白敏，成映霞，段永強(qiáng)，王麗園，楊曉軼，鞏子漢，馬駿

香砂六君子湯對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜相關(guān)因子水平的影響

白敏1，成映霞1，段永強(qiáng)1，2，王麗園1，3，楊曉軼1，鞏子漢1，馬駿1

1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000；3.蒼溪縣中醫(yī)醫(yī)院，四川 蒼溪 628400

觀察香砂六君子湯對(duì)慢性萎縮性胃炎（CAG）大鼠胃黏膜誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）表達(dá)及下游一氧化氮（NO）、P選擇素（SELP）、白細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1（LECAM-1）、內(nèi)皮素-1（ET-1）含量的影響，探討其治療CAG的分子機(jī)制。將SPF級(jí)健康Wistar大鼠120只隨機(jī)分為空白組和造模組，造模組大鼠采用綜合法（MNNG＋雷尼替丁＋饑飽失常法）復(fù)制CAG模型，成模后按隨機(jī)數(shù)字表法將其分為模型組、維酶素組和香砂六君子湯高、中、低劑量組。模型組和空白組每日給予2 mL蒸餾水灌胃，香砂六君子湯高、中、低劑量組分別給予24、12、6 g/（kg?d）香砂六君子湯藥液灌胃，維酶素組給予0.3 g/（kg?d）維酶素連續(xù)灌胃，連續(xù)120 d。觀察大鼠一般生存狀況和胃黏膜病理學(xué)變化，采用RT-qPCR、Western blot分別檢測(cè)CAG大鼠胃黏膜組織iNOS、eNOS基因和蛋白的表達(dá)，采用ELISA檢測(cè)大鼠胃黏膜組織NO、SELP、LECAM-1、ET-1含量。與空白組比較，模型組大鼠一般生存狀況相對(duì)較差，胃黏膜變薄，固有層腺體減少，腺體疏松、排列不規(guī)則，散在大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，iNOS基因和蛋白表達(dá)顯著升高，eNOS基因和蛋白表達(dá)顯著降低，胃黏膜組織NO、SELP、LECAM-1、ET-1含量顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）；與模型組比較，香砂六君子湯高、中、低劑量組和維酶素組大鼠一般生存狀況不同程度改善，胃黏膜仍較薄，固有層腺體增多，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減輕，胃黏膜組織eNOS基因和蛋白表達(dá)顯著升高，iNOS基因和蛋白表達(dá)顯著降低，NO、SELP、LECAM-1、ET-1含量顯著降低，其中香砂六君子湯高劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。香砂六君子湯可能通過(guò)下調(diào)CAG大鼠胃黏膜組織iNOS表達(dá)、上調(diào)eNOS表達(dá)，達(dá)到抑制下游因子NO、SELP、LECAM-1、ET-1分泌，進(jìn)而調(diào)節(jié)CAG大鼠胃黏膜炎性微環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，發(fā)揮保護(hù)胃黏膜作用。

香砂六君子湯；慢性萎縮性胃炎；一氧化氮；誘導(dǎo)型一氧化氮合酶；內(nèi)皮型一氧化氮合酶；P選擇素；白細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1；內(nèi)皮素-1；大鼠

