張華

【摘 要】目的：探討產(chǎn)前遺傳性疾病診斷中染色體微陣列分析技術(shù)的價(jià)值。方法： 選取2018/3-2019/4間成功隨訪的852名因血清學(xué)篩查高風(fēng)險(xiǎn)或高齡而進(jìn)行產(chǎn)前診斷孕婦，根據(jù)其所運(yùn)用的檢測(cè)方法分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組運(yùn)用染色體微陣列分析技術(shù)對(duì)照組運(yùn)用熒光原位雜交技術(shù)。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組21-三體，13-三體，18-三體，X和Y非整倍體與核型分析結(jié)果對(duì)比，復(fù)合率100%。實(shí)驗(yàn)組染色體拷貝數(shù)變異檢出率高于對(duì)照組。結(jié)論：染色體微陣列分析技術(shù)檢測(cè)周期短，結(jié)果可靠，染色體拷貝數(shù)變異檢出率高，在產(chǎn)前遺傳性疾病診斷中有很好的應(yīng)用價(jià)值，可以廣泛推廣。

【關(guān)鍵詞】染色體微陣列分析技術(shù);產(chǎn)前遺傳性疾病

【中圖分類號(hào)】R714.5【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-8714（2020）05-0117-01

引言：遺傳性疾病主要包括染色體病、單基因病、多基因病和線粒體病。對(duì)于產(chǎn)前遺傳性疾病來(lái)說(shuō)，主要是指染色體病和單基因病。染色體病是指各種原因引起的染色體數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常的疾病，種類達(dá)1萬(wàn)多種。[1]絕大多數(shù)染色體數(shù)量異常的胎兒會(huì)導(dǎo)致孕早期自然流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或嚴(yán)重畸形。只有少數(shù)染色體平衡性結(jié)構(gòu)異常和個(gè)別染色體三體異常能夠存活，但也會(huì)影響其生活質(zhì)量，增加家庭經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。此外，由于染色體拷貝數(shù)變異（chromosome copy number variations，CNV）在人類基因組中普遍存在且與眾多疾病相關(guān)，如精神分裂癥，微缺失微重復(fù)綜合征，因此也成為產(chǎn)前遺傳病檢測(cè)的關(guān)注點(diǎn)。因此，為了提高人口質(zhì)量，降低出生缺陷，需要進(jìn)行產(chǎn)前遺傳性疾病檢測(cè)。對(duì)此，本院對(duì)852例需要排除產(chǎn)前遺傳性疾病的孕婦進(jìn)行研究，以下是相關(guān)研究?jī)?nèi)容。

1 對(duì)象及方法

1.1對(duì)象

2018/3-2019/4間因血清學(xué)篩查高風(fēng)險(xiǎn)或高齡而要求排除產(chǎn)前遺傳性疾病的孕婦852例，對(duì)照組340例運(yùn)用熒光原位雜交法，實(shí)驗(yàn)組512例運(yùn)用染色體微陣列分析技術(shù)。所有孕婦均知情同意。實(shí)驗(yàn)組：年齡范圍是19-40歲，平均年齡是（25.35±3.16）歲;孕周17-22周，平均孕周是（19±1.25）周;對(duì)照組：年齡范圍是21-39歲，平均年齡是（24.12±2.08）歲;孕周16-21周，平均孕周是（18.12±1.07）周。對(duì)全體患者的以上資料進(jìn)行對(duì)比，組間無(wú)差異，能夠開(kāi)展對(duì)比研究實(shí)驗(yàn)（P>0.05）[2]。

1.2方法

實(shí)驗(yàn)組以染色體微陣列分析法進(jìn)行檢測(cè)，染色體微陣列分析法又稱為基因芯片，是一種分辨率極高的全基因組檢測(cè)技術(shù)，不僅能夠檢測(cè)出染色體非整倍體，而且也能夠檢測(cè)出染色體拷貝數(shù)變異。具體流程是：①通過(guò)羊水穿刺術(shù)獲得羊水，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)流程提取DNA，對(duì)樣本的DNA進(jìn)行純化、擴(kuò)增、標(biāo)記，再以染色體DNA探針實(shí)施全面覆蓋，使其與支持物固定在一起，和樣本中的標(biāo)記分子進(jìn)行雜交;②對(duì)其中的DNA雜交信號(hào)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，收集樣本分子的數(shù)量及序列等信息，通過(guò)相應(yīng)的生物信息技術(shù)、CHAS軟件對(duì)其進(jìn)行檢測(cè);③按照復(fù)制數(shù)散點(diǎn)區(qū)域面積來(lái)判斷是否缺損、交叉等。

對(duì)照組以熒光原位雜交法進(jìn)行檢測(cè)，具體流程是：①實(shí)施玻片預(yù)處理，將10mL羊水離心5min后去上清液，于35℃條件下消化15min，再次離心5min，然后將低滲液、固定液依次加入，固定3次，漂洗2次，然后浸泡于溶液中15min②在預(yù)冷100%、80%、60%乙醇中脫水5min，待玻片干燥后，對(duì)其加熱使其溫度升至58℃，然后進(jìn)行FISH實(shí)驗(yàn);③在實(shí)施預(yù)處理期間，需要將干燥涂片置于58℃烤箱內(nèi)受熱15min，然后把玻片浸泡在甲醇溶液內(nèi)3min，后取出再浸泡在乙醇溶液內(nèi)8min，再進(jìn)行干燥、脫水處理。

