張夢(mèng)琳，丁芳，段淇凡，陳立保，陳立功，2，常建光，王學(xué)靜，劉聚祥，2

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院， 河北保定071001；2.農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病病原生物學(xué)華北科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站， 河北保定071001；3.河北省畜牧獸醫(yī)研究所， 河北保定071000）

雞“支氣管阻塞”是一種以呼吸困難為特征的多病因呼吸道疾病，病雞常因干酪樣物質(zhì)阻塞氣管、支氣管而發(fā)生機(jī)械性窒息死亡， 該病發(fā)病快，病程較長(zhǎng)，雞群發(fā)病率高，治療效果不顯著，死亡率較高，給養(yǎng)雞生產(chǎn)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 該病主要發(fā)生于秋冬、冬春交替之時(shí)，主要通過呼吸道進(jìn)行傳播， 流行范圍廣。

2019 年12 月， 河北某養(yǎng)殖場(chǎng)21 日齡白羽肉雞發(fā)病， 病雞主要表現(xiàn)呼吸道癥狀， 主要病變?yōu)橹夤芤姼衫椅镒枞?進(jìn)一步結(jié)合病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果，初步診斷病雞為“支氣管阻塞”，該結(jié)果可為該地區(qū)白羽肉雞呼吸道病防控提供有益參考。

1 臨床癥狀觀察

2019 年12 月， 河北某養(yǎng)殖場(chǎng)21 日齡白羽肉雞發(fā)病， 病初雞群僅表現(xiàn)甩鼻、咳嗽等呼吸道癥狀。 2～3天后雞群癥狀加重，表現(xiàn)為呼嚕、怪叫、伸頸張嘴呼吸等癥狀，少數(shù)病雞流淚、面部腫脹，有時(shí)可見肉雞突然尖叫， 仰臥死亡。 常規(guī)治療效果不佳，隨著肉雞日齡的增加，雞群采食量不增或逐漸下降， 有的病雞縮頸閉眼，或呆立，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，各棟雞舍肉雞的日死淘率為1%以上。

2 病理學(xué)檢查

病雞面部腫脹（2/10）、鼻腔見黏液（4/10）。 病雞氣管腔內(nèi)見黏液（4/10），氣管下端黏膜出血（6/10），支氣管內(nèi)見質(zhì)地堅(jiān)實(shí)的黃白色干酪樣物（7/10）； 肺臟局部顏色呈暗紅色（4/10），或有泡沫樣分泌物（3/10）；腺胃黏膜輕微出血（3/10）；小腸黏膜輕度出血 （3/10）， 盲腸扁桃體出血（6/10）；直腸黏膜出血（4/10）；腎臟腫脹、顏色呈暗紅色（4/10）。 部分病雞見氣囊炎（3/10）、心包炎（2/10）和肝周炎（2/10）。

3 病原學(xué)檢測(cè)

3.1 病毒PCR 檢測(cè)

無菌操作采取具有典型病變的肉雞氣管和支氣管等病料， 按常規(guī)進(jìn)行病毒RNA 的提取。 按試劑盒說明書或文獻(xiàn)規(guī)定的方法分別進(jìn)行AIV(H5、H7、H9 亞型) 、新城疫病毒（NDV） 和傳染性支氣管炎病毒（IBV） 的RT-PCR 檢測(cè)。 電泳結(jié)果顯示， 采集病料呈H9 亞型AIV 陽(yáng)性 （見 圖1），H5 和H7 亞 型AIV、NDV 和IBV 均未檢出。

3.2 細(xì)菌分離與鑒定

無菌操作采取具有典型病變的肉雞氣管和支氣管內(nèi)容物， 分別接種至十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板、 麥康凱瓊脂平板、 伊紅美藍(lán)瓊脂平板和甘露醇氯化鈉瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24～48 小時(shí)。 挑取生長(zhǎng)的典型菌落進(jìn)行純培養(yǎng)； 純培養(yǎng)后的細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)特性觀察、革蘭氏染色和形態(tài)觀察。

