劉帥葉

（廣州省深圳市四季醫(yī)療美容醫(yī)院，廣東 深圳 518052）

0 引言

尋找一個(gè)安全，有效，持久，無(wú)毒的組織代用品，對(duì)修復(fù)重建外科來(lái)說(shuō)尤為重要。從20世界 70年代起，自體脂肪移植得以出現(xiàn)，移植后的脂肪吸收，壞死，感染和纖維囊性化等不良反應(yīng)頻繁發(fā)生，對(duì)脂肪移植的發(fā)展造成了嚴(yán)重的不良影響。促進(jìn)脂肪移植成活，將脂肪移植后的并發(fā)癥進(jìn)行降低，是進(jìn)行自體脂肪移植技術(shù)的干預(yù)關(guān)鍵[1]。本研究則以自體脂肪干細(xì)胞體外擴(kuò)增混合自體脂肪顆粒移植的方法進(jìn)行入手，探究其具體應(yīng)用成果，展開(kāi)具體分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取我院患者為研究對(duì)象，患者的選取時(shí)間在2018年5月至2019年5月，共選取患者100例，將其隨機(jī)分為兩組，每組50例患者，一組患者經(jīng)過(guò)自體脂肪干細(xì)胞分離和培養(yǎng)，促進(jìn)體外擴(kuò)增，對(duì)自體脂肪顆粒進(jìn)行介導(dǎo)，實(shí)現(xiàn)注射移植，促進(jìn)面部塑形的填充或是隆胸。對(duì)照組患者給予單純的自體脂肪移植。患者中女89人，男11人，年齡在20-58歲，平均（34.34±2.34）歲，患者均無(wú)其他重大疾病，并簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法探究。主要試劑和儀器：主要將α-MEM無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行應(yīng)用，其中的Ⅰ型膠原酶和胰蛋白酶主要選擇生產(chǎn)自美國(guó)Sigma公司的，而CD29-PE，CD31-PE，CD34-PE，HLA-AΒC-FITC，HLA-DR-FITC，主要選擇生產(chǎn)自美國(guó)Βioscinces公司的，同時(shí)需要應(yīng)用秋水仙素，其主要選擇生產(chǎn)自上海瑞郎商貿(mào)有限公司的，同時(shí)倒置鏡和成像系統(tǒng)選擇生產(chǎn)自日本Olympus公司的。實(shí)驗(yàn)方法：對(duì)自體脂肪肝細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)來(lái)說(shuō)，需要在患者下腹部進(jìn)行自體脂肪顆粒的抽取，其劑量為50-60 mL，并將其進(jìn)行離心處理，離心次數(shù)為2次。并取脂肪層，將濃度為0.075%的Ⅰ型膠原酶加入其中，并將其放置在37℃溫度環(huán)境中，將其進(jìn)行消化處理，時(shí)間為60 min，并給予離心處理，離心速度為1500 r/min，離心時(shí)間為15 min，同時(shí)將上層脂肪組織進(jìn)行去除，并將生理鹽水進(jìn)行應(yīng)用，進(jìn)行沉淀重懸，將直徑在70 μm的細(xì)胞進(jìn)行過(guò)濾篩選，將殘余結(jié)締組織進(jìn)行去除，同時(shí)給予離心處理，此時(shí)的離心速度為1500 r/min，離心干預(yù)時(shí)間在5分鐘。隨后在其中加入紅細(xì)胞裂解液，處理5分鐘左右，并用生理鹽水進(jìn)行清洗，次數(shù)為2次，進(jìn)行技術(shù)，將α-MEM培養(yǎng)基進(jìn)行應(yīng)用，以106個(gè)/mL，將其平鋪在培養(yǎng)皿中，并記錄為P0代，在觀察其長(zhǎng)滿細(xì)胞后，將濃度為0.05%的胰蛋白酶進(jìn)行應(yīng)用，促進(jìn)消化作用，以1:6的比例進(jìn)行傳代復(fù)制。自體脂肪干細(xì)胞免疫表型鑒定：將第3代的自體脂肪干細(xì)胞進(jìn)行選取，同時(shí)采用胰酶消化，用PΒS進(jìn)行清洗，清洗兩遍，然后將其放置在溫室內(nèi)，進(jìn)行避光孵育，時(shí)間為30 min，再用PΒS清洗2次，并采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)[2]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 20.0為工具，對(duì)此次研究中所出現(xiàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)計(jì)量資料（±s）的比較結(jié)果予以t值驗(yàn)證，對(duì)計(jì)數(shù)資料（n，%）的比較結(jié)果予以χ2值驗(yàn)證，當(dāng)結(jié)果呈現(xiàn)出P＜0.05時(shí)表示組間比較差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)分析價(jià)值[3]。

2 結(jié)果

2.1 hADSCs細(xì)胞形態(tài)。在給予患者接種24小時(shí)后，對(duì)其展開(kāi)倒置顯微鏡觀察，其結(jié)果顯示大部分的細(xì)胞均表現(xiàn)為貼壁，并表現(xiàn)為梭形，并且其中混有少量的未貼壁的圓形淋巴細(xì)胞，在接種48小時(shí)后，需要進(jìn)行換液操作，同時(shí)將淋巴細(xì)胞進(jìn)行去除，在細(xì)胞長(zhǎng)滿后，細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)出旋渦狀生長(zhǎng)，在傳到第3代后，不存在形態(tài)上的差異性。

2.2 hADSCs免疫表型。在流式細(xì)胞儀下進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果顯示：第3代hADSCs高表達(dá)，主要為HLA-AΒC，CD37，CD44和CD29，對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性率在95%以上，但是對(duì)應(yīng)內(nèi)皮標(biāo)志物并不表示，造血細(xì)胞表面的標(biāo)志物主要組織形容性抗原的陽(yáng)性率在3%以下。

