廖擁民

（湖南省汨羅市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局動物疫病預(yù)防中心，湖南汨羅414400）

豬圓環(huán)病毒2 型（PCV2）在我國豬場廣泛流行，仔豬感染該病后可出現(xiàn)系列臨床癥狀，如仔豬皮炎腎病綜合征和斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征等，母豬則會出現(xiàn)繁殖障礙性疾病，如返情、空懷、流產(chǎn)等[1]。豬偽狂犬病毒（PRV）為皰疹病毒科，可感染多種宿主動物（如豬、牛、羊等），不同發(fā)育階段豬群感染該病引發(fā)臨床癥狀有很大差異，仔豬和保育豬主要表現(xiàn)腹瀉、嘔吐、體溫升高和神經(jīng)癥狀，種豬則出現(xiàn)繁殖障礙性疾病[2]。副豬嗜血桿菌（Hps）為重要的細(xì)菌性病原，健康豬群感染該病原后不表現(xiàn)明顯癥狀，往往處于隱性感染，當(dāng)豬群免疫力下降時（如感染PCV2 和PRRSV 可導(dǎo)致豬群免疫抑制）感染該病可出現(xiàn)系列癥狀，仔豬主要表現(xiàn)為呼吸困難，最終因呼吸衰竭死亡[3]。

近年來，隨著我國生豬養(yǎng)殖不斷發(fā)展，疫病發(fā)生情況逐漸頻繁化和復(fù)雜化，豬群出現(xiàn)兩種或者兩種以上病原混合感染情況十分常見，這導(dǎo)致疫病的診斷與防控較為困難[1]。為提高廣大養(yǎng)殖戶對豬混合感染疫病的診斷水平和防控意識，本文通過對近期汨羅市某豬場發(fā)生的一起典型豬多種病原混合感染疫病的診斷與治療過程進(jìn)行介紹，具體如下：

1 豬場發(fā)病情況

汨羅市某養(yǎng)豬場戶飼養(yǎng)繁殖母豬8 頭，育肥豬19 頭，保育豬及仔豬分別為22 頭和39 頭。近一年以來，該場一直有仔豬或保育豬零星死亡現(xiàn)象，但養(yǎng)殖戶未重視，2019 年8 月，大批仔豬發(fā)病，主要表現(xiàn)為皮炎、精神萎靡、體溫升高、消瘦、腹瀉、嘔吐、呼吸困難等，部分仔豬有神經(jīng)癥狀，如磨牙、發(fā)抖、角弓反張等，也有妊娠母豬出現(xiàn)繁殖障礙。

2 病理變化

對發(fā)病嚴(yán)重或無治療價值仔豬進(jìn)行剖檢，可見病豬體表有大小不一的黑色結(jié)痂，腹股溝、頜下淋巴結(jié)充血并腫大，切面多汁；病豬肺臟實變，胸腔內(nèi)有大量積液和纖維性滲出，導(dǎo)致肺臟和肝臟表面粘都有纖維，且心包內(nèi)有黃色積液；肝臟質(zhì)地變硬，腎臟表面有出血點；此外，部分關(guān)節(jié)腫大仔豬關(guān)節(jié)腔內(nèi)有大量渾濁膿性液體。

3 實驗室診斷

3.1 細(xì)菌性病原分離與鑒定

無菌采集病豬肺臟、淋巴結(jié)、胸腔積液和關(guān)節(jié)腔積液，充分研磨后過濾，以滅菌接種環(huán)蘸取少量濾液劃線接種在大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）表面，37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24～48h，期間定時觀察培養(yǎng)基表面是否出現(xiàn)菌落，若出現(xiàn)菌落，則以革蘭氏染色法對菌落進(jìn)行鑒定，并將純化的分離菌進(jìn)行生化鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基置于恒溫箱內(nèi)24h 后其表面僅出現(xiàn)光滑且無色透明的針尖狀菌落，48h 也未出現(xiàn)其它可視菌落；革蘭氏染色后，可見單個細(xì)菌為桿狀或絲狀，且為革蘭氏陰性菌，進(jìn)一步生化鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)該菌在葡萄糖、硝酸鹽還原試驗中呈陽性，但在氧化酶、木糖等反應(yīng)中為陰性，因此可初步將其判定為Hps[3]。

