王佳敏，王延東，梁 銳，王穎莉*

（1.山西中醫(yī)藥大學中藥與食品工程學院，山西晉中 030619；2.華南農業(yè)大學農學院，廣東廣州 510642）

在畜牧業(yè)中，抗生素作為飼料添加劑起到促進動物生長、提高機體免疫、改善飼料利用率、減少發(fā)病率與死亡率、改善繁殖性能等作用[1]，但抗生素過度使用引起的食品安全問題已成為人們關注的熱點，抗生素殘留于肉、蛋和奶等產品中會破壞畜禽胃腸道微生態(tài)平衡，干擾免疫系統(tǒng)，降低畜禽對疾病的抵抗力[2-3]。因此，2019年7月10日中華人民共和國農業(yè)農村部發(fā)布194號文件公告，將于2020年7月1日停止生產、進口、經營、使用部分藥物飼料添加劑。因此，抗生素替代產品成為當前研究熱點。

中藥作為一種天然替抗產品，具有低毒、功能性強、經濟實用、不良反應小、無殘留和無耐藥性等優(yōu)點，可提高飼料轉化率，增強機體抗病力、抗氧化應激能力、抗菌抗病毒功能，增強繁殖性能，提高產品品質[4]。研究表明，黃芪、甘草、黃芩、白術、黨參、絞股藍等中藥材可作為飼料添加劑，起到促進畜禽生長性能和增強免疫功能的作用[5-6]。黃芪多糖具有促進淋巴細胞的增殖與分化、增加胞漿細胞分泌、調節(jié)淋巴細胞亞群平衡等作用[7]。

黃芪復方主要由黃芪、甘草等組成，制備成顆粒便于與日糧復配。本試驗旨在研究日糧中添加黃芪復方顆粒對肉雞生長性能、免疫及抗氧化功能的影響，為其在畜禽生產中的應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 黃芪復方顆粒為本試驗自制，由黃芪、甘草等水回流提取濃縮成膏狀制粒。雞免疫球蛋白A（IgA）、G（IgG）、M（IgM）ELISA Kit劑盒購于Andy gene（批號均為AD201909）。超氧化物岐化酶（SOD）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒（批號20191016）購于南京建成生物工程研究所。試驗儀器包括DNM-9602酶標儀（北京普朗新技術有限公司）、LEICA IP 1020全自動組織脫水機、LECIA RM2265全自動輪轉式切片機、LECIA DM2500 LED研究級熒光顯微圖像系統(tǒng)（德國萊卡）。

1.2 試驗設計及試驗日糧 選用1日齡公母混合100羽羅斯308肉雞適應性飼喂7 d后，稱重并隨機分成4組，每組5個重復，每個重復5羽。對照組飼喂基礎日糧，試驗組分別于飼料中添加0.87%、1.74%、3.48% 黃芪復方顆粒，試驗期21 d。參照美國羅斯308肉雞營養(yǎng)需要，1～21日齡采用肉小雞顆粒料，22～42日齡（試驗期）采用肉中雞配合料，飼料購于文水縣大象禽業(yè)象豐飼料有限公司。試驗期的基礎日糧組成及營養(yǎng)成分見表 1。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)成分

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗采用三層籠養(yǎng)，紅外燈保溫，各組分別隔離飼養(yǎng)，自由采食和飲水，于第20天新支二聯(lián)多價疫苗接種，21日齡開始在日糧中添加黃芪復方顆粒，試驗持續(xù)21 d[8]。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 肉雞生長性能 于肉雞42日齡時以重復為單位稱重稱取全部試驗雞的體重，計算飼料消耗量、平均采食量、增重、平均日增重、耗料增重比。

1.4.2 肉雞免疫器官指數 于肉雞42日齡時每組隨機選取10只肉雞，翅下靜脈采血，取脾臟、雙側胸腺和法氏囊，剝離脂肪和結締組織，稱重并計算免疫器官指數：

臟器指數（g/kg）=臟器重/活體重

1.4.3 血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的測定 翅靜脈采血，靜置30 min，2 000 r/min離心15 min，制備血清。嚴格按照 ELISA檢測試劑盒說明書進行測試，建立標準曲線，計算IgA、IgG、IgM含量[9]。

