楊沛方，周志楠，敖 葉，陳 祥*

（1.貴州大學(xué)高原山地動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽 550025；2.貴州大學(xué)貴州省動(dòng)物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽 550025；3.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽 550025）

黔北麻羊俗稱“麻羊”，屬短毛型皮肉兼用山羊，是貴州省優(yōu)良地方山羊品種[1]，于1993 年收錄至《貴州省畜禽品種志》，2011 年被《中國畜禽遺傳資源志-羊志》收錄，2013 年獲得國家農(nóng)產(chǎn)品地理標(biāo)志登記保護(hù)[2]。該品種羊主要分布于貴州省遵義市習(xí)水、仁懷的山區(qū)，具有耐粗飼、適應(yīng)性強(qiáng)、生產(chǎn)性能優(yōu)等特點(diǎn)，且皮張品質(zhì)優(yōu)良，羊肉鮮美，深受廣大養(yǎng)殖戶及消費(fèi)者的喜愛[3]。

多胎性狀作為衡量雌性動(dòng)物是否優(yōu)良的一項(xiàng)重要繁殖指標(biāo)，受排卵率、卵泡數(shù)量和質(zhì)量以及生長發(fā)育情況的影響。研究發(fā)現(xiàn)類固醇激素、相關(guān)調(diào)控生長因子等參與卵泡生長發(fā)育調(diào)控[4]。而類固醇激素的合成對雌性動(dòng)物卵泡的生長發(fā)育、閉鎖卵泡以及卵泡的增殖、凋亡都有調(diào)控作用。類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白（Steroidogenic Acute Regulatory Protein，StAR）也稱類固醇激素靈敏調(diào)節(jié)蛋白，是膽固醇由線粒體外膜到內(nèi)膜的一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在膽固醇的代謝以及類固醇激素的合成中起關(guān)鍵作用[5]。膽固醇在線粒體內(nèi)細(xì)胞色素氧化酶的作用下轉(zhuǎn)化為氧化固醇，在卵巢內(nèi)由卵泡膜細(xì)胞和顆粒細(xì)胞合成生殖激素[6]。研究表明，StAR不僅存在于類固醇激素生成組織（腎上腺、睪丸、卵巢），還廣泛表達(dá)于其他組織，在卵巢中表達(dá)量較高[7]。可見，StAR在卵巢發(fā)育及排卵過程中的作用不可或缺。此外，StAR在調(diào)節(jié)睪酮的合成過程中起重要作用，是維持正常生理功能所必須的一種重要蛋白[8]。目前StAR基因mRNA 已在豬[9]、綿羊[10]、小鼠[11-12]、鵝[13]等多種動(dòng)物的卵巢、睪丸中建立組織表達(dá)圖譜，豬StAR基因也已被克隆并測序驗(yàn)證[14]，但其在黔北麻羊上的研究卻鮮見報(bào)道，其對山羊產(chǎn)羔性狀的直接關(guān)聯(lián)性也有待進(jìn)一步研究。故本研究通過qRT-PCR 技術(shù)檢測StAR基因在單、多羔黔北麻羊不同組織中的表達(dá)量，克隆出黔北麻羊StAR基因編碼序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，為進(jìn)一步探討StAR基因生物學(xué)功能以及對山羊產(chǎn)羔的調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選自貴州省習(xí)水縣黔北麻羊中心產(chǎn)區(qū)富興牧業(yè)有限公司，選取體況良好、健康無病、飼養(yǎng)管理、營養(yǎng)水平及免疫程序相同的18～24 月齡單、多羔母羊，屠宰后半小時(shí)內(nèi)用經(jīng)高壓滅菌后的鑷子、剪刀等工具采取其下丘腦、垂體、卵巢、輸卵管、子宮等組織，錫箔紙包裝標(biāo)簽后放入液氮低溫保存送至實(shí)驗(yàn)室，置于-80℃冰柜中備用。

