文/武國(guó)兆 董心雨

黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）是我國(guó)淡水養(yǎng)殖中一種重要的經(jīng)濟(jì)魚類，其肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美，氨基酸含量達(dá)14.79%、蛋白質(zhì)含量達(dá)15.37%、脂肪含量達(dá)16.1%，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，深受消費(fèi)者的喜愛。近年來，隨著養(yǎng)殖集約化程度的提高，黃顙魚暴發(fā)了多種疾病，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，其中以細(xì)菌性疾病最為嚴(yán)重，已報(bào)道過的細(xì)菌性病原菌有遲鈍愛德華氏菌（Edwarsiella tarda）、蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus）、鮰愛德華氏菌、溫和氣單胞菌（Aeromonas sobria）等。目前，防治細(xì)菌性疾病主要依靠抗生素，但是長(zhǎng)期使用抗生素會(huì)使生物體內(nèi)產(chǎn)生耐藥菌株，并損害體內(nèi)正常微生物，引起新的疾病。除此之外，抗生素會(huì)在魚體和水環(huán)境中殘留，對(duì)人類存在潛在危害。

為更好地防治黃顙魚細(xì)菌性疾病，尋找廣譜、高效殺菌藥物顯得迫在眉睫。消毒劑對(duì)防治細(xì)菌性疾病可以起到良好作用，且通常不會(huì)有殘留問題?，F(xiàn)在消毒劑的種類越來越多，選擇安全有效的消毒劑可以減少因病害爆發(fā)及濫用抗生素帶來的損失，為養(yǎng)殖戶增加收益。

本文選用聚六亞甲基胍、高鐵酸鉀、戊二醛、復(fù)合季銨鹽和過硫酸氫鉀復(fù)合鹽5種消毒劑，采用二倍稀釋法得出對(duì)黃顙魚溫和氣單胞菌和弗氏檸檬酸桿菌的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度，篩選出適合黃顙魚健康養(yǎng)殖的高效消毒劑。

一、材料與方法

（一）材料

5種消毒劑聚六亞甲基胍、高鐵酸鉀、戊二醛、復(fù)合季銨鹽、過硫酸氫鉀復(fù)合鹽購(gòu)自湖北省武漢市，試驗(yàn)中溫和氣單胞菌和弗氏檸檬酸桿菌分離自湖北省荊州市患病黃顙魚，腦心浸液肉湯培養(yǎng)基和腦心浸液培養(yǎng)基購(gòu)自上海博微生物有限公司。

（二）活化菌種及菌懸液制備

在超凈工作臺(tái)中用灼燒過的接種環(huán)取溫和氣單胞菌和弗氏檸檬酸桿菌在腦心浸液平板上劃線，將接種溫和氣單胞菌平板置恒溫培養(yǎng)箱中，28℃條件下培養(yǎng)24h，挑取單克隆菌落接種至腦心浸液肉湯培養(yǎng)基后置于28℃，180r/min的恒溫?fù)u床上培養(yǎng)10h～12h。將接種弗氏檸檬酸桿菌平板置恒溫培養(yǎng)箱中，30℃恒溫下培養(yǎng)24h，挑取單克隆菌落接種至腦心浸液肉湯培養(yǎng)基后置于30℃，在180r/min的恒溫?fù)u床上培養(yǎng)24h。將兩種菌懸液用無菌生理鹽水分別稀釋至108CFU/mL。

（三）消毒劑對(duì)兩種致病菌的最小抑菌濃度（MIC）及最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定

用滅菌過的蒸餾水將5種消毒劑調(diào)配至1000mg/L的母液，并用0.22μm的過濾器除菌，采用二倍稀釋法，在裝有3mL滅菌腦心浸液肉湯培養(yǎng)基的試管中進(jìn)行梯度稀釋，使消毒劑在腦心浸液肉湯培養(yǎng)基中的含量分別為500mg/L、250mg/L、125mg/L、62.5mg/L、31.25mg/L、16mg/L、8mg/L、4mg/L、2mg/L、1mg/L，共10個(gè)濃度。

向各濃度梯度的試管中加入0.1mL菌懸液，陰性對(duì)照：向裝有3mL滅菌腦心浸液肉湯培養(yǎng)基試管中加入0.1mL滅菌蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照：向裝有3mL滅菌腦心浸液肉湯培養(yǎng)基試管中加入0.1mL濃度為菌懸液，各管設(shè)3個(gè)平行。將試管全部震蕩混勻后放置在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，溫和氣單胞菌放置在28℃條件培養(yǎng)，弗氏檸檬酸桿菌放置在30℃條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。

根據(jù)其生長(zhǎng)情況，當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照有菌（渾濁），陰性對(duì)照無菌（澄清），試驗(yàn)組中無菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度即是該消毒劑對(duì)致病菌的MIC。挑取高于MIC以上的梯度培養(yǎng)物，分別吸取0.1mL涂布于腦心浸液平板上，放置28℃或30℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)24h觀察有無細(xì)菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)基中無細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度即是該消毒劑對(duì)致病菌的MBC。

