趙新華 李有江 馮薈薈 藍(lán)雅華 邵勇奇 魯興萌

(1浙江省桐鄉(xiāng)市蠶業(yè)有限公司，浙江嘉興 314500； 2浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江杭州 310058)

一代雜交蠶種因生產(chǎn)地域、生產(chǎn)模式、飼養(yǎng)水平、制種方式和蠶種后期處理等的不同，同批蠶種不同裝盒的散卵蠶種或不同蠶連紙的蠶種均勻性并不一致。在制種方式中，散卵方式較之平附種方式，其均勻性相對(duì)較高。一代雜交蠶種的生產(chǎn)地域、生產(chǎn)模式和飼養(yǎng)水平等對(duì)蠶種均勻性的影響，取決于蠶種生產(chǎn)企業(yè)基本生產(chǎn)環(huán)境的選擇或限制[1]。一代雜交蠶種的制種方式中的檢疫批劃定(按時(shí)或按戶(hù)或按村分段分批等)，與企業(yè)的生產(chǎn)管理模式有關(guān)[2]；一代雜交蠶種的制種后期處理工藝或流程的不同所導(dǎo)致的均勻性不佳，則與企業(yè)采用的技術(shù)方式和能力有關(guān)。如，裝盒批的規(guī)模過(guò)大或合并段數(shù)過(guò)多，往往難以做到均勻；越年蠶種，洗落保護(hù)或浴種前洗落晾干再浴種，較之直接洗落浴種，其均勻性可得到提高；裝盒前的混勻方式不同，商品蠶種的均勻性也不同[1]。

克卵粒數(shù)是蠶種的基本生物學(xué)特征之一，但在一代雜交蠶種的品種特性描述或蠶種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中并未列入[3-6]，這可能與該描述特征指標(biāo)的變化幅度較大有關(guān)。在生產(chǎn)流程中，因盒種裝卵量的確定需要而測(cè)定克卵粒數(shù)[1]。均勻性是商品的基本特征之一，商品化蠶種的均勻程度不僅與產(chǎn)品的質(zhì)量水平有關(guān)，而且與基于成品卵的家蠶微粒子病檢測(cè)抽樣規(guī)模也密切相關(guān)。克卵粒數(shù)的變化幅度，在一定程度上反映了蠶種的均勻程度，或間接反映了蠶種品質(zhì)的均勻水平。

為了解實(shí)際生產(chǎn)中散卵一代雜交蠶種的均勻程度，2016年至2019年間對(duì)浙江省桐鄉(xiāng)市蠶業(yè)有限公司生產(chǎn)的部分批次的冷藏浸酸蠶種或越年蠶種的克卵粒數(shù)進(jìn)行了調(diào)查，以克卵粒數(shù)和克卵粒數(shù)極差(不同重復(fù)的克卵粒數(shù)測(cè)定值中，最大值與最小值之差)為指標(biāo)進(jìn)行散卵一代雜交蠶種的均勻性調(diào)查分析，以期為家蠶微粒子病的成品卵檢測(cè)中抽樣規(guī)模的確定提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試蠶種 調(diào)查用蠶種為浙江省桐鄉(xiāng)市蠶業(yè)有限公司在原蠶區(qū)生產(chǎn)的一代雜交蠶種，主要生產(chǎn)信息和取樣概況如表1所示。

表1 調(diào)查用蠶種的主要生產(chǎn)信息及取樣概況

常規(guī)卵是在常規(guī)生產(chǎn)流程的裝盒前混勻作業(yè)大布上所取的樣本；籠樣卵是在常規(guī)生產(chǎn)流程的漂洗后晾干前的籠內(nèi)所取的樣本；混勻卵是在常規(guī)生產(chǎn)流程的裝盒前增加1次鹽水混合的作業(yè)程序后再取的樣本；表2和圖4-5相同。