1.2 主要試劑及儀器 TRIzol、qPCR Mix、膠回收試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、液氮（-196℃）、氯仿、50×TAE緩沖液、異丙醇、無水乙醇、瓊脂糖、氨芐青霉素購自貴州鼎國生物有限公司；pMD-19T、DNA Marker 2000購自大連寶生物工程有限公司；T4 連接酶、LB 培養(yǎng)基粉末購自上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。紫外可見分光光度計(jì)（型號：NANODROP 2000）、37℃搖床購自美國Thermo Fisher 公司；電泳儀（DYY-2C 型）、瞬時(shí)離心機(jī)、振蕩器購自北京六一儀器廠；PCR 擴(kuò)增儀（C1000 TouchTM）、CFX 96 羅氏實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀、凝膠成像系統(tǒng)（Universal Hood II）購自BIO-RAD 有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 引物的設(shè)計(jì)、合成 根據(jù)Genbank 數(shù)據(jù)庫收錄的山羊StAR基因（登錄號為：XM_013975437.2）序列，利用Primer-BLAST 在線軟件設(shè)計(jì)其克隆和熒光引物各1 對。在StAR基因上下游處分別添加XhoI 與KpnI酶切位點(diǎn)并設(shè)置相應(yīng)的保護(hù)堿基，選取β-actin為內(nèi)參基因，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物信息見表1。引物合成后為粉末狀易粘附管壁，以4 000 r/min離心1 min后按照相應(yīng)稀釋比例（10 μmol/μL）加入滅菌后的ddH2O，稀釋后分裝保存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 組織總RNA 提取及首鏈cDNA 的合成 按照Trizol 法提取組織總RNA，分光光度計(jì)測定其濃度及OD 值（OD260/OD280），鑒定滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的組織總RNA 通過HiFi Saript 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成首鏈cDNA，逆轉(zhuǎn)錄體系20 μL：dNTP mix 4 μL、HiFi-Saript 1 μL、DTT 0.1 mol/L 2 μL、Primer mix 2 μL、5×RT Buffer 4 μL、RNA 模板 1 μL、RNase-Free water 補(bǔ)充至20 μL。反應(yīng)條件：42℃，30 min；85℃，5 min，最后將反應(yīng)產(chǎn)物置于-20℃冰箱保存，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測StAR基因在不同組織中的表達(dá)水平 在熒光定量PCR 儀上采用SYBR Green I熒光染料的方法對單、多羔母羊不同組織進(jìn)行StAR基因mRNA 表達(dá)水平的檢測。將逆轉(zhuǎn)錄所得到的單、多羔母羊不同組織（下丘腦、垂體、卵巢、輸卵管、子宮）的cDNA 稀釋至等濃度（500 ng/μL）作為模板。反應(yīng)體系10 μL：qRT-PCR mix 5 μL、cDNA 模板1 μL、上下游引物（100 μM）各0.5 μL、ddH2O 3 μL。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性2 min，95℃變性15 s，60℃退火30 s，70℃延伸30 s 并添加機(jī)器自帶的熔解曲線。每組3 個(gè)重復(fù)樣按照預(yù)先設(shè)定程序進(jìn)行qRT-PCR 反應(yīng)。

表1 引物信息

1.3.4 PCR 擴(kuò)增黔北麻羊StAR基因CDS 區(qū) 以卵巢組織首鏈cDNA 為模板，擴(kuò)增StAR基因的CDS 區(qū)，PCR 擴(kuò)增體系為10 μL：2×Es Taq Master Mix 5 μL、上下游引物（100 μM）各0.75 μL、cDNA 1.5 μL、ddH2O 補(bǔ)充至10 μL。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性10 s，退火（58℃）50 s，72℃延伸1 min，72℃終延伸10 min，PCR 反應(yīng)結(jié)束后，產(chǎn)物以1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測是否擴(kuò)增出目的條帶。