表1 5種消毒劑對(duì)溫和氣單胞菌的抑制結(jié)果

表2 5種消毒劑對(duì)溫和氣單胞菌的MIC、MBC

二、結(jié)果與分析

（一）5種消毒劑對(duì)溫和氣單胞菌的MIC和MBC

通過觀察各試驗(yàn)組的生長(zhǎng)情況，與陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照比較混濁度，得出消毒劑對(duì)溫和氣單胞菌的抑制結(jié)果（見表1）和MIC、MBC（見表2）。從表1可知，各試驗(yàn)組出現(xiàn)渾濁和澄清的現(xiàn)象是由于消毒劑在不同濃度下對(duì)致病菌的抑制結(jié)果。結(jié)果顯示，聚六亞甲基胍對(duì)溫和氣單胞菌的抑菌效果最好，最低有效濃度為1mg/L、MIC為2mg/L、MBC為2mg/L；其次為高鐵酸鉀，最低有效濃度為4mg/L、MIC為8mg/L、MBC為16mg/L；過硫酸氫鉀復(fù)合鹽的最低有效濃度為8mg/L、MIC為16mg/L、MBC為31.25mg/L；戊二醛的最低有效濃度為62.5mg/L、MIC為125mg/L、MBC為500mg/L；復(fù)合季銨鹽最低有效濃度為250mg/L、MIC為500mg/L、MBC為500mg/L。以上結(jié)果表明消毒劑殺滅溫和氣單胞菌的效果依次為聚六亞甲基胍、高鐵酸鉀、過硫酸氫鉀復(fù)合鹽、戊二醛、復(fù)合季銨鹽，優(yōu)先選擇聚六亞甲基胍。

（二）5種消毒劑對(duì)弗氏檸檬酸桿菌的MIC和MBC

通過觀察各試驗(yàn)組的生長(zhǎng)情況，與陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照比較混濁度，得出消毒劑對(duì)弗氏檸檬酸桿菌的抑制結(jié)果（見表3）和MIC、MBC（見表4）。結(jié)果顯示，聚六亞甲基胍對(duì)溫和氣單胞菌的抑菌效果最好，最低有效濃度為4mg/L、MIC為8mg/L、MBC為8mg/L；其次為過硫酸氫鉀復(fù)合鹽的最低有效濃度為16mg/L、MIC為62.5mg/L、MBC為125mg/L；復(fù)合季銨鹽最低有效濃度為62.5mg/L、MIC為125mg/L、MBC為125mg/L；戊二醛的最低有效濃度為125mg/L、MIC為250mg/L、MBC為500mg/L；高鐵酸鉀最低有效濃度為125mg/L、MIC為250mg/L、MBC值未確定。以上結(jié)果表明消毒劑殺滅弗氏檸檬酸桿菌的效果依次為聚六亞甲基胍、過硫酸氫鉀復(fù)合鹽、復(fù)合季銨鹽、戊二醛、高鐵酸鉀，優(yōu)先選擇聚六亞甲基胍。

三、討論

為減少黃顙魚養(yǎng)殖過程中由細(xì)菌性疾病引起的經(jīng)濟(jì)損失，篩選高效的消毒劑，本試驗(yàn)選取5種常用消毒劑進(jìn)行研究，結(jié)果表明，聚六亞甲基胍對(duì)溫和氣單胞菌和弗氏檸檬酸桿菌的抑制效果最好，MIC為2mg/L、8mg/L，MBC為2mg/L、8mg/L，比劉志軒研究抑制弧菌的濃度高，這說明本試驗(yàn)分離的病原菌對(duì)聚六亞甲基胍消毒劑的耐受性更高。高鐵酸鉀、過硫酸氫鉀復(fù)合鹽對(duì)溫和氣單胞菌的抑制效果中等，比李明研究結(jié)果偏高；戊二醛、復(fù)合季銨鹽對(duì)溫和氣單胞菌的抑制效果較差，與韋艷研究結(jié)果一致。過硫酸氫鉀復(fù)合鹽、復(fù)合季銨鹽、戊二醛、對(duì)弗氏檸檬酸桿菌的抑制效果中等，高鐵酸鉀對(duì)弗氏檸檬酸桿菌的抑制效果較差，與金娟的研究結(jié)果一致。

表3 5種消毒劑對(duì)弗氏檸檬酸桿菌抑制結(jié)果

表4 5種消毒劑對(duì)弗氏檸檬酸桿菌的MIC、MBC

聚六亞甲基胍是一種環(huán)保型高分子聚合物，殺菌效果強(qiáng)，且價(jià)格便宜、無污染，不會(huì)對(duì)養(yǎng)殖生物和單胞藻造成傷害，是新型的安全、高效消毒劑。因此，在由溫和氣單胞菌和弗氏檸檬酸桿菌引起的黃顙魚細(xì)菌性疾病的防控上，可優(yōu)先選用聚六亞甲基胍消毒劑，過硫酸氫鉀復(fù)合鹽為次選。

本研究對(duì)選用消毒劑防治黃顙魚溫和氣單胞菌和弗氏檸檬酸桿菌引起的疾病提供了參考依據(jù)，可有效減少盲目用藥帶來的危害，促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)綠色高質(zhì)量發(fā)展。