越年蠶種采用夏布保護(hù)，洗落晾干后再浴種的方式；除1606108批由2個(gè)段組成，其余均為1個(gè)段。

1.1.2 主要儀器設(shè)備 SC-G千粒重儀，萬(wàn)森檢測(cè)科技有限公司產(chǎn)品；0.001 g-ME203E電子天平，梅特勒-托利多儀器有限公司產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 蠶種處理和抽樣方法 一代雜交蠶種的蠶種后期處理基本程序按照常規(guī)生產(chǎn)流程[1]進(jìn)行，取樣類(lèi)型分為常規(guī)卵、籠樣卵和混勻卵3種類(lèi)型。常規(guī)卵是在常規(guī)生產(chǎn)流程的裝盒前混勻作業(yè)大布上所取的樣本；籠樣卵是在常規(guī)生產(chǎn)流程的漂洗后晾干前的籠內(nèi)所取的樣本；混勻卵是在常規(guī)生產(chǎn)流程的裝盒前增加1次鹽水混合的作業(yè)程序后再取的樣本。不同取樣類(lèi)型的蠶卵，按照隨機(jī)原則確定樣區(qū)(或籠)，然后再隨機(jī)確定樣點(diǎn)，每個(gè)樣點(diǎn)重復(fù)3次(或3次以上)取樣測(cè)定克卵粒數(shù)。常規(guī)卵和混勻卵的樣區(qū)采用三點(diǎn)法、梅花法或多點(diǎn)隨機(jī)法確定，籠樣卵的樣區(qū)采用等距間隔法確定；樣區(qū)內(nèi)樣點(diǎn)采用對(duì)角線兩點(diǎn)法、三點(diǎn)法、梅花法或多點(diǎn)隨機(jī)法隨機(jī)取樣[7]。

1.2.2 克卵粒數(shù)計(jì)數(shù)方法 用精度為0.001 g的分析天平稱(chēng)取1.000 g蠶種，按照SC-G千粒重儀的使用程序進(jìn)行蠶卵計(jì)數(shù)，獲得克卵粒數(shù)，每個(gè)樣點(diǎn)調(diào)查3次或3次以上。

1.3 統(tǒng)計(jì)軟件與分析方法

數(shù)據(jù)用SPSS 23.0軟件進(jìn)行描述統(tǒng)計(jì)分析和顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 蠶品種間克卵粒數(shù)比較

對(duì)10批華康2號(hào)蠶種和4批秋豐×白玉蠶種進(jìn)行抽樣和克卵粒數(shù)測(cè)定，合計(jì)樣點(diǎn)數(shù)分別為236個(gè)和73個(gè)，每個(gè)樣點(diǎn)測(cè)定重復(fù)3次或3次以上。華康2號(hào)2 748個(gè)克卵粒數(shù)測(cè)定值的平均值、最大值和最小值分別為1 745粒、1 989粒和1 697粒；秋豐×白玉219個(gè)克卵粒數(shù)測(cè)定值的平均值、最大值和最小值分別為1 725粒、1 765粒和1 644粒。華康2號(hào)的克卵粒數(shù)極顯著多于秋豐×白玉的克卵粒數(shù)(P<0.01)，2個(gè)蠶品種的克卵粒數(shù)分布均未呈現(xiàn)典型的正態(tài)分布(圖1)。以抽樣點(diǎn)不同克卵粒數(shù)測(cè)定重復(fù)的極差值進(jìn)行品種間比較顯示，華康2號(hào)生產(chǎn)批蠶種極顯著大于秋豐×白玉(P=0.001<0.01)(圖2)。以不同生產(chǎn)批的克卵粒數(shù)極差值進(jìn)行的品種間比較顯示，2個(gè)品種之間未見(jiàn)顯著差異(P=0.623>0.05)(圖3)。