1.3.5StAR基因的克隆、轉(zhuǎn)化與驗(yàn)證 經(jīng)凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物為所需目的條帶，按照膠回收試劑盒對其進(jìn)行膠回收，做好標(biāo)記，利用分光光度計(jì)對濃度和純度檢測。將膠回收產(chǎn)物與pMD-19T 在金屬浴16℃連接12 h，再將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α中，涂板，37℃恒溫培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。挑取白斑菌種至含有氨芐青霉素的LB 液體培養(yǎng)基中37℃、200 r/min 搖晃培養(yǎng)12 h。選取渾濁菌液進(jìn)行菌液PCR 反應(yīng)，凝膠電泳檢測，篩選出正確目的條帶的陽性菌液送至北京擎科生物科技股份有限公司進(jìn)行測序。

1.3.6 黔北麻羊StAR基因生物信息學(xué)分析 菌液測序后，應(yīng)用DNA Star 軟件比對StAR基因序列并使用MegAlign 將堿基序列翻譯為氨基酸序列，選取綿羊、小鼠、大鼠、豬、雞、人、白尾鹿、一角鯨、蘇門答臘猩猩等9 個(gè)物種的StAR基因序列與黔北麻羊進(jìn)行同源性比對并構(gòu)建相應(yīng)物種的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。使用Prot Param（http://expasy.org/tools/protparam.html）分析StAR 蛋白理化性質(zhì)；分別利用SOPMA（http://nps apbil.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automa t.pl?page=npsa_sopma.html）軟件與SWISS-mode 軟件分析、預(yù)測StAR 蛋白質(zhì)二、三級結(jié)構(gòu)；運(yùn)用ProtScale 程序分析StAR 蛋白的疏水性；利用NetPhos 3.1 Server（http://www.cbs.dtu.dk/services/NetPhos/）預(yù)測StAR氨基酸的磷酸化位點(diǎn)；最后利用PSORT II Prediction 在線網(wǎng)站（http://psort.hgc.jp/form2.html）對StAR 蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)與分析 運(yùn)用Excel 2007 對熒光定量數(shù)據(jù)Cq值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)整理，利用相對定量法2-△△CT處理實(shí)時(shí)熒光定量PCR 數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理。組內(nèi)單、多羔母羊不同組織表達(dá)量的比較采用單因素方差分析（ANOVA），組間單、多羔母羊不同組織表達(dá)量的比較采用配對樣本t檢驗(yàn)。LSD 法進(jìn)行差異顯著性的檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異顯著，P＜0.01 為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 黔北麻羊StAR基因的PCR 擴(kuò)增 如圖1 所示，熒光引物擴(kuò)增出約為161 bp 大小的片段，CDS 區(qū)引物擴(kuò)增出約為858 bp 大小的片段，均與預(yù)測目的片段大小一致，且條帶較為清晰、單一，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2 qRT-PCR 檢測StAR基因mRNA 在不同組織的表達(dá)水平 由圖2 可知，StAR基因在單羔母羊的下丘腦-垂體-性腺軸（卵巢、輸卵管、子宮）的表達(dá)呈現(xiàn)波狀形式，StAR基因在單、多羔黔北麻羊卵巢組織中表達(dá)量最高，極顯著高于其他組織，在子宮組織中的表達(dá)量最低。StAR基因在單羔黔北麻羊中的表達(dá)量依次為：卵巢＞輸卵管＞垂體＞下丘腦＞子宮，其中垂體的表達(dá)量顯著高于下丘腦，其余均呈現(xiàn)極顯著差異。StAR基因在多羔黔北麻羊中的表達(dá)量依次為：卵巢＞垂體＞下丘腦＞輸卵管＞子宮，在垂體中的表達(dá)量顯著高于下丘腦，但在子宮與輸卵管之間未達(dá)到顯著性差異。經(jīng)組間比較可知，StAR基因在單羔黔北麻羊輸卵管中的表達(dá)量極顯著高于多羔黔北麻羊，相反在多羔黔北麻羊卵巢中的表達(dá)量卻極顯著高于單羔黔北麻羊。

