王 萍，王新芳，李海龍，霍韶瑜，姜國均，郝 丹，崔榮飛

（1.河北省獸藥監(jiān)察所 050000；2.河北省畜牧總站 050000；3.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 071001；4.河北省畜牧獸醫(yī)學(xué)會 050000；5.石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心 050000）

自上世紀(jì)人們發(fā)現(xiàn)抗生素對畜禽生長具有促進(jìn)作用以來，便被用來作為飼料添加劑， 這期間對動物生長和預(yù)防疾病起到了非常好的效果，但隨著抗生素的長期廣泛應(yīng)用，它的弊端也越來越明顯，例如引發(fā)動物腸道菌群失調(diào)、機體產(chǎn)生耐藥性、抗病力降低和藥物殘留等問題。2018 年，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部決定開展獸用抗菌藥使用減量化行動，組織制定了《獸用抗菌藥使用減量化行動試點工作方案（2018 年-2021 年）》，確定了各地獸用抗菌藥使用減量化行動試點養(yǎng)殖場數(shù)量。 2017 年農(nóng)業(yè)部，關(guān)于發(fā)布《藥物飼料添加劑品種目錄及使用規(guī)范》的公告，明確指出禁止抗病促生長的抗生素在飼料中長期添加，本研究受傳統(tǒng)中藥“焦三仙”啟發(fā)，通過研究篩選出幾種添加劑，探尋促進(jìn)仔豬生長和提高免疫力的最佳組方，來替代傳統(tǒng)抗生素添加劑，以滿足當(dāng)下養(yǎng)殖業(yè)需求，不論是對飼料資源的合理有效利用、飼料基本成本的降低，還是對保證食品動物最佳的生產(chǎn)性能， 都具有十分重要的理論與現(xiàn)實意義。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗仔豬150 頭，品種為杜×長×大 三元豬，由河北省高陽某養(yǎng)殖場提供。

1.2 試驗材料

“新腸泰” 購自四川達(dá)邦生物技術(shù)有限公司；酸化劑、乳豬酶、枯草芽孢、酵母、果寡糖購自石家莊牧豐飼料原料貿(mào)易有限公司；山楂、麥芽、神曲，購自保定東方中藥有限公司；IL-2；IL-10；IFN-γ；TNF-α 細(xì)胞因子和豬瘟抗體檢測試劑盒購自上海通蔚生物科技有限公司； 豬瘟抗體疫苗購自中牧實業(yè)股份有限公司，飼料購自大北農(nóng)飼料有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 試驗分組及處理

150 頭平均日齡為21d，平均體重為(6.98±0.45)kg 的杜長大三元雜交斷奶仔豬， 按體重、 性別和胎次基本一致原則分為A、B、C、D 和E 組，每組10 頭，設(shè)3 個重復(fù)，飼養(yǎng)7d 適應(yīng)期后，試驗組（A 組、B 組、C 組、D 組）于平均28 日齡開始，依次按0.1%拌料添加新三仙Ⅰ、新三仙Ⅱ、新三仙Ⅲ、焦三仙；空白對照組（E 組）不添加任何藥物（分組及處理詳見表1）。

表1 各添加劑的主要成分

試驗豬于哺乳期（14d）進(jìn)行公豬去勢，平均日齡21d 時斷奶，28 日齡對豬群用豬瘟疫苗常規(guī)免疫。并分別于開始與實驗結(jié)束時對各組豬只重，計算料重比；并在免疫前（28 日齡）、免后2周（42 日齡）、4 周（56 日齡）、6 周（70 日齡）各組隨機選取6 頭前腔靜脈采血2mL，提取血清，-20℃保存。

1.3.2 仔豬生長性能的測定

試驗全程以欄為單位記錄采食量， 分別于試驗開始前（28日齡）和結(jié)束時（70 日齡）當(dāng)天對空腹斷奶仔豬稱重，計算每頭斷奶仔豬的平均日增重(Average daily gain ，ADG)、 平均日采食量(Average daily intake ，ADFI)和料重比（Material weight ratio，F(xiàn)/G)，具體計算方法如下：

平均日增重（ADG)=欄總增重/(欄仔豬數(shù)x 試驗天數(shù)）；

平均日采食量(ADFI)=欄飼糧總消耗量/(欄仔豬數(shù)x 試驗天數(shù)）；

料重比(F/G)=ADFI/ADG。

1.3.3 豬瘟抗體效價的測定

采用ELISA 檢測試劑盒，按說明測定血清中豬瘟抗體的含量。

1.3.4 仔豬血清中免疫細(xì)胞因子含量的測定

采用ELISA 檢測試劑盒， 按說明測定血清中IL-2（Interleukin -2）、IL-10（Interleukin -10）、TNF-α（Tumor necrosis factor-α）和IFN-γ(Interferon -γ)的含量。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS19.0 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計和分析。

