任光輝

[摘 要] 為了解河南省魯山縣使用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫效果，為今后科學(xué)決策免疫程序提供依據(jù)，本文隨機(jī)選取魯山縣家11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)共50個(gè)場群為調(diào)查對(duì)象，采用血凝抑制試驗(yàn)方法對(duì)1 670份血清進(jìn)行H5、H7亞型禽流感免疫抗體檢測。結(jié)果顯示，使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗場群占64.0%，H5、H7亞型群體合格率分別為76.0%和50.0%，個(gè)體合格率分別為86.3%和59.5%;未使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的風(fēng)險(xiǎn)是使用該疫苗的3.8倍。這表明使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫效果較好，建議對(duì)不合格抗體的養(yǎng)殖場戶及時(shí)補(bǔ)免。

[關(guān)鍵詞] H5亞型;H7亞型;禽流感;血清學(xué);魯山縣

[中圖分類號(hào)] S855.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1674-7909（2020）21-113-2

禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽類（家禽和野禽）傳染病[1]。病毒根據(jù)血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的抗原性不同進(jìn)行分類，目前HA分為H1～H16亞型，NA分為N1～N9亞型。由H5、H7亞型毒株引起的疾病稱為高致病性禽流感（HPAI），發(fā)病急，發(fā)病率和病死率可達(dá)100%，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為法定通報(bào)動(dòng)物疫病，被我國列為優(yōu)先防控和重點(diǎn)防范的一類動(dòng)物疫病[2]。2004年和2017年，我國分別對(duì)H5、H7亞型禽流感實(shí)行強(qiáng)制免疫和抗體監(jiān)測，并要求采用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）集中免疫[3]。為了解河南省魯山縣高致病性禽流感免疫效果，制訂科學(xué)合理的免疫程序，開展評(píng)價(jià)工作，正確判斷禽流感防控形勢，2019年10月魯山縣畜牧局組織開展本次免疫效果監(jiān)測，以便提供可靠的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 抽樣設(shè)計(jì)

抽樣設(shè)計(jì)方法采用先群體抽樣再個(gè)體抽樣[4]。根據(jù)《2019年平頂山市動(dòng)物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》，按照估計(jì)免疫抗體陽性率方法，設(shè)85%的預(yù)期免疫抗體合格率（p），10%的可接受誤差（d），在95%的置信水平（CL）下，根據(jù)公式N=1.962×p×（1-p）/d 2計(jì)算出抽樣場數(shù)N=49個(gè)。并結(jié)合魯山縣春秋季強(qiáng)制免疫實(shí)際，對(duì)11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)隨機(jī)抽樣50個(gè)場群開展集中監(jiān)測。場群內(nèi)采取系統(tǒng)抽樣，依據(jù)場群分類不同，在家禽養(yǎng)殖場抽取1 490份、活禽交易場所抽取150份、散養(yǎng)戶抽取30份，共采集樣品1 670份。具體抽樣設(shè)計(jì)見表1。

1.2 樣品采集

無菌操作翅靜脈采集雞血液，每只2～3 mL，3 000 r/min離心10～15 min，析出血清，做好標(biāo)記，-20 ℃保存?zhèn)錂z。

1.3 檢測試劑

禽流感H5亞型病毒（Re-8株）血凝抑制試驗(yàn)抗原，批號(hào)2019062;禽流感H7亞型病毒（H7N9株），批號(hào)2019071。以上2種試劑均為哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)有限公司產(chǎn)品。

1.4 檢測方法與判斷標(biāo)準(zhǔn)

按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936—2003）[5]中血凝抑制試驗(yàn)（HI）檢測H5、H7亞型禽流感免疫抗體。判斷標(biāo)準(zhǔn)按照個(gè)體HI抗體效價(jià)≥24為免疫合格個(gè)體，群體免疫抗體合格率≥70%為免疫合格群體，H5和H7群體免疫抗體合格率均≥70%為免疫合格場群[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 H5、H7亞型禽流感免疫整體情況

在50個(gè)場群中，有32個(gè)場群使用重組禽流感（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，占場群數(shù)量的64.0%（32/50）;H5亞型場群合格率為76.0%（38/50），個(gè)體合格率為86.3%（1 442/1 670）;H7亞型場群合格率為50.0%，個(gè)體抗體合格率為59.5%（993/1 670）。養(yǎng)殖場的H5、H7亞型群體合格率和個(gè)體合格率均高于散養(yǎng)戶和活禽交易點(diǎn)，且差異顯著（P<0.05）。

2.2 使用不同疫苗的場群抗體合格率比較

在50個(gè)場群中，32個(gè)使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，18個(gè)使用其他禽流感類型疫苗和未免疫。比較使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗場群與使用其他疫苗和未免疫場群的H5、H7亞型免疫抗體，可以看出前者個(gè)體免疫抗體合格率均大于70%，分別比后者高出27.5%、187.3%，差異極顯著（P<0.01）;同時(shí)，前者群體合格率也大于未使用的群體合格率，分別高于37.9%、124.8%，差異極顯著（P<0.01）。不使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗導(dǎo)致禽流感群體免疫合格率低于70%的風(fēng)險(xiǎn)是使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的2.6倍（OR=2.6，95%CL：1.1～13.0）。

