項(xiàng) 婷，賈元威，郭 南，王 萍，王昌茂，詹翠嬌，徐新徽，沈 杰*

1皖南醫(yī)學(xué)院；2皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院，蕪湖 241000

膝骨關(guān)節(jié)炎(knee osteoarthritis，KOA)是一種常見(jiàn)的關(guān)節(jié)進(jìn)行性、退行性病變，全世界預(yù)估有超過(guò)2億的膝骨關(guān)節(jié)炎患者[1]。隨著我國(guó)社會(huì)人口結(jié)構(gòu)的老齡化，KOA患病率也在增加[2]。KOA的治療多以對(duì)癥治療為主，疼痛是KOA的主要臨床癥狀，也是KOA治療的主要目標(biāo)之一[3]。

TrkA-TRPV1(酪氨酸激酶A-瞬時(shí)感受器電位香草酸受體1)是在疼痛信號(hào)的發(fā)生和傳遞過(guò)程中的關(guān)鍵通路。在疼痛的傳導(dǎo)過(guò)程中，信號(hào)由TrkA受體傳導(dǎo)至作為疼痛發(fā)生器的TRPV1受體，最后傳導(dǎo)至中樞或再反饋到各種其他受體。TRPV1等疼痛相關(guān)通道主要在DRG等神經(jīng)節(jié)中表達(dá)。TrkA-TRPV1在KOA的疼痛中起著重要作用[4,5]。

目前KOA的藥物治療使用非甾體抗炎藥等，但因長(zhǎng)期不良反應(yīng)等原因使臨床使用受限[6]。我國(guó)地方性天然藥物藥用植物及其衍生產(chǎn)物，在治療慢性及疑難疾病方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，目前天然藥用植物及其衍生物用于骨關(guān)節(jié)炎治療引起廣泛關(guān)注[7,8]，如芍藥甙、冠蓋藤水提物、黃芩素、白藜蘆醇、阿魏酸、胡椒堿及豆腐果苷類似物天麻素等。

豆腐果苷(helicid，4-甲酰苯基β-D-阿咯吡喃糖苷)為我國(guó)首次分離鑒定的、天然植物來(lái)源的民族藥物，結(jié)構(gòu)與天麻素類似，1984年開(kāi)始應(yīng)用于臨床治療神經(jīng)病理性疼痛及炎性疼痛，效果顯著，無(wú)成癮性，無(wú)長(zhǎng)期毒性，副作用低。本研究旨在探討豆腐果苷在KOA疼痛中的作用，及其是否與DRG中TrkA-TRPV1信號(hào)通路有關(guān)。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)Sprague-Dawley雄性大鼠80只，體重為160～180 g，由上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(滬)2018-0004。飼養(yǎng)環(huán)境恒溫(22±2 ℃)，自由飲水飲食，飼養(yǎng)環(huán)境為12 h光照/黑暗循環(huán)。所有試驗(yàn)操作均符合皖南醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 藥物

豆腐果苷(TCI Japan公司，純度> 98%，批號(hào)：QCCYK-GS)；單碘乙酸鈉(MIA，Sigma-Aldrich，≥ 98%，批號(hào)：SLBZ7569)；水合氯醛(麥克林，AR，> 99%，批號(hào)：C10147287)；戊巴比妥鈉(Sigma，批號(hào)：20160925)；生理鹽水(0.9%氯化鈉注射液，安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：1908202B)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

50 μL微量進(jìn)樣器(上海高鴿工貿(mào)有限公司)；Von-Frey纖維絲(Touch Test，英國(guó))；紅外熱痛測(cè)試儀(Biological Reserch Apparatus 21036 Gemonio VA Italy)；數(shù)顯游標(biāo)卡尺(杭州鋼拓工具有限公司)；Leica Cryostat 冰凍切片機(jī)(CM3000;Nussloch，Germany)；TrkA一抗(兔來(lái)源，Abcam ab76291)；TRPV1一抗(兔來(lái)源，Abcam ab6166)；二抗(抗兔Abcam ab150078)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模分組及給藥

