李宣延 吳孝杰

[摘要]近年來(lái)，豬發(fā)生赭曲霉毒素中毒的病例呈上升趨勢(shì)，在黃曲霉毒素之后，赭曲霉毒素引起了從業(yè)者的廣泛關(guān)注。為了保障養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展和人們的身體健康，將從赭曲霉毒素A的一般概況、豬飼料中OTA的污染現(xiàn)狀、檢測(cè)技術(shù)方面進(jìn)行分析，并提出有效的防控措施。

[關(guān)鍵詞]豬;飼料;赭曲霉毒素A;防控

[中圖分類號(hào)]S828 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

近年來(lái)，由于人們對(duì)健康的重視，食品真菌毒素污染問(wèn)題得到廣泛關(guān)注的同時(shí)真菌毒素對(duì)畜禽飼料的污染也日趨重視。赭曲霉毒素中毒在一些豬場(chǎng)中屢見(jiàn)不鮮，中毒豬出現(xiàn)腹瀉、神經(jīng)癥狀死亡，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。養(yǎng)殖者對(duì)于黃曲霉毒素和黑曲霉毒素的危害認(rèn)知較多，并能采取較好的預(yù)防措施，而對(duì)赭曲霉毒素危害和預(yù)防的認(rèn)知較欠缺，從而導(dǎo)致了豬赭曲霉毒素中毒事件屢屢發(fā)生，且呈逐漸上升趨勢(shì)。豬肉作為人們餐桌上最主要的肉類食品，如何預(yù)防豬赭曲霉毒素中毒尤為關(guān)鍵。本文就赭曲霉毒素A的一般概況、豬飼料中OTA的污染現(xiàn)狀、檢測(cè)技術(shù)及防控方法等方面進(jìn)行研究，為畜牧行業(yè)提供最新相關(guān)資訊和研究進(jìn)展，以加強(qiáng)養(yǎng)殖者對(duì)赭曲霉毒素的認(rèn)知。

1 赭曲霉素A的一般概況

赭曲霉毒素（Ochratoxinc）為一種真菌毒素，是由赭曲霉和鮮綠青霉代謝過(guò)程中產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，其關(guān)注度僅次于黃曲霉毒素。赭曲霉毒素分為A、B、C、D4種，其中赭曲霉毒素A（Ochratoxins A，OTA）在研究中最受重視，是研究的熱點(diǎn)，其在自然界中分布最廣泛、毒性最強(qiáng)、對(duì)動(dòng)物飼料及動(dòng)物性食品的污染最重、與人類及動(dòng)植物健康關(guān)系最密切。研究表明，OTA對(duì)人和動(dòng)物具有很強(qiáng)的毒性，主要表現(xiàn)為腎臟和肝臟損害、致畸、致突變、致癌和免疫抑制。OTA逐漸成為全球關(guān)注的熱點(diǎn)以及食品監(jiān)管的重點(diǎn)。

OTA污染的范圍很廣，不僅可污染多種植物食品和產(chǎn)品，如小麥、玉米、燕麥、咖啡、啤酒、葡萄酒、中草藥、水果等;動(dòng)物飼料也時(shí)常被OTA污染。當(dāng)動(dòng)物進(jìn)食了被OTA污染的飼料后，OTA在動(dòng)物體內(nèi)蓄積，且蓄積的OTA不易被代謝解毒。因此在進(jìn)行動(dòng)物性食品污染檢測(cè)，尤其是動(dòng)物腎臟、肝臟、肉、血液、乳及乳制品檢測(cè)時(shí)，?？蓹z測(cè)出OTA的存在。人在食用了這些受OTA污染的食品或產(chǎn)品時(shí)，OTA隨即進(jìn)入人體，對(duì)人體產(chǎn)生毒性，從而損害人類健康，所以飼料中的OTA污染理應(yīng)得到足夠的重視。

1.1 OTA的物理性質(zhì)

純凈的OTA為穩(wěn)定的白色針狀結(jié)晶化合物，具弱酸性，水中微溶，易溶于極性有機(jī)溶劑和碳酸氫鈉溶液，在紫外光下呈綠色熒光。赭曲霉素由于其穩(wěn)定性，耐熱性強(qiáng)，蒸煮無(wú)法破壞其毒性，焙烤也只能減少其20%的毒性。

1.2 OTA的毒性

動(dòng)物食用受OTA污染的飼料后，蓄積在體內(nèi)無(wú)法分解清除，造成動(dòng)物性食品及產(chǎn)品的PTA污染，當(dāng)人食入蓄積有OTA的動(dòng)物食品后，OTA進(jìn)入人體內(nèi)，嚴(yán)重?fù)p害人體健康，尤其是孕期食人OTA，可造成胎兒畸形或流產(chǎn)等嚴(yán)重后果。大量的研究證據(jù)表明，OTA毒性主要影響器官為腎臟和肝臟，同時(shí)大量的OTA蓄積還可引起動(dòng)物腸粘膜炎癥甚至腸粘膜壞死。在動(dòng)物試驗(yàn)中還觀察到OTA的致畸作用。