2 試驗結(jié)果

2.1 仔豬生長性能的測定結(jié)果

表2 不同組方對仔豬生長性能的影響

結(jié)果詳見表2。 試驗仔豬的末重和平均日增重，A 組和C 組高于其他各組，B 組和D 組高于E 組，差異極顯著(P＜0.01)；試驗仔豬的料重比，C 組低于其他各組，A 組、B 組和D 組低于E 組，差異顯著(P＜0.05)。 試驗表明，日糧中添加新三仙和焦三仙能顯著促進(jìn)仔豬的生長發(fā)育和提高飼料利用率。

2.2 仔豬豬瘟抗體效價的測定結(jié)果

表3 不同組方對仔豬豬瘟抗體效價的影響

結(jié)果詳見表3。 28 日齡，各組仔豬的豬瘟抗體效價相近，差異不顯著（P＞0.05）； 42 日齡，試驗各組仔豬的豬瘟抗體效價高于對照組，B 組和C 組的豬瘟抗體效價高于其他各組，差異顯著（P＜0.05）；56 日齡和70 日齡， 試驗各組的豬瘟抗體效價高于對照組，B 組和C 組的豬瘟抗體效價高于其他各組， 差異極顯著（P＜0.01）。 結(jié)果表明，給仔豬拌料使用自配的添加劑具有增強仔豬豬瘟疫苗功免疫效果的作用， 其中添加黃芪多糖的B 組和C組效果尤其顯著。

2.3 仔豬血液中免疫細(xì)胞因子的測定結(jié)果

2.3.1 血清中IL-2 含量的測定結(jié)果

表4 不同組方對仔豬血清中IL-2 含量的影響（pg/mL）

結(jié)果詳見表4。 由表可見42 日齡時C 組高于其他各組，差異顯著（P＜0.05）。 56 日齡和70 日齡B 組、C 組IL-2 含量高于其他各組，差異顯著（P＜0.05）。 試驗結(jié)果表明，B 組、C 組具有顯著提高血清中IL-2 含量的作用，這可能與B 組和C 組中添加黃芪多糖有關(guān)。

2.3.2 血清中IL-10 含量的測定結(jié)果

表5 不同組方對斷奶仔豬血清中IL-10 含量的影響（pg/mL）

結(jié)果詳見表5。 28 日齡時各組間差異不顯著，42 日齡時B組、C 組血液中IL-10 的含量顯著高于其他各組， 差異顯著 （P＜0.05）；56 日齡與70 日齡的結(jié)果顯示C 組血液中IL-10 的含量顯著高于B 組，差異顯著（P＜0.05）；B 組高于其他各組，差異顯著（P＜0.05）。試驗結(jié)果表明，新三仙Ⅱ組、新三仙Ⅲ組可顯著提高仔豬血清中IL-10 含量，其中新三仙Ⅲ組的效果最為顯著。

2.3.3 血清中IFN-γ 含量的測定結(jié)果

表6 不同組方對仔豬血清中IFN-γ 含量的影響（pg/mL）

結(jié)果詳見表6。28 日齡時各組間差異不顯著（P＞0.05），飼喂兩周以后即42 日齡、56 日齡、70 日齡時B 組、C 組血清中IFN-γ含量始終高于其他各組，差異顯著（P＜0.05），且C 組高于B 組，差異不顯著（P＞0.05）。A 組、D 組、E 組差異不顯著（P＞0.05）。試驗表明， B 組、C 組都能顯著提高血清中IFN-γ 含量的作用， 且新三仙Ⅲ組效果最好。

2.3.4 血清中TNF-α 含量的測定結(jié)果

表7 不同組方對仔豬血清中TNF-α 含量的影響（pg/mL）

結(jié)果詳見表7。 28 日齡時實驗組與對照組差異不顯著（P＞0.05），42 日齡時C 組血清中TNF-α 含量高于其他各組，差異顯著（P＜0.05），56 日齡與70 日齡時B 組、C 組血清中TNF-α 含量高于其他各組，差異顯著（P＜0.05），B 組血清中TNF-α 含量高于C 組，差異不顯著（P＞0.05）。 試驗結(jié)果表明，新三仙Ⅱ組、新三仙Ⅲ組對斷奶仔豬血清中TNF-α 的含量有明顯的提升作用，其他組的影響不明顯。