SD大鼠按照造模前一天機(jī)械痛閾值隨機(jī)分組：即空白組、KOA模型組(簡(jiǎn)稱模型組)、假手術(shù)組、KOA模型+豆腐果苷50 mg/kg灌胃給藥組(簡(jiǎn)稱給藥組)。豆腐果苷目前在抗抑郁和抗神經(jīng)病理性疼痛中的研究較多。目前尚無(wú)豆腐果苷用于治療骨關(guān)節(jié)炎的明確報(bào)道，無(wú)明確的劑量參考。因此本試驗(yàn)中選擇在其他模型中都有較好的治療效果的劑量：50 mg/kg[9]。

參考Philpott等[10]的造模方法造模：大鼠10%水合氯醛(3 mL/kg，ip)麻醉后，一次性膝關(guān)節(jié)腔注射用無(wú)菌0.9%生理鹽水溶解的MIA(60 mg/mL)；假手術(shù)組大鼠膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射無(wú)菌0.9%生理鹽水50 uL；空白對(duì)照組不做處理。MIA注射前一天給藥，隨后每天于7∶30～8∶30灌胃給予豆腐果苷或生理鹽水，給藥2周后處死取L4 DRG組織。麻醉前和取組織前均至少禁食12 h。

2.2 觀察指標(biāo)

2.2.1 機(jī)械刺激回縮閾值(PWT)

用Von-Frey 纖維絲法[11]進(jìn)行測(cè)定。

將大鼠放在金屬篩網(wǎng)上的有機(jī)玻璃罩中至少20 min，然后用Von-Frey纖維絲直接刺激大鼠后肢足底中部，持續(xù)時(shí)間為3～5 s，大鼠出現(xiàn)抬足或舔足行為視為陽(yáng)性反應(yīng)，撤除纖維絲后立即縮足也被認(rèn)為是陽(yáng)性反應(yīng)；纖維絲彎曲90度無(wú)抬足反應(yīng)為陰性反應(yīng)。本試驗(yàn)中用的細(xì)絲為0.4～15 g，測(cè)定時(shí)，力度從2 g開(kāi)始，若出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)則降低力度，若為陰性反應(yīng)則加大力度。在第一次出現(xiàn)不同反應(yīng)后再進(jìn)行4次測(cè)量，再根據(jù)公式計(jì)算PWT值，如果觀察到對(duì)最小克數(shù)纖維絲的陽(yáng)性反應(yīng)或?qū)ψ畲罂藬?shù)纖維絲的陰性反應(yīng)，則停止測(cè)試PWT為最小(0.4 g)或最大值(15 g)。每次測(cè)量時(shí)間為給藥后4 h左右。

2.2.2 熱刺激回縮潛伏期(PWL)

按Hargreaves法[12]用紅外熱痛刺激儀照射大鼠足底。照射開(kāi)始至大鼠出現(xiàn)抬腿回避時(shí)為PWL。紅外強(qiáng)度為55，自動(dòng)切斷時(shí)間為30 s，以防止組織損傷。熱刺激強(qiáng)度在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中維持一致。每只動(dòng)物測(cè)定3次，每次間隔3 min，取3次平均值為大鼠PWL值。每次測(cè)量時(shí)間為給藥后4 h左右。

2.2.3 關(guān)節(jié)直徑差值

用數(shù)字電子卡尺測(cè)量膝關(guān)節(jié)直徑，記錄左右膝關(guān)節(jié)直徑差值。每次測(cè)量時(shí)間為19∶00～20∶00，造模和處死當(dāng)天除外。

2.3 組織病理學(xué)檢測(cè)

2.3.1 組織獲取

用1%戊巴比妥鈉(35 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠后，進(jìn)行心臟灌注，先用100 mL 0.9%生理鹽水，然后用300 mL 4%多聚甲醛(PFA；pH 7.4)，灌注后截取大鼠整段腰椎和膝關(guān)節(jié)。腰椎PFA中固定20 h，分離L4 DRG，PFA中固定24 h，之后在4 ℃環(huán)境下采用20%和30%蔗糖梯度脫水，OTC膠包埋，-80 ℃下保存；切片前于-20 ℃中放置2 h，冰凍切片，切片厚度為6 μm，組織切片置37 ℃溫箱孵育48 h，取出后室溫放置10 min，進(jìn)行染色或-20 ℃保存。膝關(guān)節(jié)PFA中固定48 h，解剖、拍照觀察后評(píng)分。