3.2 細(xì)菌藥敏試驗

在TSA 培養(yǎng)皿表面隨機(jī)挑選6 個Hps 菌落進(jìn)行擴(kuò)繁，用生理鹽水適度稀釋后分別涂布于新的TSA 培養(yǎng)基，待表面菌液快干燥后，在每個培養(yǎng)皿上貼上4 種不同的抗生素藥敏紙片，置于恒溫箱內(nèi)24h 后測量抑菌圈直徑，從而進(jìn)一步衡量致病菌對不同抗生素的耐藥性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，6 個Hps 分離株均對頭孢菌素、頭孢喹肟和環(huán)丙沙星等抗生素高敏，部分菌株對氟苯尼考、卡那霉素和阿莫西林高敏或中敏；對新霉素、阿米卡星、鏈霉素、慶大霉素和青霉素等中敏或低敏。

3.3 病毒性病原檢測

將無菌采集的淋巴結(jié)、肺臟和肝臟等病變組織混合并研磨，按照DNA/RNA 提取試劑盒（購自洛陽愛森生物科技有限公司）對樣品進(jìn)行處理后提取核酸（DNA 和 RNA），并將 RNA 反轉(zhuǎn)錄為 cDNA。采用 PCV2、PRV、豬藍(lán)耳病毒（PRRSV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬瘟病毒（CSFV）熒光定量檢測試劑盒對樣品中病原進(jìn)行檢測，其反應(yīng)體系和反應(yīng)條件參考試劑盒提供說明書，每個檢測反應(yīng)中均設(shè)置陽性和陰性對照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，病料中為PRV 和PCV2 陽性，其它病原檢測均為陰性。

4 綜合評定及緊急防治措施

4.1 診斷結(jié)果

根據(jù)病豬臨床及病理診斷結(jié)果，結(jié)合實驗室診斷結(jié)果可判定該豬場發(fā)生PCV2、PRV 和Hps 混合感染疫情。

4.2 緊急防治措施

根據(jù)診斷結(jié)果，我們建議養(yǎng)殖戶采取以下緊急措施：（1）迅速將疑似發(fā)病或以發(fā)病豬群進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，淘汰并無害化處理發(fā)病嚴(yán)重豬；（2）對發(fā)病豬群緊急免疫接種偽狂犬病毒弱毒疫苗，不同發(fā)育階段豬群接種量和頻率有所差異，具體參考說明書進(jìn)行；（3）對發(fā)病豬群肌注頭孢喹肟注射液（2 mg/kg），每日1 次，連續(xù)使用3 日；（4）在飼料中添加乳酸環(huán)丙沙星（250g/t）、多維（1kg/t）和中草藥粉末（如黃芪和板藍(lán)根等），連續(xù)使用1 周，對全部豬群進(jìn)行飼喂；（4）提高飼養(yǎng)管理水平，定時清掃并消毒欄舍，保持欄舍干燥通風(fēng)等。此外，對發(fā)病豬群進(jìn)行針對性治好，如止咳和降燒等。養(yǎng)殖戶采取以上緊急措施3 周后，該場疫情得到有效控制。

5 討論

近年來，我國大部分豬場發(fā)生疫病原因十分復(fù)雜，同時養(yǎng)殖企業(yè)（戶）對疫病防控能力相對較差，導(dǎo)致多種病原混合感染較為常見，這也導(dǎo)致傳統(tǒng)的臨床診斷無法對疫病發(fā)生原因進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，繼而影響進(jìn)一步的治療與防控[4]。本案例中豬場爆發(fā)嚴(yán)重疫病之前可能就有免疫抑制性疾?。≒CV2）流行，但養(yǎng)殖戶缺乏相關(guān)的防控意識，導(dǎo)致后期豬群感染PRV，繼而繼發(fā)感染Hps，而PRV 和Hps 均為烈性傳染病，可使免疫抑制豬群出現(xiàn)高病亡率，繼而造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

本文采用更加準(zhǔn)確的實驗室診斷技術(shù)（如細(xì)菌分離與鑒定、熒光定量檢測技術(shù)等）對該場病豬病原進(jìn)行診斷，由于實驗室診斷技術(shù)具有高敏感性和準(zhǔn)確性，可降低誤診或漏診的可能性，同時通過對分離菌株進(jìn)行高敏抗生素篩選，根據(jù)實驗室診斷結(jié)果，對豬群進(jìn)行針對性治療與進(jìn)一步防控，可在短期內(nèi)控制疫病的流行，減少相關(guān)經(jīng)濟(jì)損失。 □