2.3 黔北麻羊StAR基因T 克隆載體的鑒定 如圖3 所示，目的條帶明亮清晰、單一且位于858 bp 處。陽性菌液經(jīng)測序后顯示，黔北麻羊StAR基因相比于NCBI中山羊StAR基因的CDS 區(qū)序列吻合度高達(dá)99.53%，共發(fā)生4 處突變，分別是第139、312 位堿基由C 突變?yōu)門，第160 位堿基由T 突變?yōu)镚，第315 位堿基由T突變?yōu)镃。4 處突變中有2 處為同義突變，2 處為錯(cuò)義突變，同義突變沒有引起氨基酸序列的改變，錯(cuò)義突變分別由第139 位與第160 位堿基的改變所引起，其中第139 位堿基的突變導(dǎo)致氨基酸由丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸，第160 位堿基的突變導(dǎo)致氨基酸由原始的亮氨酸突變?yōu)榫彼?。菌液PCR 及測序驗(yàn)證證實(shí)StAR基因編碼序列已成功克隆至pMD-19T 載體中，pMD-19T-StAR 亞克隆載體構(gòu)建成功。

2.4 黔北麻羊StAR基因的生物信息學(xué)分析

2.4.1 黔北麻羊StAR 蛋白理化性質(zhì)分析 黔北麻羊StAR基因編碼區(qū)包含858 個(gè)堿基，共編碼285 個(gè)氨基酸，蛋白分子量約為31.87 ku，理論等電點(diǎn)為9.12，ExPASy 顯示黔北麻羊StAR 是由1 398 個(gè)C 原子、2 295 個(gè)H 原子、409 個(gè)N 原子、410 個(gè)O 原子以及15 個(gè)S 原子組成的化學(xué)式為C1398H2295N409O410S15的分子，共由4 527個(gè)原子構(gòu)成，在哺乳動(dòng)物體中的半衰期約為30 h。就其氨基酸組成而言，StAR基因編碼序列主要由亮氨酸、纈氨酸、谷氨酸、精氨酸組成，分別占氨基酸總數(shù)的11.9%、8.1%、8.1%、8.1%；組氨酸與苯丙氨酸的含量最少，僅有1.4%；帶正電荷的氨基酸殘基數(shù)量大于帶負(fù)電荷的殘基，證明黔北麻羊StAR 編碼的氨基酸序列帶正電。另外，StAR 蛋白的不穩(wěn)定指數(shù)為42.66（不穩(wěn)定指數(shù)＞40），可將此蛋白視為不穩(wěn)定蛋白。

2.4.2 黔北麻羊StAR 蛋白疏水性預(yù)測與分析 ProtScale分析黔北麻羊StAR 蛋白疏水性圖譜見圖4，橫坐標(biāo)為StAR 編碼的氨基酸序列位置，縱坐標(biāo)代表疏水性評分，以0 分為界，數(shù)值越大，疏水性越強(qiáng)，數(shù)值越小，親水性越強(qiáng)。黔北麻羊StAR 編碼的285 個(gè)氨基酸序列中，第95 位甘氨酸親水性最強(qiáng)，評分為-3.000，第201 位谷氨酸疏水性最強(qiáng)，評分為1.789。0 分以下氨基酸數(shù)量大于0 分以上，證明黔北麻羊StAR 蛋白為疏水性蛋白，ExPASy 程序分析得出StAR 蛋白親水平均值為-0.276，ProtScale 程序與ExPASy 程序?qū)ζ涞贸龅慕Y(jié)論一致。