1.4.4 血清抗氧化酶活性的測定 SOD測定采用WST-1法，于450 nm處測定吸光度。MDA測定采用TBA法，于532 nm下測定吸光度。

1.4.5 HE染色分析 每組抽取10只體重相近的肉雞，采集法氏囊、脾臟、胸腺的組織樣品，經生理鹽水洗凈后置于甲醛固定液中，脫水、石蠟包埋、切片、HE染色、光鏡下觀察、拍照。

1.5 統(tǒng)計分析 用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對各項數據進行方差分析，結果表示為平均值± 標準誤（或標準差）。P＜0.01表示差異極顯著，P＜0.05表示差異顯著，P＞0.05表示差異不顯著。

2 結果

2.1 黃芪復方顆粒對肉雞生長性能的影響 肉雞飼喂全程無發(fā)病和死亡情況。由表2可見，各試驗組飼料消耗量和平均采食量均高于對照組（P＞0.05）；各試驗組增重和平均日增重均有提高，且1.74%、3.48%黃芪復方顆粒組增重較對照組分別提高了10.98%、13.64%（P＜0.01），耗料增重比分別降低9.60%、11.30%（P＜0.01）。結果表明飼喂黃芪復方顆粒對肉雞的生長性能有一定的促進作用。

表2 黃芪復方顆粒對肉雞生長性能的影響

2.2 黃芪復方顆粒對肉雞免疫器官指數的影響 如表3所示，與對照組相比，各試驗組的脾臟指數和胸腺指數均有提高（P＞0.05）。各試驗組法氏囊指數均有提高，其中0.87%、3.48%組分別提高了52.68%、48.21%（P＜0.05）。

2.3 黃芪復方顆粒對肉雞血清免疫功能的影響 由表4可見，各試驗組IgA、IgG、IgM含量均高于對照組。與對照組相比，0.87% 組和1.74% 組IgA含量分別顯著和極顯著提高，0.87%、1.74%組IgG含量極顯著提高，0.87%、1.74% 組IgM含量極顯著提高，3.48% 組IgM含量顯著提高。結果表明黃芪復方顆?？梢燥@著增加雞血清中免疫球蛋白數量，增強免疫功能，且1.74%組增加明顯，IgA、IgG、IgM分別提高了48.06%、34.26%、76.21%。

表3 黃芪復方顆粒對肉雞免疫器官指數的影響

表4 黃芪復方顆粒對肉雞血清 IgA、IgG、IgM的影響 μg/mL

2.4 黃芪復方顆粒對血清中抗氧化酶活性的影響 由表5可見，與對照組相比，各試驗組SOD含量均高于對照組，且3.48%組劑量組SOD含量顯著提高了13.18%；試驗組的MDA含量均低于對照組（P＞0.05）。

表5 黃芪復方顆粒對肉雞血清SOD和MDA的影響

2.5 黃芪復方顆粒對免疫器官組織結構的影響 由圖1可知，法氏囊、脾臟、胸腺免疫器官結構完整，排列整齊，未有異常改變。囊內皮質與髓質易分辨，皺襞發(fā)達且淋巴細胞增多。與對照組相比，試驗組淋巴小結體積較大、數量較多、大小均勻、排列緊密。3.48%組被膜較其他試驗組完整、小梁較其余組結構整齊[10]。由圖2可知，各組脾臟淋巴細胞密集，與對照組相比，試驗組紅髓和白髓界限明顯，白髓所占比例增大[11]。由圖3可知，與對照組相比，1.74%、3.48%組劑量組髓質面積增加，胸腺小體呈增多趨勢；0.87%組皮質所占比例較大，顏色較深，T淋巴細胞含量較多。

