曾木花 黃英強(qiáng) 陳日春 郭澤鑌 謝勇

摘 要：目的：評(píng)價(jià)咸金棗受試樣品的促消化功能。方法：SD大鼠設(shè)空白對(duì)照組和低、中、高實(shí)驗(yàn)劑量組（46.3、 62、93mg/kg），每日灌胃1次，連續(xù)30d后，測定各組大鼠體重增重、進(jìn)食量、食物利用率等指標(biāo);另取各組大鼠胃液，測定其胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量。KM小鼠實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組和低、中、高實(shí)驗(yàn)劑量組（9.3、12.3、18.6mg/kg），每日灌胃1次，連續(xù)30d后，測定各組小鼠墨汁推進(jìn)率。結(jié)果：SD大鼠體重、進(jìn)食量、體重增重3項(xiàng)指標(biāo)中，各實(shí)驗(yàn)劑量組大鼠體重增重有明顯增長趨勢，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;消化酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，胃蛋白酶活性與空白組相比顯著增加（P<0.05）。小鼠小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)表明，采用不同劑量咸金棗飼喂后，各組小鼠腸道墨汁推進(jìn)率均有不同程度提高（P<0.05）。結(jié)論：咸金棗受試樣可有效增加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重并顯著提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃蛋白酶活性，進(jìn)而促進(jìn)小鼠腸道運(yùn)動(dòng)能力，發(fā)揮促消化作用。

關(guān)鍵詞：咸金棗;促消化;體重增重;胃蛋白酶活性

消化不良是消化科門診較為常見的一種腸胃疾病，其主要癥狀包括胃脘痛、餐后飽脹、上腹灼熱感、噯氣、食欲不振、惡心等[1]，對(duì)患者的工作和生活造成諸多不便。目前，臨床上常用多潘立酮、伊托必利等藥物治療消化不良，但其不適用于肝腎功能障礙的患者長期使用[2];另外，增加胃動(dòng)力藥物或消化酶制劑等化學(xué)藥物也是常用于治療消化不良的方式。然而，該方法雖然見效快，但不能從根本解決問題，還會(huì)誘發(fā)過敏反應(yīng)、產(chǎn)生耐藥性等一系列問題[3]。因此，選擇療效確切、安全性高的藥物成為緩解消化不良研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。

咸金棗是以新鮮金棗為主要原料，輔以甘草、丁香、肉桂、川貝、砂仁、豆蔻等多種藥食同源的中藥材配伍加工而制得，其中各原料具有豐富的營養(yǎng)與中醫(yī)功效特點(diǎn)。金興咸金棗已被福建省人民政府納入非物質(zhì)文化遺產(chǎn)。新鮮金棗富含多種維生素，其酸性成分可促進(jìn)唾液消化酶分泌，達(dá)到增強(qiáng)食欲的效果[4];甘草既可以益氣又可以滋補(bǔ)脾胃[5];丁香是一種極好的溫胃中藥，可以有效緩解腹部脹氣，增強(qiáng)人體的消化能力[6];肉桂對(duì)患有胃寒以及胃炎的人群具有良好的療效[7];砂仁和豆蔻，開胃消食，可治療脾胃虛寒氣滯[8?9]。咸金棗選取的中藥材都是藥食同源的中藥，且在中醫(yī)功效上多具有溫胃或促消化作用。咸金棗質(zhì)地松軟，芳香撲鼻，口味咸、酸、甜適中，滋味純正，有健脾胃、助消化、除積食腹脹、潤肺化痰之功效，成品具有改善消化的保健作用，適合消化不良的人群食用[4]。然而，目前缺乏科學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)咸金棗的促消化作用。本研究通過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)咸金棗受試樣品對(duì)大鼠體重、體重增重、進(jìn)食量、食物利用率、消化酶以及小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能的影響，以驗(yàn)證咸金棗的促消化功能。

1?材料與儀器

1.1?材料

咸金棗，福建省詔安縣四海食品有限公司;復(fù)方地芬諾酯（批號(hào)：1703003），湖南康普藥業(yè)有限公司;阿拉伯樹膠，上海祥瑞生物科技有限公司;活性炭粉，河南海韻環(huán)保科技有限公司;川奇消食片，南昌川奇保健品有限公司;水合氯醛（批號(hào)：20180813），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2?儀器

