王蕾 張習(xí)本 李鑫

摘要：為更好的保護(hù)地方特色品種——威寧雞，在烏蒙山區(qū)納雍縣選取5個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)，對(duì)其禽流感H5疫苗免疫效果進(jìn)行調(diào)查。結(jié)果表明，5個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)在使用疫苗免疫后抗體陽(yáng)性率直線上升，抗體保護(hù)率好，免疫效果佳，以上5個(gè)場(chǎng)的免疫方法及程序可在納雍縣及周邊區(qū)縣推廣使用，對(duì)保護(hù)烏蒙山區(qū)威寧雞及其他品種雞群養(yǎng)殖具有重要意義。

關(guān)鍵詞：威寧雞;禽流感;免疫效果;烏蒙山區(qū)

中圖分類號(hào)：S858.31? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? 文章編號(hào)：1007-273X（2020）10-0005-02

威寧雞因主要生活在烏蒙山區(qū)，故又稱烏蒙雞，屬中型蛋肉兼用型品種。主產(chǎn)于貴州省畢節(jié)市納雍縣、赫章縣等地。該品種具有耐粗飼、抗寒、抗?jié)瘛⑷赓|(zhì)鮮美、蛋大殼厚和蛋黃品質(zhì)良好等特點(diǎn)，是貴州省優(yōu)良特色地方畜禽品種資源。

禽流感是養(yǎng)雞生產(chǎn)中常見的病毒性疾病，屬甲型流感病毒，不同品種、年齡段的雞均可感染，雞群一旦感染流感病毒，短時(shí)間內(nèi)會(huì)傳播至附近雞場(chǎng)，傳播速度極快，給家禽養(yǎng)殖業(yè)造成較大損失[1]。禽流感臨床可分為最急性型、急性型和溫和型3種，最急性型病毒致病力最強(qiáng)，感染雞死亡率非常高，急性型臨床發(fā)病最多，病雞主要表現(xiàn)呼吸道癥狀和全身癥狀，死亡率較低，溫和型常為隱形感染，臨床癥狀不明顯[2]。

因獨(dú)特的地理優(yōu)勢(shì)和悠久的畜牧文化，納雍縣是貴州省畢節(jié)市家禽養(yǎng)殖大縣，目前全縣家禽存欄量266萬(wàn)羽。同時(shí)，納雍縣也是威寧雞的重要產(chǎn)區(qū)。為了更好保護(hù)地方優(yōu)勢(shì)特色品種資源，維護(hù)家禽養(yǎng)殖業(yè)的良好發(fā)展，助力畢節(jié)試驗(yàn)區(qū)按時(shí)打贏脫貧攻堅(jiān)戰(zhàn)。本調(diào)查將納雍縣5個(gè)育有威寧雞的規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)作為調(diào)查目標(biāo)，對(duì)調(diào)查場(chǎng)的禽流感H5亞型血清抗體進(jìn)行檢測(cè)。評(píng)估春防免疫結(jié)果，為納雍地區(qū)禽流感防控提供理論基礎(chǔ)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 受試養(yǎng)殖場(chǎng)和農(nóng)戶? 分別在納雍縣維新鎮(zhèn)、厙東關(guān)彝族苗族白族鄉(xiāng)、化作苗族彝族鄉(xiāng)、羊場(chǎng)苗族彝族鄉(xiāng)隨機(jī)選取5家威寧雞規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)，每場(chǎng)選取50羽雛雞進(jìn)行禽流感疫苗免疫效果調(diào)查。通過當(dāng)?shù)匦竽凉芾聿块T了解到，以上5家規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)均使用了哈爾濱某疫苗公司生產(chǎn)的重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗。

1.1.2? 標(biāo)準(zhǔn)抗原? 禽流感H5亞型標(biāo)準(zhǔn)抗原購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，生產(chǎn)批號(hào)為2018011。

1.1.3? 主要材料? 無(wú)菌采血管、單道可微量移液器、離心機(jī)、96孔V型微量血凝板、振蕩器。

1.2? 方法

1.2.1? 基本情況? 以上5個(gè)雞場(chǎng)均在當(dāng)?shù)匦竽琉B(yǎng)殖部門的指導(dǎo)下于4月5日進(jìn)行禽流感免疫工作，且均使用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗。一個(gè)月后，即5月5日進(jìn)行加強(qiáng)免疫。

1.2.2? 血液樣品采集? 第1次采血：首次免疫前2 d進(jìn)行第一次采血，每個(gè)場(chǎng)選取50羽威寧雛雞進(jìn)行無(wú)菌采血，用于測(cè)量母源抗體。第2次采血：在首免30 d后對(duì)受試雛雞進(jìn)行采血。第3次采血：在加強(qiáng)免疫后30 d后對(duì)受試雛雞進(jìn)行采血。血液均采集在無(wú)菌采血管中，-4 ℃保存并快速送至實(shí)驗(yàn)室。

1.2.3? 血清抗體檢測(cè)

（1）血清制備。取2 mL血液于血樣試管中，2 000 r/min離心5 min。觀察到血球沉淀，血清懸浮于血球上層。無(wú)菌吸出血清置于無(wú)菌EP管中保存。沉積的紅細(xì)胞用PBS配制成1%的紅細(xì)胞懸液[3]。

