錢 琳 王 芳 袁麗芳 池堂春 陳小祥

宮頸癌占所有婦科腫瘤的10.0%左右，多數(shù)為宮頸鱗癌[1]，其發(fā)病早期臨床表現(xiàn)不典型，就診時多為晚期[2-3]。宮頸癌的治療方法主要包括化療、放療、手術(shù)等方式，但是很多患者伴隨有侵襲浸潤，導(dǎo)致治療效果不佳，也是宮頸癌患者治療失敗及死亡的1個主要原因[4-5]?，F(xiàn)代研究表明宮頸鱗癌是多基因共同作用與失衡的結(jié)果，通過檢測腫瘤細(xì)胞特異抗原等進(jìn)行宮頸癌早期診斷宮頸癌已成為了可能[6]。其中P53基因是公認(rèn)的抑癌基因，其突變或失活與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，特別是P53蛋白過度表達(dá)被認(rèn)為與多種腫瘤的預(yù)后顯著相關(guān)[7]。在腫瘤發(fā)生中，P53喪失了保護(hù)基因組完整性的功能，導(dǎo)致了其DNA結(jié)合核心區(qū)域單鏈殘基改變所致[8]。Ki67是目前較為肯定的核增殖標(biāo)志物，也是預(yù)測宮頸炎癥和宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中的參考標(biāo)記物，其表達(dá)程度可反映腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為[9-10]。本文探討了宮頸鱗癌組織中P53、Ki67表達(dá)與侵襲浸潤的相關(guān)性，以闡述宮頸癌侵襲浸潤的機(jī)制，促進(jìn)改善患者的預(yù)后?，F(xiàn)總結(jié)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取本院2010年7月至2019年7月本院婦科收治的52例宮頸鱗癌患者作為病例組，同期選擇正常無宮頸疾病的婦科患者52例作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：病例組經(jīng)病理診斷宮頸鱗癌；對照組為因良性病變行子宮切除術(shù)的具有正常宮頸組織的患者；年齡30～75歲；臨床資料完整；非其他部位轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的宮頸癌病例；本院倫理委員會批準(zhǔn)了此次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠孕婦與哺乳期婦女；組織病理學(xué)不明確；未行手術(shù)或活檢；精神疾病患者。

病例組中年齡35～78歲，平均年齡(54.69±3.19)歲；平均體重指數(shù)(22.19±1.49)kg/m2；臨床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期18例，Ⅲ期22例；分化程度：高分化40例，中分化7例，低分化5例；有侵襲浸潤27例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。對照組中年齡26～79歲，平均年齡(55.02±2.85)歲；平均體重指數(shù)(23.01±2.20)kg/m2。兩組一般在資料差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 P53、Ki67標(biāo)表達(dá)檢測

應(yīng)用美國圣克魯斯生物技術(shù)公司生產(chǎn)的兔抗人P53、Ki67試劑，工作濃度為1∶500。取兩組患者的宮頸標(biāo)本，立即用10%甲醛固定、石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度為2 μm，采用二甲苯、乙醇進(jìn)行透明化與脫水處理，鏡下觀察結(jié)果，以磷酸緩沖鹽溶液代替一抗作為陰性對照。每張切片隨機(jī)觀察5個高倍鏡視野，P53、Ki67染色陽性信號均呈棕黃色。由病理醫(yī)師參照聯(lián)合評分病理診斷分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級診斷。染色強(qiáng)度陰性為0分，染色弱但強(qiáng)于陰性對照為1分，染色清晰為2分，染色強(qiáng)為3分；陽性細(xì)胞數(shù)<10%為0分，10%～30%為1分，31%～60%為2分，>60%為3分，上述兩種評分相加：0～1為(-，陰性)，2分為(+，弱陽性)，3～4分為(++，中陽性)，5～6分為(+++，強(qiáng)陽性)，(+)、(++)、(+++)為陽性表達(dá)。

1.3 調(diào)查與內(nèi)容

調(diào)查所有病例組患者的臨床資料與病理學(xué)資料，記錄對照組入選者的一般資料。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

選擇SPSS 21.00，計量數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，行t檢驗；計數(shù)資料以%表示，用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman分析，影響因素分析采用Logistic回歸分析，檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 P53、Ki67陽性表達(dá)比較

病例組的P53、Ki67表達(dá)陽性率為9.6%和80.8%，對照組為65.4%和19.2%，對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組P53、Ki67陽性表達(dá)比較(例，%)

2.2 宮頸鱗癌中P53、Ki67表達(dá)與侵襲浸潤的相關(guān)性

在病例組52例患者中，侵襲浸潤患者P53、Ki67表達(dá)陽性率為0.0%和92.6%，無侵襲浸潤患者的P53、Ki67表達(dá)陽性率為16.0%和60.0%，對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同宮頸鱗癌組織中P53、Ki67表達(dá)陽性率比較(例，%)