2.4.3 黔北麻羊StAR 蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)分析與預(yù)測 將克隆出的StAR 編碼的285 個(gè)氨基酸序列放入SOPMA在線分析軟件發(fā)現(xiàn)，黔北麻羊StAR 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)主要由106 個(gè)α-螺旋、17 個(gè)β-轉(zhuǎn)角、111 個(gè)無規(guī)則卷曲與51 個(gè)延伸鏈組成（圖5），分別占比為37.19%、5.96%、38.95%、17.89%，可見黔北麻羊StAR 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)主要由α-螺旋與無規(guī)則卷曲構(gòu)成。進(jìn)一步使用SWISS 程序預(yù)測黔北麻羊StAR 蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)（圖6），發(fā)現(xiàn)α-螺旋與無規(guī)則卷曲占據(jù)整個(gè)結(jié)構(gòu)大部分，與二級結(jié)構(gòu)分析結(jié)果一致。

2.4.4 黔北麻羊StAR 蛋白亞細(xì)胞定位分析 運(yùn)用PSORT II Server 在線網(wǎng)站對黔北麻羊StAR 蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析，發(fā)現(xiàn)其有可能位于真核生物的線粒體、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、細(xì)胞骨架等5 種結(jié)構(gòu)中，預(yù)測比例分別為47.8%、30.4%、13.0%、4.3%、4.3%，在線粒體中的可能性最大，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及細(xì)胞骨架中的可能性最小。

2.4.5 黔北麻羊StAR 磷酸化位點(diǎn)的預(yù)測 通過NetPhos 3.1 Server 程序分析磷酸化位點(diǎn)得知，黔北麻羊StAR 可能存在23 個(gè)磷酸化位點(diǎn)，其中包括14 個(gè)絲氨酸磷酸化位點(diǎn)（分別位于第12 位、第13 位、第19 位、第57 位、第61 位、第66 位、第69 位、第100 位、第150 位、第186 位、第195 位、第233 位、第261 位、第277位氨基酸）、5 個(gè)蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)（分別是第5 位、第190 位、第204 位、第240 位、第263 位氨基酸）、4 個(gè)酪氨酸磷酸化位點(diǎn)（分別是第68 位、第75 位、第134 位、第206 位氨基酸）。

2.4.6 黔北麻羊StAR 氨基酸同源性分析以及系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建 選取綿羊、小鼠、大鼠、豬、雞、人、白尾鹿、一角鯨、蘇門答臘猩猩等9 個(gè)物種與黔北麻羊StAR基因編碼序列進(jìn)行同源性分析，結(jié)果顯示黔北麻羊StAR編碼序列與綿羊、小鼠、大鼠、豬、雞、人、白尾鹿、一角鯨、蘇門答臘猩猩的同源性分別為98.6%、83.8%、84.5%、90.2%、68.0%、87.0%、95.1%、91.6%、87.0%（圖7），可見，黔北麻羊StAR 編碼序列在哺乳動(dòng)物中具有較高的相似性，與非哺乳動(dòng)物（雞）的相似性較低。同時(shí)，采用NJ 法構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹得出哺乳動(dòng)物聚集成為一個(gè)大分支，黔北麻羊與綿羊的親緣關(guān)系最近，與雞的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。黔北麻羊StAR基因編碼序列具有良好的種屬特異性，與對比的10 個(gè)物種親緣關(guān)系依次為綿羊＞白尾鹿＞一角鯨＞豬＞小鼠＞大鼠＞人＞蘇門答臘猩猩＞雞（圖8），與同源性分析結(jié)果一致。