2.3.2 免疫熒光化學(xué)法

組織切片室溫放置10 min；2.5%PBST打孔10 min；5%牛血清37 ℃孵育1 h；滴加TrkA(1∶100)或TRPV1(1∶100)抗體，置濕盒4 ℃ 24 h；次日37 ℃恒溫箱復(fù)溫1 h，滴加二抗(1∶500)，37 ℃下孵育2 h；DAPI染色8 min；期間均用0.02 mol/L磷酸鹽緩沖液洗滌5 min ×3次，晾干后滴加抗熒光淬滅劑封片。使用EWROS顯微鏡觀察并拍照。未滴加一抗的組織切片作為熒光陰性對(duì)照，切片顯示沒(méi)有特異性熒光表達(dá)。使用Image J，測(cè)量DRG切片中TrkA、TRPV1的平均IntDen值，并對(duì)DRG中有TrkA、TRPV1表達(dá)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2.3.3 關(guān)節(jié)股骨大體觀察評(píng)分

大鼠活體觀察指標(biāo)為關(guān)節(jié)直徑差值，病理學(xué)觀察中大體觀察體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下(0～4分共5級(jí))[13]：0分，關(guān)節(jié)面光整，色澤如常；1分，關(guān)節(jié)面粗糙，有小的裂隙且色澤灰暗；2分，關(guān)節(jié)面糜爛，軟骨侵蝕深達(dá)軟骨淺中層；3分，關(guān)節(jié)面潰瘍形成，軟骨侵蝕深達(dá)軟骨深層；4分，軟骨剝脫，軟骨下骨質(zhì)暴露。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 機(jī)械刺激回縮閾值(PWT)的變化

3.1.1 各組大鼠早中期(MIA注射14天內(nèi))PWT值變化

膝關(guān)節(jié)內(nèi)注射MIA后，大鼠PWT值明顯降低，注射8 h后大鼠PWT值為：模型組=給藥組=假手術(shù)組<空白組=造模前(P<0.05)。假手術(shù)組于注射后1天恢復(fù)為正常狀態(tài)。MIA注射7天后，給藥組PWT值于明顯高于模型組(P<0.05)?？瞻捉M造模前后PWT值變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明豆腐果苷可以抑制OA大鼠的PWT值下降,如圖1 所示。

圖1 MIA 注射后PWT值變化(n = 12)Fig.1 PWT changes after MIA injection (n = 12) 注：與模型組相比，*** P<0.001，** P<0.01，* P<0.05；與給藥組相比，## P<0.01，# P<0.05。Note:Compared with model group, *** P<0.001, ** P<0.01,* P<0.05;Compared with administration group,##P<0.01,# P<0.05.

3.1.2 各組大鼠晚期(MIA注射14天后)PWT變化

造模后14天每組隨機(jī)處死6只大鼠，剩余6只大鼠繼續(xù)觀察。MIA注射14天后大鼠PWT值變化較小，但給藥組PWT值始終高于模型組。表明豆腐果苷長(zhǎng)期給藥對(duì)KOA的疼痛的抑制作用較為穩(wěn)定,如圖2 所示。

圖2 MIA注射14天后PWT值變化(n = 6)Fig.2 PWT changes after 14 days of MIA injection (n = 6)注：給藥組與模型組相比，給藥組PWT值高于模型組，**P<0.01，*P<0.05。Note:Compared with the model group,the PWT of the administration group is higher, ** P<0.01,* P<0.05.

3.2 熱刺激回縮潛伏期(PWL)的變化

3.2.1 各組大鼠早中期PWL值變化

膝關(guān)節(jié)注射MIA導(dǎo)致大鼠PWL值顯著降低，產(chǎn)生熱痛敏，模型組在注射后5天恢復(fù)，給藥組可以于注射后1天提前改善熱痛敏(P<0.05)。而假手術(shù)組和空白組PWL的改變無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,如圖3 所示。

圖3 MIA注射后PWL值變化(n = 12)Fig.3 The changes of PWL value after MIA injection(n = 12)注：與模型組相比，*P<0.05；與給藥組相比，#P<0.05。Note:Compared with model group,*P<0.05;Compared with administration group,#P<0.05.

3.2.2 各組大鼠晚期PWL值變化

MIA注射14天后，各組大鼠PWL值變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明在晚期KOA模型中大鼠熱痛閾值無(wú)明顯改變,如圖4 所示。

圖4 MIA注射14后PWL值變化(n = 6)Fig.4 The changes of PWL value after 14 days of MIA injection (n = 6)注：各組PWL值變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Note:There is no significant change in PWL.