慢性萎縮性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）多因素體脾胃虛弱、飲食不節(jié)、情志失調(diào)、感受外邪導(dǎo)致中焦氣機(jī)不利、升降失司而引發(fā)，是臨床常見(jiàn)消化系統(tǒng)疾病之一。CAG臨床表現(xiàn)為胃脘痞滿、疼痛、納呆、噯氣、大便不調(diào)、消瘦等癥狀。近年相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，CAG發(fā)生發(fā)展與機(jī)體能量代謝、炎癥、免疫功能障礙及氧化損傷密切相關(guān)，并隨著疾病進(jìn)展，不同程度損傷消化系統(tǒng)、血液系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)等[1-3]。目前，西醫(yī)對(duì)阻斷CAG發(fā)展進(jìn)程尚無(wú)特效療法，而中醫(yī)診治該病有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。中醫(yī)認(rèn)為，CAG病機(jī)為脾胃虛弱。香砂六君子湯是治療脾胃虛弱的經(jīng)典方，臨床上運(yùn)用香砂六君子湯加減治療CAG取得較好療效[4-5]。本課題組前期實(shí)驗(yàn)研究表明，香砂六君子湯通過(guò)核因子-κB（NF-κB）的活化，調(diào)節(jié)炎癥因子白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等分泌，發(fā)揮減輕胃黏膜炎癥的作用；通過(guò)上調(diào)胃組織PTEN表達(dá)，下調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、Akt、PI3K表達(dá)，發(fā)揮治療CAG的作用[6-7]。此外，研究顯示，NF-κB廣泛參與各種組織及細(xì)胞的炎性反應(yīng)進(jìn)程，其介導(dǎo)產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，如炎癥因子、趨化因子、黏附分子等，以及次級(jí)炎癥介質(zhì)的酶，如環(huán)氧酶、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）等[8]；也有研究表明，在胃潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎等消化系統(tǒng)疾病中檢測(cè)到上述因子、酶等表達(dá)異常[9-10]。故本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步觀察香砂六君子湯對(duì)CAG大鼠生存狀況、胃黏膜組織iNOS、eNOS基因和蛋白表達(dá)及一氧化氮（NO）、P選擇素（SELP）、白細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1（LECAM-1）、內(nèi)皮素-1（ET-1）含量的影響，探討其治療CAG的分子作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

2月齡SPF級(jí)Wistar大鼠120只，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）g，購(gòu)自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（甘）2015-0002。飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室，相對(duì)濕度45%～55%，室溫（23±2）℃，12 h光暗周期循環(huán)，常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由攝食飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 藥物、試劑與儀器

香砂六君子湯飲片均購(gòu)自蘭州復(fù)興厚藥材有限責(zé)任公司，人參（生曬參）、炒白術(shù)、茯苓、陳皮、姜半夏、砂仁、木香、生姜和甘草按6∶12∶12∶5∶6∶5∶4∶12∶4比例配制，常規(guī)方法煎煮，濃縮冷藏備用；維酶素片，新鄉(xiāng)恒久遠(yuǎn)藥業(yè)有限公司，批號(hào)20160518；雷尼替丁，廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)151101。MNNG，梯希愛(ài)化成工業(yè)發(fā)展有限公司，批號(hào)75F7I-TF；DMSO，上海惠頻生物科技有限公司，批號(hào)520C0320。氯化鈉，廣東省鹽業(yè)集團(tuán)廣州有限公司，批號(hào)520C0320。大鼠NO ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)Lot202004；大鼠LECAM-1 ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)Lot201902；大鼠SELP ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)Lot201902；大鼠ET-1 ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)Lot201908，均購(gòu)自上海將來(lái)實(shí)業(yè)股份有限公司。GAPDH抗體，ImmunoWay公司，批號(hào)LotB1501；iNOS抗體，abcom公司，批號(hào)LotGR209283-2；eNOS抗體，abcom公司，批號(hào)LotGR211513-4；HRP-羊抗兔IgG，博士德生物工程有限公司，批號(hào)LotBST13C23C54。BIOMATE 3S核酸蛋白測(cè)定儀（美國(guó)BIO-RAD公司），S1000TM反轉(zhuǎn)錄儀（美國(guó)BIO-RAD公司），CFX96TMOptics Module PCR儀（美國(guó)BIO-RAD公司），Chemi DOC XRS+凝膠成像分析系統(tǒng)（美國(guó)BIO-RAD公司），Benchmark Plus酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（美國(guó)BIO-RAD公司）。