3 討論

3.1 新三仙對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響

“新三仙”根據(jù)“焦三仙”組方原理結(jié)合仔豬消化特點，采用包被益生菌“新腸泰”、酶制劑、酸化劑等組合而成。 此次試驗結(jié)果表明， 日糧中添加新三仙和焦三仙能顯著促進(jìn)仔豬的生長發(fā)育和提高飼料利用率，顯著降低仔豬的腹瀉發(fā)生率，這可能與添加的“新腸泰”、寡糖、酶制劑、酸化劑、黃芪多糖等有關(guān)。 飼料中的營養(yǎng)物質(zhì)， 大約70%～80%在小腸段消化吸收，20%～30%進(jìn)入大腸，其中大部分排出體外，形成糞便和氨氣等排泄物。 本試驗通過在飼料中添加“新三仙”挖掘利用大腸中20%～30%的營養(yǎng)物質(zhì)，提高飼料消化率， 提高仔豬生產(chǎn)性能。

腸道中的益生菌可以產(chǎn)生有機酸和抑菌成分， 抑制病原菌的生長，優(yōu)化腸道微生態(tài)區(qū)系，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收，達(dá)到促進(jìn)動物生長的目的。 豬大腸主要進(jìn)行微生物消化，以進(jìn)入大腸的未消化飼料、脫落的腸黏膜和胃腸道消化酶為底物，經(jīng)過大腸消化相關(guān)的微生物發(fā)酵產(chǎn)生以揮發(fā)性脂肪酸為主的產(chǎn)物， 大部分產(chǎn)物被動物吸收利用，為動物生長提供能量。 “新三仙”中包被的乳酸糞腸球菌，能耐高溫、耐胃酸，能順利地在大腸中定植、快速繁殖，維持腸道微生態(tài)平衡，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，促進(jìn)腸道蠕動，使動物消化道處于最佳健康狀態(tài)，提高飼料消化率。前人的研究充分證實益生菌可以通過調(diào)節(jié)構(gòu)建大腸高效微生態(tài)系統(tǒng)，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)在大腸段的消化和吸收，提高飼料利用率，顯著降低料肉比。 史自濤等[1]試驗發(fā)現(xiàn)飼料中添加糞腸球菌可提高平均日增重和平均日采食量，降低仔豬腹瀉率，提高仔豬的生產(chǎn)性能。 李興華[2]研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加酵母細(xì)胞壁多糖和枯草芽孢桿菌， 能顯著提高哺乳和斷奶仔豬免疫功能和腸道消化酶活性， 二者合用更能顯著促進(jìn)仔豬生長發(fā)育和提高其免疫功能。 彭小蘭[3]、馬秋剛[4]等研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加果寡糖能提高斷奶仔豬的飼料轉(zhuǎn)化率和日增重，降低仔豬腹瀉率，其效果與添加量關(guān)系密切。 王向榮等[5]研究發(fā)現(xiàn)四種不同的復(fù)合酶制劑均能提高仔豬的日增重，降低料重比，降低仔豬腹瀉率；賀琴[6]試驗表明添加酶制劑可以補充仔豬機體內(nèi)源酶，促進(jìn)仔豬健康生長。 酸化劑是仔豬常用的另一類添加劑，它可以降低仔豬胃酸pH 值，提高仔豬消化力。 岳增華等［7］在仔豬日糧中添加1.2%的檸檬酸或者0.5%復(fù)合酸化劑，發(fā)現(xiàn)都能顯著提高仔豬的日增重。

3.2 新三仙對斷奶仔豬豬瘟抗體效價的影響

豬瘟抗體效價的高低， 直接決定了仔豬對豬瘟病毒的抵抗力。 此次試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，42 日齡，試驗各組仔豬的豬瘟抗體效價高于對照組，B 組和C 組的豬瘟抗體效價高于其他各組，差異顯著（P＜0.05）；56 日齡和70 日齡，試驗各組的豬瘟抗體效價高于對照組，B 組和C 組的豬瘟抗體效價高于其他各組，差異極顯著（P＜0.01）。試驗結(jié)果表明飼料中添加新三仙和焦三仙均對豬瘟疫苗產(chǎn)生抗體有一定的輔助作用，其中，“新三仙Ⅱ”和“新三仙Ⅲ”產(chǎn)生的抗體又高于其他各組，因此“新三仙Ⅱ”、“新三仙Ⅲ”對斷奶仔豬增強豬瘟疫苗抗體效果最好， 這可能與其添加黃芪多糖和果寡糖等有關(guān)。 朱輝［8］和許靜波等［9］研究表明，在仔豬飼料中添加黃芪多糖能顯著提高仔豬豬瘟疫苗免疫的抗體含量， 且豬瘟抗體水平隨黃芪多糖應(yīng)用劑量的增加而呈上升趨勢； 岳文斌等［10］試驗發(fā)現(xiàn)果寡糖能增強機體的體液免疫和細(xì)胞免疫功能；韓慶功等［11］研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加復(fù)合酸化劑與抗生素組相比，豬瘟疫苗抗體水平提高了21.6%。