（2）血凝抑制試驗(yàn)。反應(yīng)在96孔V型血凝板上進(jìn)行，每排檢驗(yàn)1個(gè)樣品。每排1～12孔均加入50 μL生理鹽水，第1孔中加入被檢血清50 μL，然后倍比稀釋至第11孔，最后棄50 μL。第1孔至第12孔加入4單位標(biāo)準(zhǔn)禽流感抗原50 μL，第12孔為病毒對(duì)照。每孔加入1%的雞紅細(xì)胞懸液50 μL。振蕩均勻，后置于37 ℃恒溫箱中30 min，然后進(jìn)行結(jié)果判定。以紅細(xì)胞100%不凝集的反應(yīng)孔判為該血清的HI抑制價(jià)。

2? 結(jié)果與分析

通過血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)，5個(gè)規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)（命名為A、B、C、D、E場(chǎng)）在進(jìn)行免疫前后禽流感H5抗體情況如表1、表2、表3所示。根據(jù)農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)，禽流感血凝抑制抗體效價(jià)HI（log2）≥4為免疫合格。試驗(yàn)結(jié)果顯示，免疫前5個(gè)規(guī)模場(chǎng)的威寧雞禽流感H5母源抗體水平均較低，96.8%受試威寧雞母源抗體水平未達(dá)4Log2，其中4個(gè)場(chǎng)抗體陽(yáng)性率均低于5%，尤其是E場(chǎng)母源抗體水平最低，為0（表1）。首次免疫后，5個(gè)場(chǎng)強(qiáng)制免疫疫苗抗體陽(yáng)性率顯著提高，A場(chǎng)抗體水平達(dá)到7log2，B、C、E場(chǎng)均達(dá)6log2，D場(chǎng)達(dá)5log2，抗體陽(yáng)性率均上升至50%以上，其中4個(gè)場(chǎng)上升至75%以上，尤其是A、E場(chǎng)抗體陽(yáng)性率高達(dá)90%及以上（表2）。加強(qiáng)免疫后，A、C、E場(chǎng)抗體水平達(dá)到8log2，B和D場(chǎng)達(dá)6log2，A、B、C、E場(chǎng)抗體檢測(cè)陽(yáng)性率均達(dá)到95%以上，A場(chǎng)達(dá)到100%（表3）。

綜合分析，免疫前5個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)禽流感H5母源抗體均很低，抗體陽(yáng)性率均在10%以下，難以達(dá)到保護(hù)效果。在進(jìn)行首次免疫后，受試場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率均快速提高，A和E場(chǎng)高達(dá)90%及以上，疫苗保護(hù)率平均可達(dá)80%。加強(qiáng)免疫后，5個(gè)場(chǎng)抗體陽(yáng)性率均穩(wěn)步上升，疫苗保護(hù)率平均達(dá)到96.8%，A、C、E場(chǎng)疫苗免疫抗體陽(yáng)性率均在98%及以上（圖1）。因此，受試場(chǎng)疫苗免疫的抗體產(chǎn)生水平和保護(hù)率均達(dá)到理想水平。

3? 討論

禽流感是由正黏病毒科、流行性病毒屬A型流感病毒引起的一類傳染病，被世界衛(wèi)生組織列為A類傳染病[4]。據(jù)納雍縣畜牧部門介紹，該地多呈溫和型感染，且近2年來(lái)多呈H5亞型暴發(fā)，臨床表現(xiàn)呼吸道癥狀，雞產(chǎn)蛋量下降，器官出血性病變等。給當(dāng)?shù)丶仪蒺B(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大損失。

目前，高致病性禽流感不予治療，溫和型禽流感的治療也局限在中藥和抗病毒因子的生物制劑，且治療痊愈速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于傳播速度。所以該病的控制方式首選疫苗防控，免疫效果好和抗體保護(hù)率高的疫苗對(duì)防控禽流感具有非常重要的意義。對(duì)納雍縣范圍內(nèi)5個(gè)規(guī)模場(chǎng)威寧雞禽流感的抗體效價(jià)進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果表明重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗能有效刺激威寧雞產(chǎn)生禽流感H5抗體。尤其是在加強(qiáng)免疫后，禽流感H5抗體陽(yáng)性率均在90%以上，對(duì)雞群起到非常好的保護(hù)作用。

防治雞禽流感必須進(jìn)行規(guī)范的疫苗免疫，聽取當(dāng)?shù)匦竽敛块T的建議，了解當(dāng)?shù)厍萘鞲胁《镜姆肿由飳W(xué)特征和流行特點(diǎn)后，選擇更加合適的疫苗和免疫程序。規(guī)范免疫、科學(xué)管理、加強(qiáng)監(jiān)控，能在很大程度上避免禽流感的發(fā)生，為當(dāng)?shù)鼐G色規(guī)范家禽養(yǎng)殖增添一道保護(hù)屏障。

參考文獻(xiàn)：

[1] 許文珍.雞禽流感流行特點(diǎn)與防治措施分析[J].江西畜牧獸醫(yī)雜志，2018（5）：42-43.

[2] 李亞玲.雞禽流感病防治[J].畜牧獸醫(yī)科學(xué)，2019（23）：76-77.

[3] 曹洪敬，顏世敢，王文志，等.微量血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)雞IBV抗體水平的研究[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，1999（1）：44-45.

[4] 呂? 冬.雞禽流感防治[J].中國(guó)畜禽種業(yè)，2017（4）：157-158.