1.3 造模、分組和給藥

參照文獻(xiàn)[11]采用綜合法制作CAG大鼠模型。①使用DMSO作為溶劑將MNNG溶解，配制成20%MNNG溶液，再與水按1∶2000比例配制，給予大鼠自由飲用，大鼠飲水瓶采用錫箔紙包裹避光。②使用85%NaCl溶液溶解雷尼替丁，按0.03 g/kg大鼠體質(zhì)量灌胃。③饑飽失常法：2 d足量喂養(yǎng)，1 d禁食不禁水。連續(xù)造模16周，造模8周后，每2周隨機(jī)抽取造模大鼠并處死取胃進(jìn)行病理檢查，評(píng)價(jià)CAG模型復(fù)制是否成功。將120只Wistar大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法挑選20只為空白組，其余100只大鼠按上述方法造模，造模成功后再采用隨機(jī)數(shù)字表法將CAG大鼠分為模型組、維酶素組和香砂六君子湯高、中、低劑量組，每組16只（除去抽檢大鼠及死亡大鼠）。空白組和模型組每日予2 mL蒸餾水灌胃，香砂六君子湯高、中、低劑量組分別予24、12、6 g/（kg?d）香砂六君子湯（相當(dāng)于60 kg成人劑量的12、6、3倍），維酶素組予0.30 g/（kg?d）維酶素（相當(dāng)于60 kg成人劑量的6倍），連續(xù)120 d。

1.4 標(biāo)本采集與處理

于末次灌胃給藥后，大鼠禁食不禁水24 h，以10%水合氯醛溶液腹腔注射將大鼠麻醉處死，自胸骨劍突下沿腹中線剪開(kāi)，完整取出胃部，沿胃大彎側(cè)剪開(kāi)，生理鹽水清洗干凈后，剪取部分組織存放于4%多聚甲醛，以備病理組織學(xué)評(píng)估；剩余組織-80 ℃冰箱凍存，以備胃組織基因、蛋白表達(dá)及相關(guān)細(xì)胞因子含量測(cè)定。

1.5 一般觀察

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，觀察大鼠整體精神狀態(tài)、活動(dòng)狀況、毛發(fā)是否光澤、體質(zhì)量和進(jìn)食量等。

1.6 胃黏膜組織病理學(xué)檢查

取固定后的胃組織，石蠟包埋、切片，依次進(jìn)行二甲苯梯度脫蠟至水，蘇木素染色，自來(lái)水沖洗，鹽酸酒精分化，弱堿性水溶液返藍(lán)，自來(lái)水沖洗，伊紅染色，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。顯微鏡下觀察大鼠胃黏膜損傷狀況。

1.7 RT-qPCR檢測(cè)胃黏膜組織誘導(dǎo)型一氧化氮合酶、內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因表達(dá)

取0.1 g胃黏膜組織，加600 μL Trizol提取總RNA。超微光分光光度計(jì)測(cè)定其濃度及OD260/OD280比值，濃度統(tǒng)一調(diào)至1500 ng/μL，OD260/OD280比值均在1.8～2.0。反轉(zhuǎn)錄試劑盒配制20 μL體系，將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA以備PCR擴(kuò)增反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)所用引物由寶生物公司合成。iNOS F：5’-TGGTTTGAAACTT CTCAGCCAC-3’，R：5’-CACCAACTCTGCTGTTCT CC-3；eNOS F：5’-CTTTCGGAAGGCGTTTGACC-3’，R：5’-CCATTGCCAAATGTGCTGGT-3’；GAPDH F：5’-AGTGCCAGCCTCGTCTCATA-3’，R：5’-AGAGAA GGCAGCCCTGGTAA-3’。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系、上樣以及反應(yīng)條件嚴(yán)格按照Promega公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。選取GAPDH為內(nèi)參基因，擴(kuò)增過(guò)程嚴(yán)格按照TaKaRa公司RT-qPCR試劑盒說(shuō)明書(shū)設(shè)置，相同基因每組設(shè)4次重復(fù)、6次平行實(shí)驗(yàn)，得到各擴(kuò)增反應(yīng)Ct值。采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量：ΔΔCt＝（測(cè)試組目的基因Ct值－測(cè)試組內(nèi)參基因Ct值）－（對(duì)照組目的基因Ct值－對(duì)照組內(nèi)參基因Ct值），相對(duì)表達(dá)量為2-ΔΔCt。

