陳謙，嚴(yán)金平

（1.內(nèi)江市種豬場(chǎng)，四川內(nèi)江641007；2.西南大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，重慶榮昌 402460）

本研究對(duì)四川某豬場(chǎng)原有的口蹄疫免疫程序進(jìn)行調(diào)查分析，然后根據(jù)實(shí)際情況對(duì)免疫程序進(jìn)行調(diào)整，采集調(diào)整前后不同日齡的豬血清，用液相阻斷ELISA 法和正向IHA 法分別進(jìn)行FMD（O 型）抗體檢測(cè)和免疫效果評(píng)價(jià)，為豬場(chǎng)制定更加科學(xué)合理的免疫程序提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)血清 來(lái)源于四川某豬場(chǎng)不同日齡的豬。

1.2 主要試劑 豬口蹄疫O 型ELISA 試劑盒購(gòu)于龍巖蚨瑞生物科技公司，批號(hào)：20111221。

豬口蹄疫O 型正向間接血凝抗原、標(biāo)準(zhǔn)陰性和陽(yáng)性血清均購(gòu)于中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)：20111006。

豬口蹄疫O型、亞洲I型二價(jià)滅活油乳劑苗購(gòu)于中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)：20111008。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 調(diào)整前后的口蹄疫免疫程序 詳見(jiàn)表1。

表1 某豬場(chǎng)調(diào)整前后的口蹄疫免疫程序

1.3.2 試驗(yàn)分組及血清采集 將豬場(chǎng)豬群隨機(jī)分成兩批，一批按原來(lái)的免疫程序免疫，另一批按調(diào)整后的免疫程序免疫。分別在3 日齡、25 日齡、50 日齡、90 日齡和120 日齡采血，每個(gè)日齡組隨機(jī)采血30份，將采集的血液樣本于37 ℃靜置1 h，待血清析出，于10 000 r/min 離心5 min，取上層血清加入萬(wàn)分之一硫柳汞防腐，編號(hào)，保存于-20 ℃冰箱中備用。

1.3.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法測(cè)定O型口蹄疫抗體 用ELISA法對(duì)不同日齡的豬血清進(jìn)行口蹄疫抗體檢測(cè)，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作。

1.3.4 正向間接血凝（IHA）法測(cè)定O 型口蹄疫抗體 用正向IHA 法對(duì)不同日齡豬血清進(jìn)行口蹄疫抗體檢測(cè)，嚴(yán)格按照正向間接血凝試劑盒的說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 免疫程序調(diào)整前用ELISA法測(cè)定的FMD（O 型）抗體水平 陽(yáng)性率結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 免疫程序調(diào)整前用正向IHA法測(cè)定的FMD（O型）抗體水平 具體結(jié)果見(jiàn)表3。

2.3 免疫程序調(diào)整前用ELISA法和正向IHA 法檢測(cè)的FMD（O 型）抗體水平比較 通過(guò)ELISA 法和正向IHA 法對(duì)不同日齡的豬血清進(jìn)行FMD（O 型）抗體檢測(cè)，得到被檢豬血清中抗體平均陽(yáng)性率分別為46.67%和71.67%，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表4、圖1。

2.4 免疫程序調(diào)整后用ELISA 法測(cè)定的FMD（O型）抗體水平 具體陽(yáng)性率結(jié)果見(jiàn)表5。

2.5 免疫程序調(diào)整后用正向IHA法測(cè)定的FMD（O型）抗體水平 具體結(jié)果見(jiàn)表6。

2.6 免疫程序調(diào)整后用ELISA 法和正向IHA 法檢測(cè)的FMD（O型）抗體水平比較 詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表7、圖2。

3 分析與討論

3.1 檢測(cè)方法分析 檢測(cè)口蹄疫抗體的方法較多，臨床上以ELISA法和正向IHA法應(yīng)用最廣［1］。ELISA 法的原理是利用酶對(duì)底物的催化反應(yīng)特性，將酶與抗體偶聯(lián)并使之參與到抗原抗體反應(yīng)中，依據(jù)酶催化底物所發(fā)生的變色反應(yīng)程度來(lái)指示和量化抗原抗體的反應(yīng)水平［2］，具有特異、敏感、快速、簡(jiǎn)便、可靠性好、能自動(dòng)化操作、迅速檢測(cè)大量樣品等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已成為國(guó)際上檢測(cè)FMD抗體的常規(guī)方法之一［3］。IHA法的原理是當(dāng)抗原（或抗體）包被于紅細(xì)胞表面，成為致敏的載體，并與相應(yīng)的抗體（或抗原）結(jié)合后，使紅細(xì)胞聚集在一起，出現(xiàn)可見(jiàn)的凝集反應(yīng)［4］。正向IHA 可以檢測(cè)血清中的抗體水平，因其操作簡(jiǎn)便、設(shè)備簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)實(shí)用，現(xiàn)已廣泛用于基層獸醫(yī)部門。

