、測量準確的分析要求，且具有一定選擇性，適用于復雜中藥樣品中成分識別和定量。王若柳等[18]采用LC-Q-TOF-MS 和 LC-IT-MS 檢測到參麥注射液中 74 個化合物，鑒定了其中 64 個化合物的結構。

離子阱復合飛行時間質譜（IT-TOF）將 IT 的多級質譜掃描功能和 TOF 的高分辨率、高精確質量測量能力結合，可為中藥復雜系統(tǒng)的結構識別提供大量信息，成功用于中藥中靶向和非靶向化合物的全方位鑒別。仝令坤等[19]采用高效液相色譜-二極管陣列檢測與離子阱復合飛行時間質譜聯(lián)用（HPLC-DAD-IT-TOF）對中藥羅布麻葉指紋圖譜中 30 個化學成分進行結構鑒定，其中 5 種化合物為首次指認。

2 液質聯(lián)用技術在中藥質量研究中的應用

我國中藥質量控制上存在諸多問題，如定性、定量標準不明確；指標成分專屬性差，不能準確客觀地反應中藥的內在質量[20]；中藥毒性成分、毒性機制不明確，無法制定合理的限度要求；非法添加物檢測能力不足，無法保證臨床用藥安全等。液質聯(lián)用技術是鑒定各種復雜樣品中已知或未知化合物最常用的技術之一，結合了高效液相色譜法分離能力和不同類型質譜的定性、定量能力優(yōu)勢，可在中藥的多指標成分定性、定量分析、指紋圖譜研究、毒性成分和非法添加物檢測等方面發(fā)揮重要作用。

2.1 結構鑒定與定量分析

中藥的質量和治療效果，在一定程度上，取決于其活性成分的含量。但由于氣候、耕種條件、收獲時間、干燥及儲存條件和提取程序的不同，導致中藥樣品中所含的活性成分往往具有很大差異。因此，建立完善的分析方法以檢測中藥中的活性成分，在中藥質量控制中尤為重要。

Wang L.L.等[21]采用液相色譜-電噴霧離子化-串聯(lián)質譜法，同時定量測定山茱萸中 5-羥甲基-2-呋喃醛等 11 種高極性成分。經過驗證，該方法成功應用于評估三個起源以及加工后的野生山茱萸的成分變化，且環(huán)烯醚萜異構體首次被作為山茱萸的質量標志物。

紫花前胡苷是中藥毛前胡的活性成分，劉航等[22]采用高效液相色譜-質譜聯(lián)用法，多反應監(jiān)測，在電噴霧正離子模式下，對不同產地毛前胡中的紫花前胡苷進行定量研究。方法學驗證結果顯示，紫花前胡苷在 1.002 3～9.015 2 ng 范圍內線性關系良好，所建立方法準確可靠。

2.2 指紋圖譜分析

中藥通常是通過多組分協(xié)同作用發(fā)揮藥效，基于定量單一的標志物無法滿足對中藥標準化質量的研究。通過色譜技術構建中藥指紋圖譜，可以標示中藥中所含的特征性共有峰，依此來評價中藥質量的一致性和穩(wěn)定性[22]。由于精確的質量測量需要高分辨率來實現，因此高分辨率質譜技術廣泛用于中藥指紋圖譜分析[24]。根據藥物特性，采用分析儀器聯(lián)用技術有針對性地構建多維指紋圖譜[25]，研究中藥藥效物質基礎，能夠從根本上反應其內在質量。

Yang N.等[26]建立了超高效液相色譜聯(lián)用光電二極管陣列檢測器（photo-diode array，PDA）和質譜的方法，標記了消炎利膽片制劑指紋圖譜中 39 個色譜峰，并對 5-甲氧基-5-羥脯氨酸-6-酮等五個重要成分進行了定性評價。此方法可用于快速評價消炎利膽片制劑的質量一致性。胡一晨等[27]采用高效液相色譜與 Q-TOF-MS 高分辨串聯(lián)質譜技術對 11 批秦艽花藥材進行分析，建立其指紋圖譜，標定指紋圖譜中 23 個共有峰，為提高秦艽花的質量標準提供了依據。

2.3 中藥毒性成分分析

中藥的毒性評價對藥物的合理利用及人體的安全、健康具有重要意義。尋找中藥中潛在的毒性成分，建立毒性成分質量檢測方法。針對不同情況制定合理的限度要求，是中藥質量控制中的重要內容[28-29]。然而，由于中藥成分復雜，有多種成分共存，同時又具有高度關聯(lián)性，無疑增加了中藥毒性成分分析工作的難度。

中藥馬錢子在臨床上常用來緩解風濕麻痹等癥狀，其有效成分馬錢子堿和士的寧具有毒性，過量使用會引發(fā)中毒甚至死亡。韋立志等[30]建立高效液相色譜與三重四極桿質譜聯(lián)用法，同時測定風濕馬錢片等 4 種抗風濕類中成藥中馬錢子堿與士的寧含量。通過此方法可實現對制劑中馬錢子堿和士的寧成分含量的嚴格控制。

阿多尼弗林堿（adonifoline）作為一種天然毒性物質廣泛存在于千里光藥材。熊芬等[31]建立UPLC-MS 方法對千柏鼻炎片等 14 種含千里光的中藥制劑中的阿多尼弗林堿進行測定，結果顯示，不同產地相關制劑中 Pas 含量具有顯著差異，提示應注意其用藥安全。

2.4 中藥非法添加物分析

中藥雖然起效慢，但其療效緩和，可以到達標本兼治的效果，因此有些中藥常被大眾服用以改善體質。一些不法商家利用中藥制劑成分復雜、現有分析方法無法對各成分均進行全面檢測的特點[32]，向中藥中非法添加西藥，以加快中藥療效，從而增加藥品銷量。在患者不知情的情況下，若持續(xù)服用含有非法添加藥物的中藥制劑，會產生不可預知的不良反應，嚴重危害人民的生命安全。非法添加物種類繁多，液質聯(lián)用技術因具有檢測范圍廣、選擇性高、準確、快速等特點，被廣泛應用到中藥制劑中非法添加物的檢測中[33]。

一些不法商家在治療痛風類中成藥中，添加抗炎鎮(zhèn)痛和激素類西藥，患者長期服用會導致嚴重不良反應。勇艷華等[34]采用液相色譜串聯(lián)四極桿質譜，多反應監(jiān)測方式采集并定量，同時測定痛風類中成藥中氫化可的松、乙酰氨基酚等 17 種非法添加物，檢出限可達到 0.1 mg?L-1，該方法可用于痛風類中成藥中非法添加物的日常檢測。

李岳等[35]建立四極桿-靜電場軌道阱高分辨率質譜方法，同時篩查某中藥保健品中降壓類、安神類、減肥類等 11 類，共 115 種非法添加物，并對潛在的陽性樣品進行定量分析。所建立的方法具有快速、便捷、準確的特點，能夠滿足日常中藥保健品監(jiān)管工作的篩查確證需求。

3 結語

如今，中藥治療在世界范圍內廣泛應用，建立可靠、嚴格的中藥質量控制體系對確保中藥制劑的安全性和有效性來說十分重要。中藥有效成分識別是保證中藥質量的前提，指紋圖譜分析是一種被廣泛接受的成分評估方法。同時，有效檢測中藥毒性成分和嚴厲打擊中藥非法添加物更是避免臨床不良事件發(fā)生的重要手段。隨著科學技術的飛速發(fā)展和儀器設備的日益完善，液質聯(lián)用技術仍將在中藥質量研究領域實現其更多的應用價值。