電子天平（型號(hào)：FB223），上海儀天科學(xué)儀器有限公司;低速離心機(jī)（型號(hào)：SC03），安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司;隔水式培養(yǎng)箱（型號(hào)：LRH?70），上海一恒科學(xué)儀器有限公司;破壁機(jī)（WBL1022S），廣東美的生活電器制造有限公司。

1.3?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

KM雄性小鼠60只，體重17～22g，SPF級(jí)，購自福建省福州市吳氏動(dòng)物中心;SD雄性大鼠32只，體重范圍130～160g，清潔級(jí)，購自福建省福州市吳氏動(dòng)物中心;動(dòng)物飼養(yǎng)溫度24～26℃;空氣濕度40%～70%;動(dòng)物購入后適應(yīng)環(huán)境7d后，進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。

1.4?受試樣品制備

將咸金棗加水勻漿，制成勻漿液。陽性對(duì)照藥選川奇健胃消食片。配制濃度為12.3g/50mL，每日灌胃2次，每次0.3mL。

1.5?實(shí)驗(yàn)分組及劑量設(shè)計(jì)

小鼠分組及劑量設(shè)計(jì)：KM小鼠，每組10只，設(shè)置空白組、陽性對(duì)照組、模型組和實(shí)驗(yàn)劑量組（低、中、高劑量）?？瞻捉M和模型組小鼠灌胃量為每天每只0.3mL蒸餾水;陽性對(duì)照組小鼠灌胃量為每天每只0.3mL川奇消食片溶液;小鼠低、中、高實(shí)驗(yàn)劑量組咸金棗每日灌胃劑量分別為9.3、12.3、18.6mg/kg，每日灌胃1次，連續(xù)灌胃30d。

大鼠分組及劑量設(shè)計(jì)：SD大鼠隨機(jī)分配為4組，每組8只，設(shè)置空白組和低、中、高實(shí)驗(yàn)劑量組;大鼠低、中、高實(shí)驗(yàn)劑量組咸金棗每天攝取量分別為46.3、62、93mg/kg，空白組灌胃量為每天每只1.0mL蒸餾水，灌胃時(shí)間為30d。

1.6?實(shí)驗(yàn)方法和觀測指標(biāo)

1.6.1?SD大鼠體重、體重增重、進(jìn)食量及食物利用率測定?采用清潔級(jí)SD大鼠，灌胃咸金棗溶液，劑量如1.4，灌胃30d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前測定大鼠的體重并計(jì)算大鼠體重增重、進(jìn)食量及食物利用率。

食物利用率（%）=（單位時(shí)間體重增加/單位時(shí)間進(jìn)食量）×100%（1）

1.6.2?KM小鼠墨汁推進(jìn)率測定[10] 制備碳末指示劑：用量筒量取400mL蒸餾水加入鍋中，200℃加熱;用電子天平精確稱量50g阿拉伯樹膠倒進(jìn)鍋中，煮到是透明狀溶液;稱量25g活性炭到溶液中，沸騰幾次后，放涼加入蒸餾水到500mL。復(fù)方地芬諾酯溶液配制與劑量：將復(fù)方地芬諾酯片研磨成細(xì)粉，精確稱取1.0g加入蒸餾水至20mL混合均勻即可。小鼠小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)開始前，小鼠停止飼料供給但不斷水16h，在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天各劑量組灌胃1次實(shí)驗(yàn)樣品，空白組及模型組灌胃蒸餾水、陽性對(duì)照組灌胃陽性樣品溶液;30min后各劑量組、陽性對(duì)照組和模型組灌胃0.05%復(fù)方地芬諾酯，空白組灌胃0.3mL蒸餾水;30min后空白組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組、各劑量組灌胃0.4mL碳末指示劑，25min后頸椎脫臼殺死小鼠，剪開小鼠腹腔，仔細(xì)分離黏膜，剪取幽門到回盲部的小腸，將小腸拉直放在桌面上，用長尺測量墨汁推進(jìn)的長度和小腸的總長度。