1.8 Western blot檢測(cè)胃黏膜組織誘導(dǎo)型一氧化氮合酶、內(nèi)皮型一氧化氮合酶蛋白表達(dá)

取0.1 g胃潰瘍病灶組織，加600 μL組織裂解液（588 μL REPA＋12 μL PMSF），剪碎、勻漿、離心,取上清液50 μL，BCA試劑盒對(duì)蛋白提取液進(jìn)行定量分析，上樣，進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，120 V轉(zhuǎn)膜，室溫封閉3 h，一抗4 ℃冰箱孵育過(guò)夜，TBST洗膜3次，每次搖床振搖10 min，二抗室溫孵育2 h，TBST洗膜3次，每次搖床振搖10 min，最后采用化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行化學(xué)發(fā)光，顯影后用Bio-RAD Quantity one圖像分析軟件進(jìn)行掃描分析，并使用Image J軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.9 ELISA檢測(cè)胃黏膜組織一氧化氮、P選擇素、白細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1和內(nèi)皮素-1含量

采用大鼠NO、LECAM-1、SELP、ET-1 ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定胃黏膜組織NO、LECAM-1、SELP、ET-1含量，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，配制組織勻漿液，離心，取上清液備用，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，使用酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算各組樣品濃度。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般狀況

空白組大鼠始終表現(xiàn)為反應(yīng)靈敏，皮毛濃密光澤，活動(dòng)及攝食量正常，體質(zhì)量正常增長(zhǎng)；模型組大鼠一般生存狀況較差，造模6周后大鼠倦臥嗜睡，被毛稀疏失澤，攝食量減少，反應(yīng)遲鈍，每日攝食量和體質(zhì)量增加減緩；各藥物干預(yù)組大鼠10周后精神狀態(tài)開(kāi)始恢復(fù)正常，上述表現(xiàn)有不同程度的減輕，尤其以香砂六君子湯高劑量組改善明顯。

2.2 香砂六君子湯對(duì)模型大鼠胃黏膜組織形態(tài)的影響

空白組大鼠胃黏膜組織正常，上皮層、肌層和漿膜層結(jié)構(gòu)明顯，胃黏膜上皮細(xì)胞呈單層柱狀排列，未見(jiàn)明顯異型細(xì)胞，固有層未見(jiàn)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組大鼠胃黏膜變薄，固有層腺體減少，腺體疏松、排列不規(guī)則，散在大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，再生上皮細(xì)胞出現(xiàn)異型性；各藥物干預(yù)組均可見(jiàn)明顯胃黏膜細(xì)胞再生補(bǔ)充，異型細(xì)胞減少，固有層腺體增多，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。見(jiàn)圖1。

2.3 香砂六君子湯對(duì)模型大鼠胃黏膜組織誘導(dǎo)型一氧化氮合酶、內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因和蛋白表達(dá)的影響

與空白組比較，模型組大鼠胃黏膜組織iNOS基因和蛋白表達(dá)顯著升高，eNOS基因和表達(dá)顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）；與模型組比較，香砂六君子湯各劑量組和維酶素組大鼠胃黏膜組織iNOS基因和蛋白表達(dá)不同程度降低，eNOS基因和蛋白表達(dá)不同程度升高，其中香砂六君子湯高劑量組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1、圖2。

表1 各組大鼠胃黏膜組織eNOS、iNOS基因和蛋白表達(dá)比較（±s）

注：與空白組比較，*＜0.05；與模型組比較，△＜0.05

注：A.空白組；B.模型組；C.香砂六君子湯高劑量組；D.香砂六君子湯中劑量組；E.香砂六君子湯低劑量組；F.維酶素組

2.4 香砂六君子湯對(duì)模型大鼠胃黏膜組織一氧化氮、P選擇素、白細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1和內(nèi)皮素-1含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠胃黏膜組織NO、SELP、LECAM-1、ET-1含量顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）；與模型組比較，香砂六君子湯各劑量組和維酶素組大鼠胃黏膜組織NO、SELP、LECAM-1、ET-1含量不同程度降低，其中香砂六君子湯高劑量組最顯著（＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠胃黏膜組織NO、SELP、LECAM-1、ET-1含量比較（±s，pg/mL）