圖1 華康2號(hào)和秋豐×白玉克卵粒數(shù)的分布

圖2 華康2號(hào)和秋豐×白玉抽樣點(diǎn)間的克卵粒數(shù)極差值比較

圖3 華康2號(hào)和秋豐×白玉生產(chǎn)批間的克卵粒數(shù)極差值比較

圖4 華康2號(hào)不同取樣類(lèi)型間的樣點(diǎn)克卵粒數(shù)極差值比較

圖5 秋豐×白玉不同取樣類(lèi)型的樣點(diǎn)克卵粒數(shù)極差值比較

2.2 取樣類(lèi)型間克卵粒數(shù)比較

不同取樣類(lèi)型間，籠樣卵、常規(guī)卵和混勻卵抽樣點(diǎn)克卵粒數(shù)極差值，華康2號(hào)的最大值分別為16粒、23粒和10粒，最小值分別為0粒、1粒和3粒；秋豐×白玉的最大值分別為17粒、15粒和7粒，最小值分別為2粒、1粒和3粒。以抽樣點(diǎn)克卵粒數(shù)極差值為觀察值進(jìn)行的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較顯示，2個(gè)蠶品種的3種取樣類(lèi)型之間未見(jiàn)顯著差異(P>0.05)(圖4-5)。

根據(jù)表1的取樣類(lèi)型進(jìn)行批內(nèi)最大極差值和樣區(qū)(或樣點(diǎn))內(nèi)最大極差平均值比較，常規(guī)卵調(diào)查樣本中，華康2號(hào)分別為29粒和23粒(6批蠶種)，秋豐×白玉分別為25粒和20粒(3批蠶種)；籠樣卵調(diào)查樣本中，華康2號(hào)分別為49粒和36粒(6批蠶種)，秋豐×白玉分別為42粒和37粒(2批蠶種)；混勻卵調(diào)查樣本中，華康2號(hào)分別為15粒和14粒(2批蠶種)，秋豐×白玉的最大極差值為10粒(1批蠶種)。

對(duì)6批(表1)同時(shí)進(jìn)行了籠樣卵和常規(guī)卵取樣蠶種的樣區(qū)(或不同籠)間的克卵粒數(shù)極差值統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，1906115批、1807022批和1807026批籠樣卵的P值分別為0.000、0.048和0.013，即呈極顯著或顯著差異，其它批均未見(jiàn)顯著差異(表2)。同時(shí)有樣區(qū)重復(fù)取樣和按籠多點(diǎn)取樣蠶種的1906113批、1906115批、1807022批、1807026批，籠樣卵和常規(guī)卵比較顯示2種取樣類(lèi)型之間的克卵粒數(shù)極差值未見(jiàn)顯著差異(表2)。

表2 樣區(qū)(或籠)樣本的克卵粒數(shù)極差值比較

2.3 樣點(diǎn)不同觀察數(shù)對(duì)克卵粒數(shù)極差值的影響

在調(diào)查生產(chǎn)批蠶種中，對(duì)2批常規(guī)卵樣區(qū)數(shù)為7和5、樣點(diǎn)數(shù)均為5個(gè)、每個(gè)樣點(diǎn)的克卵粒數(shù)測(cè)定數(shù)(重復(fù)數(shù))為20個(gè)的不同取樣數(shù)進(jìn)行極差值比較，結(jié)果顯示1906115批樣點(diǎn)內(nèi)測(cè)定數(shù)在15個(gè)和20個(gè)時(shí)與3個(gè)測(cè)定(重復(fù))數(shù)間呈顯著差異，1906113批的不同樣點(diǎn)內(nèi)測(cè)定數(shù)間未見(jiàn)顯著差異(表3)。

表3 不同取樣數(shù)量克卵粒數(shù)極差值的差異分析(sig值)