表2 免疫程序調(diào)整前不同日齡豬血清FMD抗體陽(yáng)性率結(jié)果（ELISA法）

表3 免疫程序調(diào)整前不同日齡豬血清FMD抗體檢測(cè)結(jié)果（正向IHA法）

表4 免疫程序調(diào)整前兩種方法檢測(cè)的FMD抗體陽(yáng)性率結(jié)果比較

圖1 免疫程序調(diào)整前兩種方法測(cè)得的豬血清FMD抗體陽(yáng)性率結(jié)果比較

從圖1 和圖2 可看出，用兩種檢測(cè)方法對(duì)相同免疫程序的豬血清口蹄疫抗體進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果雖然有所不同，但兩者基本呈正比關(guān)系。從免疫程序調(diào)整前后的結(jié)果來(lái)看，正向IHA法的平均陽(yáng)性率比ELISA 法高出25 和36.27 個(gè)百分點(diǎn)，差異極顯著（P＜0.01），這與周家喜等［5］得出的IHA法的檢測(cè)合格率比ELISA法高34.7%的結(jié)果基本相符。對(duì)于不具備用ELISA 法檢測(cè)口蹄疫抗體的豬場(chǎng)，可以用IHA 法檢測(cè)作為參考，但要對(duì)豬場(chǎng)的口蹄疫抗體水平和免疫效果有更準(zhǔn)確地了解，最好還是用ELISA法進(jìn)行。

表5 免疫程序調(diào)整后不同日齡豬血清FMD抗體陽(yáng)性率結(jié)果（ELISA法）

表6 免疫程序調(diào)整后不同日齡豬血清FMD抗體檢測(cè)結(jié)果（正向IHA法）

表7 免疫程序調(diào)整后兩種方法檢測(cè)的FMD抗體陽(yáng)性率結(jié)果比較

圖2 免疫程序調(diào)整后兩種方法測(cè)得的豬血清FMD抗體陽(yáng)性率結(jié)果比較

3.2 免疫日齡分析 從表4和表7的結(jié)果可以看出，免疫程序調(diào)整后的抗體陽(yáng)性率明顯比調(diào)整前的有所提高。從ELISA 法檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，免疫程序調(diào)整前豬群在3日齡、25日齡、50日齡、90日齡和120 日齡的抗體陽(yáng)性率分別為50%、30%、40%、50%和55%，調(diào)整后抗體陽(yáng)性率分別達(dá)到了90%、35%、45.45%、61.11%和50%，其平均陽(yáng)性率也從46.67% 提高到了52.22%。從正向IHA 法檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，免疫程序調(diào)整前豬群在3 日齡、25 日齡、50 日齡、90 日齡和120 日齡的抗體陽(yáng)性率分別為70%、54.54%、66.67%、70% 和85%，調(diào)整后抗體陽(yáng)性率分別達(dá)到了82.98%、83.33%、92.86%、95%和95%，其平均陽(yáng)性率也從71.67%提高到了88.49%?？梢?jiàn)免疫程序調(diào)整后免疫效果更好，更適合該豬場(chǎng)口蹄疫的免疫。

3.3 免疫次數(shù)分析 據(jù)王劍峰等［6］報(bào)道，仔豬的母源抗體在28 日齡時(shí)已低于臨界值（1∶128），因此定于28日齡首免、63 日齡二免、91日齡三免，而后測(cè)定其抗體水平。首免1 個(gè)月后抗體并不能達(dá)到有效的保護(hù)力，二免后抗體水平雖然有一定的上升，但仍不能達(dá)到有效保護(hù)力，三免后40 d，抗體水平平均可達(dá)到1∶197.4，具有一定的保護(hù)力，因此建議口蹄疫疫苗進(jìn)行三次免疫。金大春等［7］也提出，豬口蹄疫免疫程序中，二免比一免效果好，但維持時(shí)間不長(zhǎng)，三免才能平穩(wěn)維持較長(zhǎng)時(shí)間的較高抗體水平。而本次試驗(yàn)的豬場(chǎng)原來(lái)在35 日齡首免，90 日齡二免，ELISA和IHA 抗體平均陽(yáng)性率分別為46.67%和71.67%；調(diào)整后在25 日齡首免，50 日齡二免，90日齡三免，ELISA 和IHA 抗體平均陽(yáng)性率分別為52.22%和88.49%。可見(jiàn)三次免疫的抗體陽(yáng)性率明顯優(yōu)于二次免疫，結(jié)果與上述報(bào)道相符。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，免疫程序調(diào)整后的免疫效果更好，推薦在25日齡進(jìn)行口蹄疫首免，50日齡二免，90日齡三免，以后每3個(gè)月免疫一次。