注：與空白組比較，*＜0.05；與模型組比較，△＜0.05

3 討論

CAG屬中醫(yī)學(xué)“胃痞”范疇，臨床多表現(xiàn)為胃脘似滿非滿、似痛非痛諸癥，脾胃虛弱致中焦氣機(jī)窒塞，《景岳全書(shū)?痞滿》有“痞者，痞塞不開(kāi)之謂；滿者，脹滿不行之謂。蓋滿則近脹，而痞則不必脹也”，表明脾胃虛弱，脾胃升降功能失司，氣機(jī)壅滯中焦，乃該病發(fā)病之根本病機(jī)。香砂六君子湯出自《古今名醫(yī)方論》，乃行氣運(yùn)脾健胃之基礎(chǔ)方。本方是在四君子湯補(bǔ)益脾氣的基礎(chǔ)上加陳皮、法半夏以化痰除濕，加木香、砂仁以行氣助運(yùn)，以達(dá)醒脾健脾之功?？虑僭疲骸八木託夥种偡揭玻藚⒅聸_和之氣，白術(shù)培中宮，茯苓清治節(jié)，甘草調(diào)五藏，胃氣既治，病安從來(lái)，然撥亂反正又不能無(wú)為而治，必大舉行氣之品以輔之。則補(bǔ)者不至泥而不行，故加陳皮以利肺金之逆氣，半夏以疏脾土之濕氣，而痰飲可除也，加木香以行三焦之滯氣，縮砂以通脾腎之元?dú)猓徲艨砷_(kāi)也，四君得四輔而補(bǔ)力倍宣，四輔有四君而元?dú)獯笳?，相得而益彰矣?！笨梢?jiàn)，該方健脾運(yùn)脾，行氣消痞，恰合病機(jī)。

CAG是由多種因素造成的，其發(fā)病與幽門螺桿菌感染、環(huán)境因素、膽汁反流、免疫、遺傳、年齡、高鹽及低維生素飲食等密切相關(guān)[12]。其中，環(huán)境因素至關(guān)重要。已有研究表明，胃黏膜微環(huán)境中炎癥反應(yīng)發(fā)生與NO的產(chǎn)生關(guān)系密切，其低表達(dá)狀態(tài)下能介導(dǎo)并維持胃黏膜的微循環(huán)血流作用正常，而NO的過(guò)表達(dá)則可通過(guò)誘導(dǎo)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和水腫形成進(jìn)一步增強(qiáng)組織損傷。胃黏膜中NO的產(chǎn)生與胃黏膜組織eNOS、iNOS的表達(dá)和激活關(guān)系密切[9，13]。其中，eNOS是一種在胃黏膜中穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)皮型NOS，生理狀況下，其產(chǎn)生的NO可增加血管舒張和血流的保護(hù)作用，減少微循環(huán)中內(nèi)皮-白細(xì)胞相互作用，進(jìn)而促進(jìn)胃黏膜的修復(fù)和胃黏膜血流量的調(diào)節(jié)[14]。而iNOS作為一種誘導(dǎo)型NOS，是NO合成過(guò)程中的限速酶，在正常組織中大量存在，iNOS激活時(shí)，酶的活性能維持較長(zhǎng)時(shí)間，并釋放大量NO，進(jìn)而激活大量炎癥介質(zhì)的生成，加重炎性反應(yīng)，導(dǎo)致胃損傷[15]。有研究表明，香砂六君子湯可通過(guò)降低iNOS表達(dá)，減少NO生成，進(jìn)而降低IL-6、TNF-α等炎癥因子的表達(dá)，以達(dá)到減輕慢性萎縮性胃黏膜炎癥的效果[16]。此外，SELP、LECAM-1、ET-1作為典型的促炎因子，ET-1是一種強(qiáng)效縮血管因子，在胃腸道中有廣泛分布，可調(diào)節(jié)胃黏膜血流量，在黏膜損傷情況下可大量釋放；LECAM-1的表達(dá)可促進(jìn)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，并向炎癥部位游走；而SELP能促進(jìn)血小板聚集、黏附，血小板數(shù)量增加，功能亢進(jìn)，致使黏膜缺血、缺氧而促進(jìn)炎癥反應(yīng)發(fā)生。