3.3 新三仙對斷奶仔豬血液中免疫細(xì)胞因子的影響

白細(xì)胞介素是作用于白細(xì)胞和免疫細(xì)胞之間的淋巴因子，它具有免疫調(diào)節(jié)功能。IL-2 是由活化的T 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，能激活T 細(xì)胞和促進(jìn)B 細(xì)胞分化和分泌抗體， 誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素。 IL-10主要由Th2 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、活化的B 細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生，它參與免疫細(xì)胞、炎癥細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等多種細(xì)胞的生物調(diào)節(jié)，在嚴(yán)重感染性疾病、 自身免疫性疾病和腫瘤等多種疾病中發(fā)揮重要作用。 試驗結(jié)果表明，“新三仙Ⅱ”、“新三仙Ⅲ”可顯著提高仔豬血清中IL-2 和IL-10 含量，其中新三仙Ⅲ的效果最為顯著，這可能與B 組和C 組中添加黃芪多糖有關(guān)。 金虹等[12]試驗表明經(jīng)小鼠服用黃芪多糖，能提高脾虛小鼠IL-2 的活性，提高其腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能；羅燕等[13]研究表明黃芪多糖可提高血清中IL-2 的含量；李彥東等[14]研究表明黃芪多糖主要通過調(diào)節(jié)免疫因子或免疫細(xì)胞等作用而發(fā)揮調(diào)節(jié)動物機體的免疫功能； 唐志如等[15]研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加殼寡糖和半乳甘露寡糖均能顯著提高早期血清中IgG、IgA、IgM、IL-2 和Il-6 免疫因子的濃度。

γ-干擾素是水溶性二聚體細(xì)胞因子，Younger 和Salvin 在1973 年發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中存在一種IFN，1980 年命名為γ 干擾素。γ-干擾素具有免疫調(diào)節(jié)、抗病毒及抗腫瘤特性，它是通過增強T 淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和NK 細(xì)胞的活力來調(diào)節(jié)機體的免疫力。 TNF-α 腫瘤壞死因子-α 又稱為惡病質(zhì)素，是由細(xì)菌脂多糖活化的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T 細(xì)胞產(chǎn)生，能夠引起腫瘤細(xì)胞出血壞死而得名；TNF-α 在細(xì)胞因子免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中處于中樞環(huán)節(jié)，是機體炎癥反應(yīng)以及免疫反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因子。 在病理狀態(tài)下的機體中，TNF-α 能夠清除受損細(xì)胞，從而維持機體內(nèi)環(huán)境的平衡。 因此，TNF-α 在維持機體內(nèi)部穩(wěn)定、抵御各種病原、細(xì)菌侵襲的過程中必不可少，可以保護機體，若TNF-α 過度合成，機體將會失去平衡，造成組織損傷。 此次試驗發(fā)現(xiàn)，42、56、70 日齡時B 組、C 組血清中IFN-γ 含量始終高于其他各組， 差異顯著（P＜0.05）；42 日齡時C 組血清中TNF-α 含量高于其他各組，56、70 日齡時B 組、C 組血清中TNF-α 含量高于其他各組， 差異顯著（P＜0.05）。

綜合IL-2、IL-10、IFN-γ 和TNF-α 檢測的結(jié)果來看，“新三仙Ⅱ”、“新三仙Ⅲ” 與其他組相比有顯著提升免疫機能的效果，應(yīng)該與其含有黃芪多糖有關(guān)， 黃芪多糖在免疫后各試驗階段對能反映機體免疫功能的細(xì)胞因子IL-2、IL-10、IFN-γ、TNF-α 都有增強的作用，這與馬霞等[16]的研究成果是一致的。

4 結(jié)論

“新三仙”能顯著提高斷奶仔豬的日增重，降低料重比，增強仔豬的免疫功能，其中“新三仙Ⅲ”效果最好。