細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果表明， 甘露醇氯化鈉瓊脂平板無細(xì)菌生長(zhǎng)， 其余三種平板上均有細(xì)菌生長(zhǎng)。 十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板上的菌落呈灰白色、表面濕潤(rùn)、向周圍擴(kuò)散生長(zhǎng)，菌落周圍培養(yǎng)基有綠色水溶性色素， 且該純培養(yǎng)物可使麥康凱的紅色消退。 麥康凱瓊脂平板上初次培養(yǎng)見2 種不同的菌落，第1種為圓形、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、無色中等大小菌落， 純培養(yǎng)后可使麥康凱培養(yǎng)基的紅色消退； 第2 種為表面光滑、邊緣整齊、圓形隆起的紅色菌落。 伊紅美藍(lán)瓊脂平板上的菌落具有紫黑色帶金屬光澤。 十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板上純化的菌落和麥康凱瓊脂平板上的第1 種菌落純化后染色鏡檢均為革蘭氏陰性小桿菌，菌體兩端鈍圓，沒有莢膜，不存在芽孢， 單個(gè)散在或者成對(duì)排列。 麥康凱瓊脂平板上的第2 種菌落和伊紅美藍(lán)瓊脂平板上的菌落純培養(yǎng)物鏡檢均為兩端鈍圓的革蘭氏陰性紅色短桿菌。 根據(jù)以上結(jié)果初步判定分離細(xì)菌分別為銅綠假單胞菌和大腸桿菌。

十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板上的純培養(yǎng)物按李玲等報(bào)道的方法進(jìn)行PCR 檢測(cè)，電泳結(jié)果顯示該細(xì)菌呈銅綠假單胞菌陽(yáng)性（見圖2）。

4 小結(jié)與討論

根據(jù)臨床癥狀、觀察結(jié)果、病理學(xué)檢查和病原學(xué)檢查結(jié)果， 初步判定2019 年冬季河北某養(yǎng)殖場(chǎng)白羽肉雞發(fā)生了“支氣管阻塞”。 該雞場(chǎng)患病肉雞病料中檢測(cè)到的病原包括H9 亞型AIV、銅綠假單胞菌和大腸桿菌。 該結(jié)果與2014 年齊茜和王守榮報(bào)道的結(jié)果不完全一致： 前者研究發(fā)現(xiàn)山東濰坊地區(qū)肉雞 “支氣管阻塞” 病例病原為H9 亞型AIV 和大腸桿菌， 后者從山東聊城地區(qū)雞氣管阻塞病例鑒定的病原包括H9亞型AIV、NDV、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。 以上結(jié)果均表明肉雞支氣管阻塞疾病是由多種病原體聯(lián)合導(dǎo)致， 且混合感染嚴(yán)重。 2010 年以來， 關(guān)于白羽肉雞發(fā)生 “支氣管阻塞”的報(bào)道逐漸增多，應(yīng)該引起從業(yè)人員和相關(guān)部門的重視。做好生物安全工作是控制本病的關(guān)鍵。雞場(chǎng)工作人員應(yīng)重視環(huán)境因素，加強(qiáng)對(duì)雞舍環(huán)境的監(jiān)控，做好清潔衛(wèi)生，提高飼養(yǎng)管理水平，做好防寒通風(fēng)工作， 改善雞舍內(nèi)空氣質(zhì)量，重視舍內(nèi)空氣濕度，保持舍內(nèi)各飼養(yǎng)階段濕度正常。保障雞場(chǎng)生物安全，健全并嚴(yán)格執(zhí)行消毒制度。給雞群創(chuàng)造一個(gè)良好的生長(zhǎng)環(huán)境， 減少疫苗免疫、轉(zhuǎn)群等應(yīng)激，從而減少呼吸道疾病發(fā)生的誘因。接種疫苗時(shí)要避免和換料、 擴(kuò)群同時(shí)進(jìn)行。 同時(shí)要加強(qiáng)種雞免疫，使雛雞獲得較高的母源抗體。發(fā)病早期控制繼發(fā)感染，及時(shí)使用藥物預(yù)防， 如抗病毒中藥、敏感抗菌藥物、抗支原體藥物和抗應(yīng)激藥物。發(fā)病過程中及時(shí)發(fā)現(xiàn)取出病死雞并進(jìn)行無害化處理。