本研究結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組大鼠iNOS基因和蛋白表達(dá)顯著升高，eNOS基因和蛋白表達(dá)顯著降低，胃黏膜組織NO、SELP、LECAM-1、ET-1含量顯著升高，提示CAG胃黏膜損傷與NOS表達(dá)水平改變進(jìn)而使下游炎性介質(zhì)NO、SELP、LECAM-1、ET-1含量升高有關(guān)，而各藥物干預(yù)組大鼠逆轉(zhuǎn)了模型組大鼠一般生存狀況及胃黏膜組織病理改變，其中尤其以香砂六君子湯高劑量組最顯著，高劑量香砂六君子湯顯著下調(diào)iNOS基因及蛋白表達(dá)，上調(diào)eNOS基因及蛋白表達(dá)，同時(shí)降低下游炎性介質(zhì)NO、SELP、LECAM-1、ET-1的含量，減輕胃黏膜炎性反應(yīng)，促使胃黏膜微環(huán)境得到改善，進(jìn)而發(fā)揮胃黏膜保護(hù)作用。

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Effects ofDecoction on Levels of Gastric Mucosa-related Factors of Chronic Atrophic Gastritis Rats

BAI Min1, CHENG Yingxia1, DUAN Yongqiang1,2, WANG Liyuan1,3, YANG Xiaoyi1, GONG Zihan1, MA Jun1

To investigate the effects ofDecoction on the expressions of iNOS and eNOS in gastric mucosa and the contents of SELP, LECAM-1 and ET-1 in the downstream of chronic atrophic gastritis (CAG) rats; To explore the molecular mechanism of its treatment of CAG.Totally 120 healthy Wistar rats of SPF grade were randomly divided into blank group and CAG model group. CAG model rats were made by MNNG+ranitidine+anorexia method. According to random number table method, they were divided into model group, vitacoenzyme group andDecoction high-, medium-, low-dosage groups. Model group and blank group were given 2 mL distilled water;Decoction groups were given 24, 12, 6 g/(kg?d)Decoction respectively; vitacoenzyme group was given 0.3 g/(kg?d) vitacoenzyme, continuous administration for 120 days. The changes of general living conditions and pathological changes of gastric mucosa in each group were observed. The expression of iNOS, eNOS gene and protein in gastric mucosa were detected by real-time fluorescent quantitative PCR and Western blot. The contents of NO, SELP, LECAM-1 and ET-1 in gastric mucosa were detected by ELISA.Compared with the blank group, the rats in the model group had a relatively poorer living condition, thinner gastric mucosa, fewer glands in the lamina propria, loose glands, irregular arrangement, scattered inflammatory cell infiltration, significant increase of iNOS gene and protein expression, significant decrease of eNOS gene and protein expression, and significant increase of NO, SELP, LECAM-1 and ET-1 contents in gastric mucosa, with statistical significance (<0.05). Compared with the model group, the general living conditions of the rats inDecoction groups and vitacoenzyme group were improved in varying degrees. The gastric mucosa was still thin; the glands in the lamina propria increased; the inflammatory infiltration was reduced; the expression of eNOS gene and protein in the gastric mucosa significantly increased; the expression of iNOS gene and protein was significantly reduced; the contents of NO, SELP, LECAM-1 and ET-1 in the gastric mucosa were reduced;Decoction high-dosage group was significant, with statistical significance (<0.05).Decoction may down-regulate the expression level of iNOS and up-regulate the expression level of eNOS in gastric mucosa of CAG model rats, so as to inhibit the secretion of downstream factors of NO, SELP, LECAM-1 and ET-1, and then regulate the homeostasis of inflammatory microenvironment of gastric mucosa of CAG model rats to play a role in protecting gastric mucosa.

Decoction; chronic atrophic gastritis; NO; iNOS; eNOS; SELP; LECAM-1; ET-1; rats

R285.5

A

1005-5304(2020)11-0052-06

10.19879/j.cnki.1005-5304.202004257

國(guó)家自然科學(xué)基金（81260519、81760830）

成映霞，E-mail：cyxgs2008@163.com

（2020-03-24）

（2020-05-13；編輯：華強(qiáng)）