Spearman等級相關(guān)分析顯示：P53、Ki67表達(dá)陽性率與侵襲浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度都有相關(guān)性(P<0.05)，見表3。

表3 宮頸鱗癌P53、Ki67表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性

2.3 影響因素分析

在52例患者中，以侵襲浸潤作為因變量，以臨床資料、P53、Ki67表達(dá)作為自變量，Logistic回歸分析顯示：P53、Ki67、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為影響宮頸鱗癌組織侵襲浸潤的主要因素(P<0.05)，見表4。

表4 影響宮頸鱗癌組織侵襲浸潤的主要因素

3 討論

我國宮頸鱗癌的發(fā)病越趨于年輕化[11]。其治療主要以手術(shù)與放療為主，輔以化療的綜合治療，但仍有20%左右的患者在治療后會復(fù)發(fā)，多數(shù)患者在2年內(nèi)復(fù)發(fā)[12]。當(dāng)前研究顯示宮頸癌5年生存率在70%，其中無侵襲浸潤者達(dá)80%～90%，而局侵襲浸潤者5年生存率在50%左右，為此侵襲浸潤是影響宮頸癌預(yù)后的重要因素[13]?，F(xiàn)代研究表明腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞過度增殖與侵襲，凋亡受抑均相關(guān)[14]。

P53蛋白是1種分子量為53kD的蛋白質(zhì)，失活對惡性腫瘤的形成起重要作用[15]。研究顯示P53可以通過突變失去對細(xì)胞凋亡的正常調(diào)控，從而導(dǎo)致癌變[16]。在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中，P53蛋白的聚積抑制了已經(jīng)癌變的細(xì)胞發(fā)生凋亡[17]。P53基因功能失活是高危性HPV致宮頸癌發(fā)生的1個重要環(huán)節(jié)，外源性野生型P53基因轉(zhuǎn)染入腫瘤細(xì)胞可能會逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的無限增殖[18]。Ki67是目前較為肯定的核增殖標(biāo)志物，其半衰期短，脫離細(xì)胞周期后可迅速講解為檢測腫瘤細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)。HPV感染可導(dǎo)致了細(xì)胞的增殖的加快，使得Ki67表達(dá)陽性細(xì)胞核數(shù)量顯著增多，且隨宮頸病變級別升高而表達(dá)數(shù)量增多[19-20]。本研究顯示病例組的P53、Ki67表達(dá)陽性率為9.6%和80.8%，對照組為65.4%和19.2%，對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義；在病例組52例患者中，侵襲浸潤患者的P53、Ki67表達(dá)陽性率為0.0%和92.6%，無侵襲浸潤患者的P53、Ki67表達(dá)陽性率為16.0%和60.0%，對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義，表明宮頸鱗癌組織伴隨有P53的低表達(dá)與Ki67的高表達(dá)。

促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲及抑制凋亡的細(xì)胞機(jī)制是當(dāng)前研究的重點(diǎn)[21]。宮頸癌的侵襲浸潤與相關(guān)基因的異常表達(dá)有關(guān)，P53可參與修復(fù)外界因素導(dǎo)致的DNA損傷，通過清除有癌變趨勢的細(xì)胞，從而發(fā)揮抑癌作用[22]。P53的過表達(dá)已被證明與HPV轉(zhuǎn)化感染的啟動有顯著相關(guān)性，可以促進(jìn)體內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞分化，產(chǎn)生金屬蛋白酶、內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)膠原酶，增強(qiáng)血管通透性，促進(jìn)腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移[23]。本研究Spearman等級相關(guān)分析顯示宮頸鱗癌組織的P53、Ki67表達(dá)陽性率與侵襲浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度都有相關(guān)性。

由于各種因素的影響，宮頸癌患者確診時大多數(shù)已為中晚期，多伴隨有侵襲浸潤性，導(dǎo)致預(yù)后比較差[6]。本研究顯示Logistic回歸分析顯示宮頸鱗癌組織的P53、Ki67、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為影響宮頸鱗癌組織侵襲浸潤的主要因素。從機(jī)制上分析，P53基因異常與宮頸上皮細(xì)胞的癌變過程密切相關(guān)，宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變組織中存在P53基因突變；P53能阻止細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而起到抑制細(xì)胞增殖的作用。Ki67可誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯，促進(jìn)受損DNA的堆積，阻礙DNA的修復(fù)和細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化與衰老，從而促進(jìn)腫瘤血管增生，從而與組織的侵襲浸潤顯著相關(guān)[24-25]。不過由于病例數(shù)有限，后續(xù)試驗研究仍需增大樣本量，以進(jìn)一步驗證實(shí)驗該結(jié)論。

綜上所述，宮頸鱗癌組織伴隨有P53的低表達(dá)與Ki67的高表達(dá)，與組織的侵襲浸潤顯著相關(guān)，也是導(dǎo)致組織侵襲浸潤的主要因素。