□ 劉岑杰 楊 滴 大連市檢驗(yàn)檢測認(rèn)證技術(shù)服務(wù)中心

1 引言

隨著分子生物學(xué)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用，轉(zhuǎn)基因作物的種植和轉(zhuǎn)基因食品的生產(chǎn)規(guī)模日益增長。轉(zhuǎn)基因作物具有高營養(yǎng)、抗病蟲、抗除草劑等優(yōu)勢，轉(zhuǎn)基因作物在帶來巨大利益的同時(shí)也存在許多爭議，例如轉(zhuǎn)基因食品的食用安全性，對生態(tài)環(huán)境的影響，對人類健康的潛在危害等，這些都受到了人們越來越多的關(guān)注[1]。因此，許多國家針對轉(zhuǎn)基因食品出臺(tái)了相應(yīng)的管理辦法，對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品實(shí)行強(qiáng)制性標(biāo)識(shí)。轉(zhuǎn)基因成分的檢測為轉(zhuǎn)基因食品的科學(xué)監(jiān)管提供了重要的技術(shù)保障，因此加強(qiáng)對轉(zhuǎn)基因植物及其成分的檢測尤為重要。

2 轉(zhuǎn)基因植物成分檢測技術(shù)研究進(jìn)展

目前，國內(nèi)外常用的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品及其成分的檢測方法主要有兩大類：一類是核酸水平的檢測，如定性PCR技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、數(shù)字PCR技術(shù)、等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)、基因芯片技術(shù)以及二代測序技術(shù)等[2]；另一類是蛋白水平的檢測，如酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELISA法）、SDS聚丙烯凝膠電泳分析技術(shù)等。由于轉(zhuǎn)基因食品中的蛋白質(zhì)很不穩(wěn)定，影響了檢測的靈敏度，核酸水平的檢測具有很好的特異性和靈敏度，因此核酸成分檢測技術(shù)逐漸發(fā)展為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品及其成分檢測的常用方法[3，4]。

3 轉(zhuǎn)基因植物成分檢測方法標(biāo)準(zhǔn)

目前，對于轉(zhuǎn)基因植物成分檢測，國內(nèi)已發(fā)布的現(xiàn)行有效的標(biāo)準(zhǔn)有：國家標(biāo)準(zhǔn)2項(xiàng)，農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)及公告91項(xiàng)，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)4項(xiàng)及地方標(biāo)準(zhǔn)3項(xiàng)。其中以PCR檢測方法為主，還有試紙條法、微流滴數(shù)字PCR法等，詳細(xì)方法標(biāo)準(zhǔn)編號見表1。目前頒布的這些標(biāo)準(zhǔn)中基本涵蓋了常見的轉(zhuǎn)基因植物外源性成分，對于可能遇到的轉(zhuǎn)基因植物外源基因均可檢測，各檢測實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)這些方法標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍，自主選擇適合檢測方法。

表1 轉(zhuǎn)基因植物成分檢測方法

農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)及公告農(nóng)業(yè)部2259號公告—7—2015農(nóng)業(yè)部2259號公告—8—2015農(nóng)業(yè)部2259號公告—9—2015農(nóng)業(yè)部2630號公告—10—2017農(nóng)業(yè)部2630號公告—11—2017農(nóng)業(yè)部2630號公告—15—2017農(nóng)業(yè)部2630號公告—2—2017農(nóng)業(yè)部2630號公告—3—2017農(nóng)業(yè)部2630號公告—4—2017農(nóng)業(yè)部2630號公告—5—2017農(nóng)業(yè)部2630號公告—6—2017農(nóng)業(yè)部2630號公告—7—2017農(nóng)業(yè)部2630號公告—8—2017農(nóng)業(yè)部2630號公告—9—2017農(nóng)業(yè)部869號公告—10—2007農(nóng)業(yè)部869號公告—11—2007農(nóng)業(yè)部869號公告—12—2007農(nóng)業(yè)部869號公告—13—2007農(nóng)業(yè)部869號公告—14—2007農(nóng)業(yè)部869號公告—4—2007農(nóng)業(yè)部869號公告—5—2007農(nóng)業(yè)部869號公告—6—2007農(nóng)業(yè)部869號公告—7—2007農(nóng)業(yè)部953號公告—1—2007農(nóng)業(yè)部953號公告—2—2007農(nóng)業(yè)部953號公告—3—2007農(nóng)業(yè)部953號公告—4—2007農(nóng)業(yè)部953號公告—6—2007農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)及公告農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第111號—10—2018農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第111號—11—2018農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第111號—5—2018農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第111號—6—2018農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第111號—7—2018農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第111號—8—2018農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第111號—9—2018 SN/T 1201—2014 SN/T 1202—2010 SN/T 2668—2010 SN/T 2705—2010地方標(biāo)準(zhǔn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)DB12/T 650—2016 DB12/T 841—2018 DB12/T 842—2018

4 討論與建議

目前，轉(zhuǎn)基因植物成分的PCR檢測方法主要是對外源核酸進(jìn)行檢測，檢測方法以普通PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR檢測方法為主。實(shí)時(shí)熒光PCR檢測技術(shù)，因特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測效率高等優(yōu)點(diǎn)而被普遍運(yùn)用。建議各實(shí)驗(yàn)室針對自身的實(shí)驗(yàn)條件和檢測要求選擇適合的檢測方法。樣品DNA的提取質(zhì)量對于PCR實(shí)驗(yàn)的成敗至關(guān)重要，針對不同加工方式的產(chǎn)品，應(yīng)選擇不同的方法對樣品DNA進(jìn)行提取，提取的DNA模板應(yīng)進(jìn)行濃度和A260nm/A280nm吸光度比值的測定，以判斷其是否適合進(jìn)行下一步的PCR實(shí)驗(yàn)。PCR檢測實(shí)驗(yàn)中，還應(yīng)該特別注意實(shí)驗(yàn)室的日常清潔，注意質(zhì)量控制，防止實(shí)驗(yàn)過程中溶劑噴濺、氣溶膠等造成的污染，因此建議實(shí)驗(yàn)過程中添加空白、陽性、陰性對照。