墨汁推進(jìn)率（p）=碳末指示劑推進(jìn)長度（cm）/小腸總長度（cm）×100%（2）

1.6.3?SD大鼠胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量測定?大鼠消化酶實(shí)驗(yàn)開始前24h，大鼠停止飼料供給，但不斷水。大鼠進(jìn)行腹腔注射水合氯醛麻醉，四肢固定在泡沫板上。剪去腹毛，消毒，剪開劍突下腹大約5cm;找到用細(xì)線綁住大鼠胃下端幽門部分;5h后打開大鼠腹腔，用細(xì)線綁住上端賁門部分，剪斷并取出胃，用濾紙擦凈血跡后，剪開胃腔，把內(nèi)容物倒入刻度離心管中，放入低速離心機(jī)中以轉(zhuǎn)速3 000r/min離心15min后，取上清液[11?13]。

測定胃蛋白酶活性：通過吸耳球把新鮮雞蛋清（紗布過濾）吸入2.0mm的玻璃管，平放在恒溫水浴鍋上，溫度設(shè)置為90℃，蛋白凝固后將蛋白管取出，選擇沒有氣泡的蛋白管，使用前制成10cm長度;按照1mL的胃液量加15mL 濃度為0.05mol/L的鹽酸倒入25mL帶蓋玻璃管中混合均勻，每個(gè)玻璃管加入2根蛋白管，密封后放入37℃隔水式培養(yǎng)箱中，24h后取出用長尺測量蛋白管四端減少的長度（mm）。

胃蛋白酶活性單位（μ/mL）=4端蛋白管透明長度均值2×16（3）

胃蛋白酶排出量（μ/h）=胃蛋白酶活性×每小時(shí)胃液量（4）

1.7?統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 19.0 軟件采取單因素方差分析LSD法處理數(shù)據(jù)，分析確定各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2?結(jié)果與分析

由圖1可見，模型對(duì)照組小鼠的小腸墨汁推進(jìn)率明顯低于空白組（P<0.01），說明復(fù)方地芬諾酯造模后引起小鼠腸道便秘。當(dāng)用不同劑量咸金棗對(duì)小鼠進(jìn)行干預(yù)飼養(yǎng)后，各組小鼠腸道墨汁推進(jìn)率均有不同程度的提高（P<0.05），說明咸金棗通過促消化作用，起到促進(jìn)腸道蠕動(dòng)的效果。由圖2～4可見，咸金棗受試樣品給大鼠受試30d后，對(duì)大鼠體重增重、進(jìn)食量和食物利用率均有明顯的增長趨勢（P<0.05）。體重增重、進(jìn)食量和食物利用率是一組用于間接評(píng)價(jià)食物消化率的指標(biāo)[13]，從這組指標(biāo)可見，咸金棗混合物可有效地改善大鼠的消化性能。由圖5～7可見，各咸金棗受試組大鼠胃蛋白酶活性相比空白組具有明顯的增長作用（P<0.05），但各實(shí)驗(yàn)劑量組每小時(shí)胃液量沒有明顯的差別（P>0.05），而每小時(shí)內(nèi)胃蛋白酶排出量相比空白組也沒有明顯的差別

3?討論

功能性消化不良（FD）是由胃動(dòng)力障礙引起無器質(zhì)性疾病的一組臨床綜合征。FD的發(fā)病率逐年上升，且復(fù)發(fā)率高。世界各地區(qū)消化不良發(fā)病率為7%～63%，其中中國FD的發(fā)病率為18%～45%，占消化科門診的20%～50%[14]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，普通人群中有消化不良者占19%～41%[2]?。因此，發(fā)掘有效的助消化食品具有重要研究意義。