3.3 大鼠關(guān)節(jié)的改變

3.3.1 各組大鼠關(guān)節(jié)直徑差值變化

關(guān)節(jié)直徑差值為大鼠活體狀態(tài)下判斷造模是否成功的標(biāo)準(zhǔn)之一。MIA注射后大鼠注射側(cè)膝關(guān)節(jié)腫脹，關(guān)節(jié)直徑差值顯著增加，初步判斷模型建立成功。模型組和給藥組于MIA注射后3天關(guān)節(jié)直徑差值縮小，但差值仍大于造模前。如圖5、圖6所示。

圖5 關(guān)節(jié)直徑差值(注射側(cè)-非注射側(cè))(n = 6)Fig.5 Knee joint diameter differences (injection side - non injection side) (n = 6)注：與注射前相比，模型組：*** P<0.001，給藥組：### P<0.001。Note:Compared with before injection,model group:*** P<0.001;administration group:### P<0.001.

圖6 MIA注射前后大鼠膝關(guān)節(jié)照片F(xiàn)ig.6 Photos of knee joint of rats before and after MIA injection注：A和E：注射前；B和F：注射后；C和G：注射后1天；D和H：注射后5天。Note:A and E:Before injection;B and F:After injection;C and G:1 day after injection;D and H:5 days after injection.

3.3.2 各組大鼠關(guān)節(jié)軟骨變化情況

MIA注射14天后處死取膝關(guān)節(jié)，拍照觀察MIA注射側(cè)膝關(guān)節(jié)股骨軟骨改變。結(jié)果表明：空白組膝關(guān)節(jié)股骨表面光滑，軟骨正常；假手術(shù)組膝關(guān)節(jié)股骨基本與空白組相同，僅少數(shù)股骨表面顏色略灰；模型組膝關(guān)節(jié)股骨軟骨異常增厚，表面粗糙，部分糜爛；給藥組膝關(guān)節(jié)股骨軟骨增厚，但膝蓋表面比模型組光滑。表明豆腐果苷可能可以抑制OA模型的股骨軟骨改變，如圖7所示。

圖7 大鼠膝關(guān)節(jié)股骨照片F(xiàn)ig.7 Photos of femur of rat knee joint 注：如圖中箭頭所示，給藥組膝關(guān)節(jié)股骨軟骨異常增厚；模型組膝關(guān)節(jié)股骨軟骨異常增厚，表面粗糙，部分糜爛。Note:As shown by the arrow in figures,the femoral cartilage of administration group (H) is abnormally thickened;the femoral cartilage of model group is abnormally thickened,with rough surface and partial erosion.

對(duì)各組大鼠股骨進(jìn)行大體觀察評(píng)分，結(jié)果表明與假手術(shù)組或空白組相比，模型組和給藥組軟骨評(píng)分都明顯升高，結(jié)合關(guān)節(jié)直徑差值表明造模成功。其中給藥組分值低于模型組，但并未表現(xiàn)出明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。如表1所示。

表1 大鼠股骨軟骨大體觀察評(píng)分表Table 1 General observation score of

3.4 大鼠DRG組織中TrkA的表達(dá)情況

MIA注射后第14天行為學(xué)評(píng)估后處死大鼠，取雙側(cè)L4 DRG組織。用免疫熒光化學(xué)法對(duì)組織進(jìn)行分析。以假手術(shù)組作為對(duì)照，術(shù)側(cè)：模型組中TrkA熒光強(qiáng)度增加了104.05% (P<0.01)，給藥組增加了49.20%(P<0.01)，但顯著低于模型組(P<0.05)；非術(shù)側(cè)：模型組中TrkA熒光強(qiáng)度也增加了48.74%(P<0.01)，給藥組增加了21.04%，但是非手術(shù)側(cè)的變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明MIA膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射不會(huì)增加TrkA表達(dá)的細(xì)胞數(shù)，但是可使TrkA在DRG神經(jīng)元細(xì)胞中表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng)，豆腐果苷可以抑制TrkA表達(dá)增強(qiáng)作用，如圖8，圖9所示。

圖8 L4DRG中TrkA的表達(dá)(n = 6)Fig.8 Expression of TrkA in L4 DRG (n=6)注：各組術(shù)側(cè)與假手術(shù)組相比，** P<0.01；與給藥組相比，## P<0.01，# P<0.05；與非術(shù)側(cè)相比，△ P<0.05。Note:Compared with the sham group,**P<0.01;Compared with the administration group,## P<0.01, # P<0.05;Compared with the non-operative side,△ P<0.05.