3 討 論

類固醇激素（Steroid Hormone）的合成與分泌受機(jī)體內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)，在母畜繁殖過程中發(fā)揮著重要作用。StAR 是類固醇激素合成過程中具有高度特異性的調(diào)節(jié)因子，位于相關(guān)細(xì)胞的線粒體膜上，對膽固醇進(jìn)入線粒體內(nèi)膜合成類固醇激素的過程具有限速作用[15]。已有大量研究證實(shí)，StAR 能夠參與卵泡的生長發(fā)育，調(diào)控排卵以及成熟卵泡的運(yùn)輸?shù)榷喾N生理過程，并能在卵巢組織中特異性表達(dá)[16-17]。苗艷平等[18]在對綿羊卵巢oar-mir-150 靶向調(diào)節(jié)類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白基因的表達(dá)研究中發(fā)現(xiàn)StAR基因卵泡期較黃體期表達(dá)顯著上調(diào)。但StAR基因?qū)ι窖虍a(chǎn)羔性狀相關(guān)研究尚未報(bào)道，本研究以卵巢組織cDNA 為模板，PCR擴(kuò)增黔北麻羊StAR基因的CDS 區(qū)發(fā)現(xiàn)與山羊StAR基因序列相比共有4 處突變，其中2 處為同義突變，不引起氨基酸的改變，2 處為錯(cuò)義突變，分別為丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸、亮氨酸突變?yōu)榫彼幔葘Τ晒β矢哌_(dá)99.51%，氨基酸改變是否會(huì)導(dǎo)致基因序列以及功能的改變還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。另外，黔北麻羊StAR 是一種定位在線粒體中的不穩(wěn)定疏水性蛋白，與其作用定位相符；同時(shí)黔北麻羊StAR基因編碼序列與綿羊的同源性最高，遺傳距離最近，親緣關(guān)系最好、與哺乳動(dòng)物的同源性均保持在較高水平，在進(jìn)化樹聚集為一個(gè)大的分支，證實(shí)黔北麻羊StAR基因編碼序列在不同哺乳動(dòng)物中均具有較高的保守性，但其與雞的同源性較低、遺傳距離也相對較遠(yuǎn)，這證實(shí)黔北麻羊StAR基因編碼序列同時(shí)具有良好的種屬特異性，符合自然遺傳進(jìn)化規(guī)律。本研究還得出黔北麻羊StAR基因編碼序列存在23 個(gè)磷酸化位點(diǎn)，表明此基因易發(fā)生信號傳導(dǎo)，從而對細(xì)胞生長發(fā)育產(chǎn)生影響。

另外，StAR基因在單、多羔黔北麻羊母羊性腺組織中均有表達(dá)，且在卵巢中的表達(dá)量最高，與Fatemeh等[19]研究證實(shí)類固醇合成急性調(diào)節(jié)蛋白高表達(dá)于卵巢組織的結(jié)論相符。貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院前期以香豬卵巢組織為模板并采用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)發(fā)現(xiàn)StAR基因在高產(chǎn)仔香豬卵巢組織中的表達(dá)極顯著高于低產(chǎn)仔香豬，其驗(yàn)證結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測序趨勢相符[20]。黃龍等[21]以高、低產(chǎn)仔數(shù)約克夏母豬為研究對象的轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)也表明StAR基因高表達(dá)于高產(chǎn)仔約克夏母豬中，從而推測StAR基因可作為豬產(chǎn)仔數(shù)的候選基因。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果相符，卵巢作為雌性動(dòng)物的重要生殖器官，對山羊產(chǎn)仔數(shù)起著直接調(diào)控作用，結(jié)合本研究數(shù)據(jù)提示StAR基因可能作用于卵巢并可能對山羊的產(chǎn)羔數(shù)量具有一定的促進(jìn)作用。

4 結(jié) 論

本研究發(fā)現(xiàn)StAR基因在單、多羔黔北麻羊母羊的下丘腦-垂體-性腺（卵巢、輸卵管、子宮）軸中均有表達(dá)，與NCBI 中山羊StAR基因的CDS 區(qū)序列吻合度高達(dá)99.53%，共有4 處突變，編碼區(qū)包含858 個(gè)堿基，共編碼285 個(gè)氨基酸，其蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)主要由α-螺旋與無規(guī)則卷曲構(gòu)成，該蛋白最有可能位于線粒體中。另外，通過構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹分析認(rèn)為黔北麻羊與綿羊的親緣關(guān)系最近。