本研究由實(shí)驗(yàn)大鼠評(píng)價(jià)咸金棗的促消化功能，通過測定SD大鼠體重、體重增重、攝食量、食物利用率，結(jié)合大鼠胃液量、胃蛋白酶活性、胃蛋白酶排出量和小鼠小腸運(yùn)動(dòng)能力等指標(biāo)評(píng)價(jià)咸金棗的促消化作用。本研究發(fā)現(xiàn)，咸金棗受試樣品對(duì)大鼠體重增重有明顯的作用效果（P<0.05）。大量促消化研究認(rèn)為，消化功能提高后，對(duì)食物消化吸收的能力增強(qiáng)、速度加快，進(jìn)食量隨之增加[15]，進(jìn)而使得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重增重，即通過增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)飼料的消化吸收能力，以提高食物利用率[16]，使其轉(zhuǎn)變成明顯的體重增重，說明體重增重與促消化是相互關(guān)聯(lián)的[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，使用咸金棗受試樣品后，大鼠低、高劑量組體重增重明顯，因此，可以從一方面體現(xiàn)咸金棗對(duì)大鼠促消化作用的提高。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，咸金棗組大鼠的進(jìn)食量也比對(duì)照組顯著提高（P<0.05），其食物利用率相應(yīng)得到改善。

人體中胃蛋白酶可以把食物中的蛋白質(zhì)分解為小的肽片段，即具有助消化的作用[17]。在大鼠的消化酶測定實(shí)驗(yàn)中，低、高劑量組胃蛋白酶活性具有顯著性差異（P<0.05），實(shí)驗(yàn)動(dòng)物消化系統(tǒng)功能中重要標(biāo)志之一是胃腸功能，其通過分泌消化酶對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行消化吸收[11]，故胃蛋白酶活性的增加從另一方面表明咸金棗對(duì)大鼠促消化作用的提高;實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，咸金棗組胃蛋白酶排出量相比對(duì)照組沒有顯著提高（P>0.05），其原因可能是各組胃液收集量之間沒有顯著差異，導(dǎo)致其總體排出量差異不顯著。

本研究發(fā)現(xiàn)，SD大鼠體重、進(jìn)食量、體重增重3項(xiàng)指標(biāo)，在各劑量組大鼠中均有顯著性增加（P<0.05），實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陽性;測定消化酶實(shí)驗(yàn)中低、高劑量組胃蛋白酶活性跟空白組相比明顯增加（P<0.05）。結(jié)合小鼠墨汁推進(jìn)率實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以得出咸金棗有顯著的促消化功能。下一步將對(duì)咸金棗的促消化功能進(jìn)行人體試食實(shí)驗(yàn)，并對(duì)其促消化功能的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)理進(jìn)行深入研究?！?/p>

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Improving Effect of Salted Kumquat on The Function of Digestion

ZENG Mu?hua1，HUANG Ying&nbsp;qiang2，CHEN Ri?chun3，GUO Ze?bin?1*，XIE Yong?4*

（1 College of Food Science，F(xiàn)ujian Agricultural and Forestry University，F(xiàn)uzhou 350002，China;2 Fujian Zhaoan Sihai Food Co.Ltd.，Zhaoan 363500，China;3 Fujian Saifu Food Inspection Research Institute Co.Ltd.，F(xiàn)uzhou 350001，China;4 College of Pharmacy，F(xiàn)ujian University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou 350122，China）

Abstract：?Objective To evaluate whether the sample of salted kumquat has the function of improving digestion abilities of experimental animals. Result SD rats were divided into the groups of the blank control group and low/ medium/ high dose groups（46.3mg/kg，62mg/kg and 93mg/kg）administrated with the Salted Kumquat once a day.The body weight gain，food intake and food utilization rate of the rats in each group were measured after 30 days，and pepsin activity and pepsin output of SD rats in each group were measured after 30 days.On the other hand，KM mice were divided into the blank control group，model control group，positive control group and low/medium/high dose groups（9.3mg/kg，12.3mg/kg and 18.6mg/kg）administrated with the Salted Kumquat once a day，the ink advance rate of KM mice in each group were measured after 30 days. Result The results indicated that the weight gains，food intake and food utilization rate of SD rats in the low/medium/ high dose groups were significantly increased （P<0.05），and the ink advance rate of KM mice in each group administrated with the Salted Kumquat was also significantly increased.On the other hand，the pepsin activity in all test groups were significantly higher than that in the blank group （P<0.05）. Conclusion The tested sample of Salted Kumquat can achieve the purpose of promoting digestion by effectively increasing the weight of experimental animals and significantly improving the activity of pepsin in experimental animals.

Keywords：salted kumquat;improving digestion;weight gain;pepsin activity