2.3 群間分布

家禽種類不同，H5、H7亞型禽流感場個(gè)體免疫抗體情況存在差別。雞和其他禽類（鴨、鵝）全部場群合格率分別為50%和0，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。雞和其他禽類（鴨、鵝）的H5亞型個(gè)體合格率分別為86.1%、91.4%，差異不顯著（P>0.05）;H7亞型個(gè)體合格率分別為62.1%、0，差異極顯著（P<0.01）。

2.4 空間分布

分析魯山縣高致病性禽流感空間分布，結(jié)果顯示，魯山縣11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)區(qū)域內(nèi)群體合格率和個(gè)體合格率不均衡，存在較大差異。D、F、K鄉(xiāng)鎮(zhèn)的H5、H7亞型場群合格率和個(gè)體合格率均高于70%，占鄉(xiāng)鎮(zhèn)總數(shù)的27.3%（3/11），符合國家要求;而A、E、H、I和J鄉(xiāng)鎮(zhèn)的H7亞型免疫抗體未檢測到，占鄉(xiāng)鎮(zhèn)總數(shù)的45.5%（5/11）。

3 討論

高致病禽流感對(duì)養(yǎng)禽業(yè)危害巨大，我國將高致病性禽流感納入強(qiáng)制免疫計(jì)劃，實(shí)行H5亞型和H7亞型高致病性禽流感100%免疫。2017年秋季，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求使用H5+H7二價(jià)滅活疫苗替代重組禽流感病毒H5二價(jià)或三價(jià)滅活疫苗，對(duì)家禽實(shí)施免疫[3]。魯山縣按照平頂山市統(tǒng)一部署，要求家禽養(yǎng)殖場戶使用H5+H7二價(jià)滅活疫苗開展高致病性禽流感免疫。本次檢測對(duì)魯山縣高致病性禽流感免疫抗體水平進(jìn)行初步整體情況了解和判斷，為下一步做好禽流感免疫工作打下基礎(chǔ)。

本次檢測是在秋季強(qiáng)制免疫21 d后進(jìn)行的抽樣抗體檢測，從本調(diào)查檢測數(shù)據(jù)看，場群免疫密度達(dá)不到100%。進(jìn)一步對(duì)抽樣檢測點(diǎn)進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，主要是對(duì)該病重視度不夠，部分養(yǎng)禽場戶沒有按照要求替換使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗。從群間分布看，雞的H5亞型個(gè)體免疫抗體合格率低于其他家禽（鴨、鵝），差異不顯著（P>0.05），而H7亞型個(gè)體免疫合格率遠(yuǎn)高于其他家禽，這可能與疫苗種類不同，其疫苗毒株的免疫原性存在差別有關(guān)。根據(jù)空間分布調(diào)查來看，全區(qū)有3個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的H5、H7個(gè)體免疫抗體水平符合國家要求，其余鄉(xiāng)鎮(zhèn)未達(dá)標(biāo)。因此，建議開展免疫普查，強(qiáng)化免疫效果監(jiān)測與評(píng)價(jià)，積極落實(shí)“先打后補(bǔ)”，對(duì)未達(dá)標(biāo)鄉(xiāng)鎮(zhèn)進(jìn)行補(bǔ)免。

對(duì)比使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗和未使用場群的個(gè)體免疫抗體合格率，前者H5、H7亞型個(gè)體抗體免疫合格率均符合國家的規(guī)定，高于70%，而后者雖然H5個(gè)體抗體免疫合格率符合國家要求，但是H7亞型不符合要求，甚至沒有檢測出抗體。這與錢昌銀等[7]調(diào)查結(jié)果一致。風(fēng)險(xiǎn)分析也進(jìn)一步證實(shí)了使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的安全可靠性。

4 結(jié)論

本次血清學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫可以達(dá)到免疫保護(hù)水平，效果優(yōu)于未使用的。建議加大宣傳力度，要求家禽養(yǎng)殖場戶使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，對(duì)免疫不合格者進(jìn)行補(bǔ)免。

參考文獻(xiàn)

[1]甘孟候.禽流感[M].2版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

[2]王家敏，沈武玲，于國偉.禽流感研究進(jìn)展[J].吉林農(nóng)業(yè)學(xué)科，2012（5）：62-65.

[3]中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部.關(guān)于切實(shí)做好全國高致病性禽流感秋季免疫工作的通知[EB/OL].（2017-08-20）[2020-06-16].http：//www.moa.gov.cn/nybgb/2017/dbq/201801/t20180103_6134000.htm.

[4]劉華，占松鶴，何長生，等.安徽省規(guī)模禽場高致病性禽流感血清學(xué)橫斷面研究與風(fēng)險(xiǎn)因素分析[J].中國動(dòng)物檢疫，2019（12）：1-7.

[5]中國人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.高致病性禽流感診斷技術(shù)：GB/T 18936—2003[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[6]中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部.《2019年國家動(dòng)物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》的通知[EB/OL].（2019-05-30）[2020-06-16].http：//www.xmsyj.moa.gov.cn/gzdt/201905/t20190530_6315850.htm.

[7]錢昌銀，程曉峰，劉華，等.2017年安徽省合肥市禽流感抗體檢測[J].中國動(dòng)物檢疫，2018（12）：26-28，42.