1.3指標(biāo)分析

比較兩組技術(shù)方法的21三體、13三體、18三體、X、Y和CNV計(jì)數(shù)結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均轉(zhuǎn)錄至SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件中進(jìn)行處理，其中，計(jì)數(shù)資料以%進(jìn)行說(shuō)明，并實(shí)施X2檢驗(yàn);計(jì)量數(shù)據(jù)則實(shí)施t檢驗(yàn)，若P<0.05，代表組間差異顯著，能夠開(kāi)展統(tǒng)計(jì)學(xué)研究。

2 結(jié)果

2.1對(duì)比兩組21三體、13三體、18三體、X和Y計(jì)數(shù)結(jié)果如表1

2.2對(duì)比兩組CNV檢測(cè)率如表2。

3 討論

產(chǎn)前胎兒染色體檢測(cè)是降低出生缺陷的重要措施，其技術(shù)方法主要是傳統(tǒng)的染色體核型分析，該方法能夠檢測(cè)出胎兒染色體非整倍體及大的結(jié)構(gòu)重排，包括平衡易位，倒位等平衡性結(jié)構(gòu)重排和片段缺失、重復(fù)等非平衡型結(jié)構(gòu)重排，在臨床中得到廣泛應(yīng)用。但其局限性也逐漸顯露出來(lái)，核型分析首先要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，診斷周期長(zhǎng)且具有培養(yǎng)失敗的風(fēng)險(xiǎn)，因此可能導(dǎo)致無(wú)法得到檢測(cè)結(jié)果。另外，由于核型分析分辨率有限而無(wú)法檢出微小的結(jié)構(gòu)異常，導(dǎo)致一些染色體拷貝數(shù)變異被漏診。對(duì)此，隨著臨床基因檢測(cè)技術(shù)的不斷優(yōu)化，熒光原位雜交技術(shù)、染色體微陣列分析法逐漸應(yīng)用于臨床。1986年，Gremer等證實(shí)熒光原位雜交技術(shù)可以檢測(cè)染色體非整倍體，從而開(kāi)辟了間期細(xì)胞遺傳學(xué)研究的新領(lǐng)域。[2]多項(xiàng)研究表明熒光原位雜交技術(shù)是產(chǎn)前檢測(cè)非整倍體的有效途徑。[3-4]但是，目前熒光原位雜交技術(shù)所用的探針主要針對(duì)13，18，21，X和Y五條染色體，無(wú)法一次性檢測(cè)46條染色體。其次，由于步驟繁多，容易造成信號(hào)丟失，造成假陰性結(jié)果。本研究中染色體微陣列分析技術(shù)相較于熒光原位雜交，一次可以檢測(cè)46條染色體非整倍體和全基因組水平染色體拷貝數(shù)變異。本研究結(jié)果表明，應(yīng)用染色體微陣列技術(shù)可以快速準(zhǔn)確的檢出13，18，21，X，Y染色體非整倍體，與核型檢測(cè)結(jié)果一致，檢出率和準(zhǔn)確率100%。同時(shí)，染色體微陣列分析技術(shù)還檢出染色體拷貝數(shù)變異72例，檢出率顯著高于對(duì)照組，P<0.05。Hillman[5]等所做的Meta分析結(jié)果表明，在產(chǎn)前診斷中，染色體微陣列分析技術(shù)較常規(guī)染色體顯帶技術(shù)增加2.9%的異常檢出率。另有研究表明運(yùn)用染色體微陣列分析技術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前診斷時(shí)，檢出率有所提高。[8-9]需要注意的是，雖然染色體微陣列分析法相比于熒光原位雜交法存在一定的優(yōu)勢(shì)，其應(yīng)用也存在一定的局限性：第一，不能檢出染色體平衡性重排。第二，染色體微陣列分析技術(shù)檢出的染色體拷貝數(shù)變異中，很多是意義未明的，這對(duì)遺傳咨詢和妊娠選擇帶來(lái)了一定的困擾。但鑒于其對(duì)常見(jiàn)染色體病和染色體拷貝數(shù)變異的檢出率和準(zhǔn)確率都優(yōu)于熒光原位雜交法，所以在產(chǎn)前遺傳性疾病的檢測(cè)中更有應(yīng)用價(jià)值，可以推廣。

參考文獻(xiàn)

邊旭明. 實(shí)用產(chǎn)前診斷學(xué)[M]. 背景：人民軍醫(yī)出版社，2011：71

Gremer T，Landegent J， Bruckner A， et al. Detection of chromosome aberrations in the human interphase nucleus by visualization of specific target DNAs with radioactive and non-radioactive in situ hybridization techniques： diagnosis of trisomy 18 with probe L1.84 [J].Hum Genet. 1986，74（4）：346-352.

梁毓，楊洋，余蘭等，熒光原位雜交快速產(chǎn)前檢測(cè)非整倍體的臨床應(yīng)用研究[J]。中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志。

劉慈，尹紅亞，劉學(xué)軍等，熒光原位雜交技術(shù)快速產(chǎn)前診斷胎兒常見(jiàn)染色體非整倍體異常研究[J]。Chinese General Practice.

Hillman SC， Pretlove S， Coomarasamy A， et al. Additional information from array comparative genomic hybridization technology over conventional karyotyping in prenatal diagnosis： a systematic review and meta-analysis [J]. Ultrasound Obstet Gynecol， 2011，37（1）：6-14

Lee CN， Lin SY， Lin CH， et al. Clinical utility of array comparative genomic hybridization for prenatal diagnosis： a cohort study of 3171 pregnancies [J]. BJOG，2012，119（5）：614-625

Shaffer LG， Rosenfeld JA，Dabell MP， et al. Detection of clinically significant genomic alterations by microarray analysis for specific anomalies detected by ultrasound [J]. Prenat Diagn，2012，32（10）：986-995