3 討論

3.1 黃芪復方顆粒對肉雞生長性能的影響 生長性能與動物增重與采食量相關，耗料增重比是評價養(yǎng)殖動物經濟效益的指標，增重減耗可有效改善微環(huán)境生態(tài)平衡，提高營養(yǎng)物質消化利用率，改善消化功能，進而提高生長性能[12]。本試驗表明，1.74%、3.48%黃芪復方顆粒組的增重較對照組分別極顯著高出10.98%、13.64%，耗料增重比分別極顯著降低9.60%、11.30%，因此黃芪復方顆粒能改善肉雞生長性能，提高增重，降低耗料增重比。黃芪、甘草具有補中益氣、補氣益脾的功效，可增強機體免疫功能，提高抗病能力，一定程度與改善畜禽的生長性能相關。

3.2 黃芪復方顆粒對肉雞免疫功能的影響 免疫功能主要受免疫系統(tǒng)調節(jié)，免疫系統(tǒng)由免疫器官、免疫細胞、免疫因子等組成。免疫器官指數是衡量機體免疫功能的主要指標，免疫器官指數越高則表示免疫系統(tǒng)發(fā)育越成熟，機體對致病原的抵抗力越強[13]。本試驗結果顯示，中樞免疫器官胸腺、法氏囊（禽類）、外周免疫器官脾臟的臟器指數均增大，HE染色顯示器官結構完整清晰。在免疫細胞方面，胸腺、法氏囊和脾臟是免疫細胞發(fā)生、分化和成熟的場所，含有淋巴細胞、漿細胞等免疫細胞[14-15]。在免疫分子方面，免疫球蛋白是一類具有抗體活性的球蛋白，其含量變化與動物機體健康狀況和免疫力密切相關，含量越高表明機體的體液免疫功能越強[16]。IgG和IgA具有抑菌、抗病毒等免疫活性，IgM具有激活補體等功能，IgG、IgA、IgM均是主要的體液免疫檢測指標[17]。本試驗中，1.74%黃芪復方顆粒組可極顯著增加免疫球蛋白數量，IgA、IgG、IgM分別提高48.06%、34.26%、76.21%進而增強免疫功能。

此外，免疫功能的增強可能與黃芪和甘草2味藥相關?，F代研究表明，黃芪多糖、黃芪皂苷等可提高巨噬細胞活性，活化中性粒細胞，促進T淋巴細胞的增殖和轉化，增強B淋巴細胞免疫功能，促進抗體生成[7]；甘草中甘草葡聚糖可刺激脾臟淋巴細胞的增殖，甘草酸可增強巨噬細胞吞噬功能和細胞免疫功能[18]，因此黃芪復方顆粒從中醫(yī)藥理論講可作為飼料添加劑增加動物畜禽的免疫功能。

3.3 黃芪復方顆粒對肉雞抗氧化功能的影響 正常機體會產生適量的自由基，但過量的自由基會破壞機體正常秩序及生理代謝等，進而引發(fā)相關疾病。SOD是抗氧化中清除自由基的主要生物酶，可通過將活性氧分子轉化為無毒化合物，使機體免受氧化應激和組織損傷；MDA為脂質氧化反應的穩(wěn)定終產物，其含量越高反映了自由基對機體脂肪的損傷程度越大，表明機體細胞膜和肝組織被氧化受損[19]。因此 SOD活力高低可以間接反映機體清除自由基的能力，MDA含量是反映脂質過氧化程度的直接量化指標[20]。本試驗結果表明，黃芪復方顆粒組SOD含量均增加，MDA含量均降低，3.48%組SOD顯著提高13.18%，可增強機體抗氧化能力，間接起到改善肉品質的作用。

4 結論

本試驗結果表明，1.74%、3.48%組較對照組分別極顯著增重10.98%、13.64%，1.74% 組IgA、IgG、IgM分別極顯著提高48.06%、34.26%、76.21%，3.48%組SOD顯著提高13.18%。可見，黃芪復方顆?？纱龠M肉雞生長、促進免疫器官的生長發(fā)育、增強抗氧化作用，為中草藥作為免疫增強劑添加于飼料中提供了理論依據。