1.2.1 腎毒性。研究表明OTA具有很強(qiáng)的腎毒性。有研究表明，OTA對(duì)單胃哺乳類動(dòng)物的腎毒性可引起動(dòng)物腎臟腫大或萎縮、皮質(zhì)表面不平、顏色灰白樣改變;顯微鏡下可觀察到腎小管萎縮、腎小球透明變性、間質(zhì)纖維化、腎小管壞死等癥狀，同時(shí)還伴有尿頻、尿量減少、尿糖和尿蛋白增加、血尿素氮升高等腎功能損害表現(xiàn)。

1.2.2 肝毒性。郭延奎等研究表明，雞OTA中毒后肝臟出現(xiàn)病變現(xiàn)象：肝細(xì)胞微絨毛減少，肝細(xì)胞之間的間隙變小，肝小葉大小不均，小葉間結(jié)締組織增厚，肝細(xì)胞核膜增厚，線粒體發(fā)生腫脹溶解，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)顯著減少;肝組織中，內(nèi)皮細(xì)胞顯著增生等。

1.2.3 免疫毒性。OTA具有免疫毒性在許多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)驗(yàn)證。Muller G等研究發(fā)現(xiàn)，OTA均會(huì)對(duì)細(xì)胞的增殖、分化能力，細(xì)胞膜的完整性，氧化氮的合成，巨噬細(xì)胞的吞噬能力及細(xì)胞表面標(biāo)志物的形成產(chǎn)生抑制。

1.2.4 對(duì)腫瘤發(fā)生的影響。OTA是一種可能導(dǎo)致人類腫瘤發(fā)生的物質(zhì)。Boorman GA等研究發(fā)現(xiàn)，一定劑量的（YI'A在鼠的腎小管直部的上皮細(xì)胞可誘導(dǎo)產(chǎn)生腎小管細(xì)胞腺瘤和腎小管細(xì)胞腎癌。

1.2.5 致突變作用。Ehrlich V等研究發(fā)現(xiàn)，OTA對(duì)人源性細(xì)胞產(chǎn)生致突變的作用。最新研究證明，OTA可以誘導(dǎo)DNA的氧化損傷而引起點(diǎn)突變。

2 豬飼料中OTA的污染現(xiàn)狀

據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織統(tǒng)計(jì)，全球每年約有25%谷物被真菌毒素污染，約5%～7%的糧食和飼料發(fā)生霉變，從而造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。被OTA污染的谷物原料、各種飼料等通過(guò)動(dòng)物會(huì)殘留在動(dòng)物產(chǎn)品中，然后由人體攝入含有OTA的動(dòng)物產(chǎn)品.進(jìn)一步危及人類的健康。吳金亮等調(diào)查指出豆粕和青貯飼料中MA的污染率較高，分別達(dá)37.3%和33.33%。Martins等發(fā)現(xiàn)豬飼料OTA的污染率可達(dá)6.94%。

豬一旦食用了赭曲霉毒素污染的飼料后，OTA會(huì)被小腸上皮細(xì)胞吸收進(jìn)入體循環(huán)，并與血清白蛋白結(jié)合。豬食用后會(huì)出現(xiàn)水腫、弓背僵直、四肢無(wú)力及步調(diào)失調(diào)等癥狀，對(duì)病死豬剖檢發(fā)現(xiàn)，其腎臟肥大、腎臟表面凹凸不平、肝細(xì)胞核膜增厚，胞漿內(nèi)出現(xiàn)許多異物，結(jié)締組織增生，肝細(xì)胞索排列紊亂。

雖然中國(guó)也有相關(guān)數(shù)據(jù)分析，但OTA污染飼料的情況仍未得到足夠的重視，屢見(jiàn)不鮮，其中一個(gè)原因就是對(duì)檢測(cè)方法的研究不夠，隨著科技的發(fā)展，一系列高靈敏度的新化學(xué)檢測(cè)方法及儀器不斷被開發(fā)出來(lái)，使MA的檢測(cè)從不能定量到半定量發(fā)展到準(zhǔn)確定量，準(zhǔn)確度和靈敏度有了很大的提高。

3 OTA的檢測(cè)技術(shù)

3.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）用于OTA的定量分析，是最常用的一種方法。該方法具有操作簡(jiǎn)便、易于掌握，且具有靈敏度高、回收率和精密度好的優(yōu)點(diǎn)，但成本較高。