圖9 L4 DRG中TrkA免疫熒光照片(EnVISION×400)Fig.9 Photos of TrkA immunofluorescence in L4 DRG注：M+：模型組手術(shù)側(cè)；M-：模型組非手術(shù)側(cè)；S+：假手術(shù)組手術(shù)側(cè)；S-：假手術(shù)組非手術(shù)側(cè)；H+：給藥組手術(shù)側(cè)；H-：給藥組非手術(shù)側(cè)。Note:M+:Operation side of model group;M-:Non-operation side of model group;S+:Operation side of sham operation group;S-:Non-operation side of sham operation group;H+:Operation side of administration group;H-:Non-operation side of administration group.

3.5 大鼠DRG組織中TRPV1的表達(dá)情況

以假手術(shù)組作為對(duì)照，TRPV1熒光強(qiáng)度：模型組增加了42.39%(P<0.05)，給藥組增加了32.49%(P<0.05)；與假手術(shù)組相比，有TRPV1表達(dá)的細(xì)胞數(shù)：模型組增加了17.56% (P<0.05)，給藥組與模型組、假手術(shù)組之間未呈現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差距。結(jié)果表明MIA膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射會(huì)增加TRPV1的熒光強(qiáng)度和細(xì)胞數(shù)，豆腐果苷給藥可以減少TRPV1在DRG中表達(dá)的細(xì)胞數(shù)，但是并未顯著減少熒光強(qiáng)度的增加，如圖10所示。

圖10 L4DRG中TRPV1的表達(dá)(n = 6)Fig.10 Expression of TRPV1 in L4 DRG (n = 6)注：與假手術(shù)組相比， * P<0.05。Note:Compared with the sham group,* P<0.05.

4 討論

KOA是常見(jiàn)的關(guān)節(jié)病變，患病率較高，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。目前常用的治療方法為基礎(chǔ)治療、藥物治療和手術(shù)治療?；A(chǔ)治療一般為控制體重，改變不良生活習(xí)慣等，主要為KOA初期的改善措施；藥物治療為單獨(dú)基礎(chǔ)治療無(wú)效時(shí)使用非甾體抗炎藥等對(duì)疼痛和關(guān)節(jié)病變進(jìn)行治療；手術(shù)治療常用關(guān)節(jié)置換術(shù)等，用于藥物治療無(wú)效的患者。在KOA的梯度治療和個(gè)體化治療中，藥物治療接受程度較高，但是因各種不良反應(yīng)等目前常用的非甾體抗炎藥等無(wú)法用于長(zhǎng)期治療[6]。

根據(jù)骨關(guān)節(jié)炎診療指南(2017版)，減輕或消除疼痛是KOA的主要治療目標(biāo)之一。因此本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)KOA引起的疼痛進(jìn)行了研究，結(jié)果表明豆腐果苷50 mg/kg可以抑制KOA機(jī)械痛，作用穩(wěn)定，但是始終未能使痛敏完全消失，可能需要改變豆腐果苷劑量，尋找最佳劑量，或嘗試與其他藥物聯(lián)合使用以增強(qiáng)療效，但還有待研究。此外，豆腐果苷50 mg/kg僅對(duì)早期KOA的熱痛有抑制作用，對(duì)中晚期KOA大鼠的PWL值無(wú)明顯影響。本試驗(yàn)中KOA大鼠僅在早期(造模前7天)出現(xiàn)了熱痛敏，而在造模7天后熱痛敏消失，PWL值恢復(fù)正常，豆腐果苷并不能提高正常大鼠的熱痛敏，因此對(duì)于中晚期KOA大鼠的PWL值并無(wú)升高作用。