3 小結(jié)與討論

華康2號(hào)的克卵粒數(shù)極顯著多于秋豐×白玉，這種差異可能與不同蠶品種的遺傳特性有關(guān)，但是同一品種不同生產(chǎn)批間的差異也是比較大的，華康2號(hào)克卵粒數(shù)的最大值與最小值之差為292粒，秋豐×白玉為121粒；在相同生產(chǎn)批內(nèi)，常規(guī)卵、籠樣卵和混勻卵的克卵粒數(shù)極差最大值，華康2號(hào)分別為29粒、49粒和15粒，秋豐×白玉分別為25粒、42粒和10粒；2個(gè)蠶品種的批內(nèi)克卵粒數(shù)極差值，以及3種不同取樣類(lèi)型的樣點(diǎn)克卵粒數(shù)極差值均未見(jiàn)顯著差異；在樣區(qū)或籠樣同步取樣的比較中，有3個(gè)批蠶種籠樣卵的克卵粒數(shù)極差顯著大于常規(guī)卵。由此可見(jiàn)，調(diào)查對(duì)象批蠶種的克卵粒數(shù)存在較大的差異或不均勻性，這種差異華康2號(hào)極顯著大于秋豐×白玉，而且籠樣卵有大于常規(guī)卵和混勻卵的趨勢(shì)，這種差異也可能與其品種特性、生產(chǎn)期別、冷藏浸酸或越年孵化蠶種類(lèi)別以及調(diào)查規(guī)模(蠶種批數(shù)、樣區(qū)數(shù)和樣點(diǎn)測(cè)定數(shù)等)等的不同有關(guān)。樣區(qū)數(shù)、樣點(diǎn)數(shù)和樣點(diǎn)測(cè)定數(shù)是不同范圍抽樣代表性的問(wèn)題，對(duì)2批蠶種常規(guī)卵樣點(diǎn)不同測(cè)定數(shù)間的比較表明，在試驗(yàn)樣區(qū)數(shù)和樣點(diǎn)數(shù)條件下測(cè)定數(shù)在15以上時(shí)可能出現(xiàn)顯著差異，或樣點(diǎn)內(nèi)測(cè)定數(shù)在3～15之間的影響較小。

本次調(diào)查的蠶種批數(shù)為14批，克卵粒數(shù)測(cè)定樣本數(shù)為2 967個(gè)，發(fā)現(xiàn)了生產(chǎn)中克卵粒數(shù)的不均勻問(wèn)題。曾有研究對(duì)克卵粒數(shù)不確定性進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)果顯示：相同樣本相同人的3次重復(fù)間，最大極差值和平均極差值分別為20粒和6粒，相同樣本3人分別進(jìn)行的3次重復(fù)間，最大極差值和平均極差值分別為25粒和15粒[8]。假設(shè)25粒的克卵粒數(shù)極差值是測(cè)定方法的極限，則本次調(diào)查中，批內(nèi)的常規(guī)卵和混勻卵具有較好的均勻性，但籠樣卵的均勻性則較差。或者說(shuō)按照桐鄉(xiāng)市蠶業(yè)有限公司目前實(shí)施的生產(chǎn)流程及技術(shù)要求，散卵蠶種可以達(dá)到較高的均勻水平。但是否足夠均勻或符合家蠶微粒子病檢驗(yàn)抽樣的要求，需要更大規(guī)模的調(diào)查和規(guī)律性的把握。

現(xiàn)有家蠶微粒子病成品卵檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)或成文技術(shù)，在應(yīng)用過(guò)程中出現(xiàn)了“不可行”或“可行但需要加大改善力度”等不同的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)或意見(jiàn)[9-12]?，F(xiàn)行家蠶微粒子病成品卵檢驗(yàn)方法在判斷和作業(yè)流程等，不僅在科學(xué)依據(jù)方面存在較大的問(wèn)題，樣本的代表性問(wèn)題也被普遍詬病[13-17]。因此，開(kāi)展散卵一代雜交蠶種的均勻性調(diào)查和評(píng)價(jià)研究，有利于為科學(xué)的家蠶成品卵微粒子病檢驗(yàn)技術(shù)研發(fā)提供依據(jù)。