3.2 薄層色譜法

薄層色譜法是早期廣泛用于測(cè)定真菌毒素的方法之一，根據(jù)OTA在紫外光333nm處可產(chǎn)生熒光，將樣品進(jìn)行前處理后，其中的OTA經(jīng)固相層析分離，與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照計(jì)算其含量。該方法具有成本低、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果顯示較為直觀等優(yōu)點(diǎn)。但也存在檢測(cè)周期長(zhǎng)、試劑繁雜、操作人員技術(shù)水平要求高、重現(xiàn)性和靈敏度低等不足，近幾年該方法較少應(yīng)用，逐漸被取而代之。

3.3 免疫學(xué)法

3.3.1 酶聯(lián)免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELISA）原理是先通過(guò)抗體與酶復(fù)合物結(jié)合，最終由顯色情況來(lái)指示結(jié)果的一種免疫檢測(cè)技術(shù)。該方法可用于OTA是否污染的快速篩選，是目前OTA快速檢測(cè)領(lǐng)域的主流應(yīng)用技術(shù)。ELISA技術(shù)所需設(shè)備簡(jiǎn)單，檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)便快速、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，但由于抗原抗體制備復(fù)雜，應(yīng)注意重現(xiàn)性差的局限性。

3.3.2 時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)（TRFIA）具有微量檢測(cè)的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，且適用大批量樣本的檢測(cè)，應(yīng)用前景好。該分析方法具有檢測(cè)范圍寬，靈敏度高、穩(wěn)定性強(qiáng)、特異性好，操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、快速等特點(diǎn)。

3.3.3 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析技術(shù)?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析技術(shù) （CLEIA）是用化學(xué)發(fā)光劑來(lái)直接標(biāo)記抗原或者抗體，通過(guò)免疫反應(yīng)進(jìn)行分析的一種方法。該方法特異性、靈敏度和安全性高，儀器構(gòu)造簡(jiǎn)單，方法操作簡(jiǎn)便快速，光信號(hào)可以持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間等特點(diǎn)，對(duì)谷物中赭曲霉素A的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)有很大的優(yōu)越性。

3.4 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)

近年來(lái)，隨著分子檢測(cè)技術(shù)發(fā)展迅速，應(yīng)用廣泛，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）技術(shù)也用于對(duì)OTA的檢測(cè)。該檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、快速且高靈敏度，作為一種新型的OTA檢測(cè)方法，有很好的應(yīng)用前景。

4 防控措施

飼料原料因含水量較大或存放于潮濕環(huán)境中，運(yùn)輸及儲(chǔ)存不當(dāng)，很容易霉變，導(dǎo)致OTA污染。由于飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)裸露，易于感染。一般在濕熱的環(huán)境中，易滋生赭曲霉而產(chǎn)生毒素。為防止飼料及飼料原材料的霉變，應(yīng)采取相關(guān)措施進(jìn)行有效預(yù)防。

4.1 加強(qiáng)谷物飼料的田間管理

飼料中含有OTA通常是因?yàn)槟撤N飼料原料被赭曲霉毒素污染所引起的，田間的谷物為了避免感染，應(yīng)采取抗預(yù)防OTA中毒病選育、種植密度調(diào)整、雜草鏟除、合理施肥及灌溉等措施。

4.2 改進(jìn)飼料的貯藏管理

儲(chǔ)藏室應(yīng)保持通風(fēng)、干燥、陰涼、定期清掃消毒。飼料存放時(shí)，飼料底部應(yīng)用木板支撐，使其與地面面保持適當(dāng)高度。定期檢查儲(chǔ)藏室的溫度、濕度;縮短原料儲(chǔ)存時(shí)間;加強(qiáng)原料質(zhì)量管理;及時(shí)清理被污染的原料。為防止漏雨應(yīng)及時(shí)檢查與修繕儲(chǔ)藏室。要嚴(yán)格控制谷物的濕度在15%以下，處于高濕度時(shí)要保證厭氧條件，接種具有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)的非毒性微生物群落;在飼料中加入赭曲霉毒素抑制劑，有效控制OTA的產(chǎn)生。發(fā)生嚴(yán)重霉變的飼料及飼料原料不得再使用，并及時(shí)處理，避免污染其他飼料及周圍環(huán)境。

4.3 控制真菌生長(zhǎng)

想要根本上避免谷物和食品的OTA污染，只有徹底抑制赭曲霉和鮮綠青霉的生長(zhǎng)，研究表明，水分活度、輻射處理和溫度控制等物理手段，微生物提取物、堿性物質(zhì)、酸性物質(zhì)、臭氧、氨以及抗氧化劑等物質(zhì)都可控制赭曲霉的生長(zhǎng)和OTA的合成。

4.4 及時(shí)檢查飼料狀態(tài)