NGF-TrkA-TRPV1信號(hào)通路是疼痛信號(hào)產(chǎn)生和傳遞的關(guān)鍵通路。當(dāng)NGF、TrkA、TRPV1先天性缺陷時(shí)，動(dòng)物會(huì)產(chǎn)生先天性痛覺(jué)不敏[3]。TRPV1作為疼痛發(fā)生器，主要分布在DRG等神經(jīng)節(jié)中，可以被多種刺激激活，如物理刺激；IL-1β、TNF-α等炎性因子表達(dá)增加；PI3K、PKC、TrkA等通道激活等。TRPV1在KOA的慢性疼痛中可以通過(guò)PKC活化在DRG神經(jīng)元中致敏，且有研究表明TRPV1拮抗劑可以減輕急性炎性關(guān)節(jié)痛[14]。因此，TRPV1也是KOA治療的潛在靶標(biāo)之一。但是值得思考的是：?jiǎn)未侮P(guān)節(jié)內(nèi)注射RTX(樹(shù)脂毒素，一種TRPV1激動(dòng)劑)可以對(duì)KOA疼痛進(jìn)行長(zhǎng)期緩解[15]，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致?？赡苁且?yàn)镽TX持續(xù)的刺激使TRPV1去磷酸化而產(chǎn)生了脫敏現(xiàn)象(又稱為快速耐受)等，從而使疼痛緩解。本試驗(yàn)中使用的關(guān)節(jié)內(nèi)給MIA并未產(chǎn)生脫敏現(xiàn)象，可能是MIA濃度還未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)或者是MIA本身并無(wú)此作用。

TrkA作為NGF的特異性受體可以通過(guò)激活PI3K、PLC等降低TRPV1 的開(kāi)放閾值；激活p38MAPK的轉(zhuǎn)錄和翻譯上調(diào)TRPV1的表達(dá)產(chǎn)生反饋?zhàn)饔?，使傷害感受器進(jìn)一步釋放炎性因子而降低痛閾。抑制軟骨組織、關(guān)節(jié)滑膜附近的肥大細(xì)胞、滑膜感覺(jué)神經(jīng)元、背根神經(jīng)節(jié)等中的TrkA受體作用，都可以抑制KOA疼痛。NGF-TrkA信號(hào)的阻斷是抑制KOA疼痛的有效措施，TrkA的選擇性抑制劑具有緩解KOA疼痛的潛力[16]，如ASP7962、AR786等，目前已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。

神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)是骨關(guān)節(jié)炎(OA)疼痛的主要驅(qū)動(dòng)因素，NGF抗體是有效的鎮(zhèn)痛藥[17]，緩解疼痛效果良好持久，但有關(guān)節(jié)相關(guān)的副作用發(fā)生，如原發(fā)性骨壞死、水腫、肢體感覺(jué)異常等，因此NGF抗體的使用還有待優(yōu)化[18]。

本實(shí)驗(yàn)中，豆腐果苷可以抑制KOA大鼠DRG中TrkA、TRPV1的表達(dá)水平，是其減輕KOA疼痛的機(jī)制之一。在疼痛信號(hào)的傳遞過(guò)程中NGF可以與TrkA特異性結(jié)合傳遞疼痛信號(hào)，也可與TRPV1受體直接結(jié)合，因此推測(cè)豆腐果苷可能對(duì)NGF的作用也有一定的抑制，但還需研究進(jìn)一步驗(yàn)證。

目前有研究[19]表明豆腐果苷類似物天麻素可以預(yù)防IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡，抑制核因子κB(NF-κB)途徑，減少炎癥介質(zhì)(IL-6、TNF-α)的釋放，并減少IL-1β處理的軟骨細(xì)胞中的基質(zhì)分解代謝，改善KOA模型大鼠的軟骨退化。豆腐果苷與天麻素結(jié)構(gòu)相似，在治療神經(jīng)病理性疼痛和炎性疼痛中機(jī)制相似，因此我們推測(cè)在KOA中，豆腐果苷可能與天麻素有相同的機(jī)制，也可以通過(guò)抑制炎性介質(zhì)釋放等途徑，同時(shí)改善KOA大鼠的疼痛和軟骨退化，對(duì)治療KOA產(chǎn)生重要作用，但還有有待實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，豆腐果苷可以抑制KOA疼痛，抑制TrkA-TRPV1信號(hào)通路為其機(jī)制之一。但是豆腐果苷用于KOA疼痛的治療還需要更多的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行說(shuō)明，其具體機(jī)制也還需要進(jìn)一步完善。

致謝：感謝皖南醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)中心和人體解剖教研室提供的儀器和技術(shù)支持。