3 討論

干細(xì)胞是一種可實(shí)現(xiàn)自我修復(fù)更新，并促進(jìn)多向分化強(qiáng)能增強(qiáng)的細(xì)胞組織，其對(duì)應(yīng)的重建功能和組織修復(fù)能力較強(qiáng)。尋找一個(gè)安全，有效，持久，無(wú)毒的組織代用品，對(duì)修復(fù)重建外科來(lái)說(shuō)尤為重要[4]。根據(jù)相關(guān)研究數(shù)據(jù)顯示，其曾在脂肪組織中將干細(xì)胞進(jìn)行分離，并將其命名為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，從此之后，脂肪干細(xì)胞就得到了廣泛關(guān)注，在將其與骨髓來(lái)源的MSCs進(jìn)行比較時(shí)，脂肪干細(xì)胞可將儲(chǔ)量進(jìn)行提高，同時(shí)其取材過(guò)程較為方便，對(duì)患者造成痛苦程度相對(duì)較小，同時(shí)干細(xì)胞所對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增能力相對(duì)較強(qiáng)，因此，可以說(shuō)脂肪干細(xì)胞是組織工程中的理想種子細(xì)胞，根據(jù)近些年的發(fā)展研究顯示，脂肪干細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中，可逐漸向中胚層脂肪細(xì)胞，軟骨細(xì)胞分化，成骨細(xì)胞進(jìn)行分化，同時(shí)可以向胰島細(xì)胞，肝臟細(xì)胞和心肌細(xì)胞進(jìn)行分化，其結(jié)果表明脂肪干細(xì)胞的多向分化強(qiáng)能較強(qiáng)[5]。

根據(jù)隆胸的近兩年隨訪結(jié)果顯示，其MRI中，hADSCs介導(dǎo)的自體脂肪移植，并不會(huì)促進(jìn)腺體體積的增加，通常僅僅是促進(jìn)乳房的皮下脂肪組織厚度增加，是對(duì)女性乳腺組織進(jìn)行的安全隆胸手術(shù)。根據(jù)研究解結(jié)果顯示hADSCs介導(dǎo)自體脂肪移植術(shù)，其所對(duì)應(yīng)的特定較為顯著[6]。本研究結(jié)果顯示：在流式細(xì)胞儀下進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果顯示：第3代hADSCs高表達(dá)，主要為HLAAΒC，CD37，CD44和CD29，對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性率在95%以上，但是對(duì)應(yīng)內(nèi)皮標(biāo)志物并不表示，造血細(xì)胞表面的標(biāo)志物主要組織形容性抗原的陽(yáng)性率在3%以下。表明在hASACs介導(dǎo)的自體脂肪移植術(shù)是將具有分化成脂肪細(xì)胞的潛能的，其所對(duì)應(yīng)的遺傳穩(wěn)定性較強(qiáng)，可將其自體脂肪間的充質(zhì)干細(xì)胞注射移植，隨后進(jìn)行面部塑性或隆胸。研究數(shù)據(jù)顯示，其具有將高移植脂肪細(xì)胞的成活率進(jìn)行提高的作用，可促進(jìn)移植脂肪進(jìn)行血管再生，將脂肪顆粒的吸收進(jìn)行減少，減少液化，從而可降低不良反應(yīng)的發(fā)生率，具有顯著的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)。對(duì)其原因進(jìn)行分析，可以明確主要受三方面因素影響。首先，hADSCs具有分化成脂肪細(xì)胞的能力，在人體中注入hADSCs，可單次增加脂肪細(xì)胞移植數(shù)量，而且其可移植入體內(nèi)的脂肪顆粒細(xì)胞為支架，在其周?chē)M(jìn)行聚集，分化成脂肪細(xì)胞和自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。其次，hADSCs具有分泌細(xì)胞因素和細(xì)胞基質(zhì)的能力作用，可進(jìn)一步促進(jìn)移植脂肪顆粒細(xì)胞的血管再生，促進(jìn)移植的脂肪顆粒細(xì)胞的穩(wěn)定性加強(qiáng)，而且其增值分化的過(guò)程以脂肪顆粒細(xì)胞為模板。最后，進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增，其脂肪干細(xì)胞較為單一，具有穩(wěn)定性，在移植前脂肪干細(xì)胞可再次進(jìn)行免疫表型，遺傳穩(wěn)定和分化潛能的檢測(cè)，從而可對(duì)移植細(xì)胞的質(zhì)量進(jìn)行穩(wěn)定性。脂肪顆粒可為移植的hADSCs起到支架作用，hADSCs以脂肪顆粒細(xì)胞為模板進(jìn)行分化，與脂肪組織的生物型狀態(tài)更加符合，而單純的脂肪顆粒移植并沒(méi)有hADSCs介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境，容易導(dǎo)致移植脂肪包成活率低等問(wèn)題，脂肪顆粒的吸收，液化和感染等并發(fā)癥的發(fā)生也會(huì)隨之而來(lái)。而自體脂肪干細(xì)胞介導(dǎo)的自體脂肪移植術(shù)則可將此問(wèn)題進(jìn)行有效避免，提高細(xì)胞成活率[7]。

綜上所述，就自體脂肪干細(xì)胞介導(dǎo)的自體脂肪移植術(shù)進(jìn)行應(yīng)用，其具有移植脂肪成活率較高，創(chuàng)傷較小，成形效果較好等特點(diǎn)，對(duì)臨床發(fā)展具有積極意義，可在臨床再生醫(yī)學(xué)技術(shù)中進(jìn)行推廣使用。