杜絕發(fā)霉變質(zhì)飼料飼喂動(dòng)物，是避免OTA中毒的最根本措施。已經(jīng)出現(xiàn)輕度霉變的飼料，在飼喂動(dòng)物前應(yīng)在飼料中添加OTA吸附劑，并對(duì)飼料進(jìn)行檢測(cè)，確保飼料沒(méi)有OTA的污染;當(dāng)動(dòng)物已經(jīng)發(fā)生OTA中毒時(shí)，首先應(yīng)立即停喂現(xiàn)用飼料，改喂多汁的青綠飼料，全面檢查飼料儲(chǔ)藏室、料槽、飼料加工設(shè)備等，剔除發(fā)霉、結(jié)塊、霉變的飼料，及時(shí)清掃消毒圈舍，以減少污染菌量。對(duì)于己經(jīng)發(fā)生OTA中毒的豬給予瀉劑治療，使豬胃腸道OTA毒素能夠及時(shí)清除，以緩解病情，同時(shí)還應(yīng)采用相應(yīng)的支持或?qū)ΠY治療，如給予補(bǔ)液、利尿、強(qiáng)心及抗菌素等治療。

4.5 建立高效的檢測(cè)體系

建立高效、準(zhǔn)確、快速檢測(cè)OTA體系，減少原料及飼料的真菌污染，避免豬感染OTA。采取有效方法對(duì)豬場(chǎng)飼料進(jìn)行OTA檢測(cè)，分析赫曲霉毒素在各類豬飼料的分布情況，以及在不同類飼料中的分布規(guī)律。對(duì)飼料及豬肉產(chǎn)品中OTA的含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，研發(fā)防控豬飼料中赫曲霉毒素的添加劑，以降低OTA對(duì)豬的侵害，從而間接保護(hù)人類的健康。

[參考文獻(xiàn)]

[1]李發(fā)生，徐霞，郭樂(lè)，等.赭曲霉素A的毒性研究進(jìn)展[J].山東畜牧獸醫(yī)，2009，30（5）：58-59.

[2]王鄭平，郭健，曹陽(yáng)，等.高效液相色譜法快速測(cè)定糧食中赭曲霉毒素A[J].糧食科技與經(jīng)濟(jì)，2014，39（4）：31-32.

[3]高翔，李梅，張立實(shí).赭曲霉毒素A的毒性研究進(jìn)展[i7-國(guó)外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生學(xué)分冊(cè)，2005，32（1）：51-55.

[4]Mally A，Hard GC，Dekant W.Ochratoxin A as a potential etiologic factorin endemic nephropathy：lessons from toxicity studies in rats[J].Food ChemToxicol，2007，45（11）：2254-2260.

[5]龐世琦，劉青，李志勇，等.葡萄酒中赭曲霉毒素A檢測(cè)方法優(yōu)化[J].食品科學(xué)，2013，34（24）：193-196.

[6]高翔，李梅，張立實(shí)，等.赭曲霉毒素A的毒性研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生學(xué)分冊(cè)，2005，32（1）：52-54

[7]李風(fēng)琴，計(jì)融.赭曲霉毒素A與人類健康關(guān)系研究進(jìn)展[J].衛(wèi)生研究雜志，2003，32（2）：172-175.

[8]郭延奎.赭曲霉毒素A中毒雞肝臟超微結(jié)構(gòu)的觀察[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1992（增刊）：8-10.

[9]馮艷忠，沈偉，王兆山，等.飼料中霉菌毒素的污染概況[i7-豬業(yè)科學(xué)，2014（4）：70-71.

[10]LEITENBERG，MILTON.Biological weapons in the twentieth centurv：Areview and analysis[J].Critical Reviews in Microbiology，2001，27（4）：267-320.

[11]吳金亮，高婷婷，李銀江，等.云南省養(yǎng)殖場(chǎng)用飼草料霉菌毒素污染情況[J].飼料研究，2017（10）：15-19.

[12]Martins H M，Ines Ahneida，Camacho C，et al.A survey on the occurrenceof ochratoxin A in feeds for swine an laving hens[J].Mycotoxin Research，2012，28（2）：107-110.

[13]劉瑞玲，張潔慧.飼料中赭曲霉毒素在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的危害與預(yù)防[J].國(guó)外畜牧學(xué)—豬與禽，2018，38（06）：28.

[收稿日期]2020-04-02

[基金項(xiàng)目]2018年度甘肅省高等學(xué)校科研項(xiàng)目自籌經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目“河西地區(qū)豬飼料赭曲霉毒素的監(jiān)測(cè)與防控”（2018x-122），甘教技（2018）6號(hào)文件。

[作者簡(jiǎn)介]李宜延（1990-），男，甘肅會(huì)寧人，研究方向：畜牧獸醫(yī)專業(yè)教學(xué);吳孝杰（1983-），女，吉林永吉人，講師，碩士，研究方向：畜牧獸醫(yī)專業(yè)教學(xué)。