李靄燕 招志輝 關(guān)彩華

1.廣州市番禺區(qū)中醫(yī)院，廣東廣州 511442；2.廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院,廣東廣州 511000

創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙（post trauma stress disorder，PTSD）是一種創(chuàng)傷后心理失衡的狀態(tài)。臨床表現(xiàn)包括反復重現(xiàn)的創(chuàng)傷體驗、情緒麻木、回避情緒、過度警覺引起的持續(xù)性焦慮、恐慌逃避和易激惹癥狀。近年來，戰(zhàn)爭、社會暴力、重大交通事故、自然災(zāi)害頻發(fā)，創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的發(fā)病率也在不斷上升[1-2]。因此，研究創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙并找到治療靶點具有非常重要的意義。創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙動物模型研究發(fā)現(xiàn)，接受創(chuàng)傷應(yīng)激治療的動物在生理和行為上與創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙患者有很強的相似性，包括下丘腦-垂體-腎上腺軸系統(tǒng)負反饋抑制增加，聽覺驚嚇反應(yīng)增強，以及條件性恐懼反應(yīng)持續(xù)存在?？臻g記憶受損。創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙動物模型主要通過給予動物強烈的厭惡刺激來測試動物行為和生理上的變化。這些變化取決于壓力的強度，可以持續(xù)很長時間，也可以隨時間逐漸增加。目前的研究主要集中在聯(lián)想學習中的恐懼條件反射和非聯(lián)想學習的敏感化行為[3-4]。近年來的研究表明葛根素對創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的治療有顯著作用。葛根素是葛根的主要成分，具有促進突觸生長、抗神經(jīng)元損傷、抗炎、抗抑郁、抗腫瘤等作用[5-6]。本研究采用動物心理應(yīng)激和生理應(yīng)激創(chuàng)傷應(yīng)激障礙模型,探討葛根素對創(chuàng)傷后應(yīng)激大鼠行為的作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 由廣州中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供SPF級成年雄性SD大鼠30只，體質(zhì)量（200±20）g。在溫度為22～24℃，相對濕度60%的環(huán)境下飼養(yǎng)，正常攝食攝水，飼養(yǎng)1周后開始實驗。

1.1.2 藥物及儀器 葛根素（購自湖北巨勝科技有限公司，20160806），乙醚（國家標準（GB/T 12591-2002），購自中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司），松下微型攝像機HDC-SD10，Morris 水迷宮（Morris water maze，MWM）視頻分析系統(tǒng)（上海吉量軟件科技有限公司），自制束縛器、游泳缸。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物模型制備 采用隨機數(shù)字表法將大鼠分為三組：正常組、模型組、葛根素組，每組10只。葛根素組給予15mg/kg葛根素灌胃，正常組、模型組給予相同劑量生理鹽水灌胃。所有大鼠均在早晨8點灌胃，持續(xù)2周。

模型組與葛根素組采用SPS方法構(gòu)建PTSD模型：緊密束縛大鼠2h，然后置于水深45cm、25℃的水箱內(nèi)，使其游泳20min。15min后，用密閉容器乙醚麻醉法麻醉大鼠，置于通風處，大鼠蘇醒后放回鼠籠，飼養(yǎng)7d后造模完成[7]。

1.2.2 觀察指標 大鼠僵住時間：將大鼠置于水箱中，記錄 5min內(nèi)大鼠僵住行為時間。

EPM試驗：參照Cohen等的方法[8]，進行EPM試驗。具體方法為，采用不透明有機玻璃制成半米高的高架十字迷宮，在迷宮中間放置一個8cm×8cm的平臺；將大鼠置于平臺上，大鼠頭部都朝同一個方向，在適應(yīng)10s后，記錄大鼠5min內(nèi)的行為，記錄器開臂停留時間及開臂進入次數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學處理

應(yīng)用SPSS23.0分析數(shù)據(jù)，計量資料以（）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠僵住時間比較

與正常組比較，模型組及葛根素組大鼠的僵住時間明顯延長，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；且葛根素組大鼠僵住時間為（3.25±0.80）s，較模型組（5.82±1.24）s縮短，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 各組大鼠開臂停留時間及進入次數(shù)比較

模型組開臂進入次數(shù)及開臂停留時間均顯著低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；葛根素組開臂進入次數(shù)及開臂停留時間均顯著低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；且葛根素組開臂停留時間、開臂進入次數(shù)分別為（12.36±4.50）s、（30.29±2.54）次，明顯高于模型組的（9.82±1.23）s、（22.56±1.27）次，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表1 各組大鼠僵住時間比較（x ± s，s）

表2 各組大鼠開臂停留時間及進入次數(shù)比較（x ± s）

3 討論

人類創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的成因較為復雜，如生活壓力、家庭暴力等都可能成為原因之一。相關(guān)統(tǒng)計學數(shù)據(jù)分析提示，51.2%的女性、60.7%的男性曾經(jīng)歷過創(chuàng)傷性事件[9-10]。對于受害者而言，創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的發(fā)病率較高，一旦發(fā)病病情容易遷延難愈。既往相關(guān)研究主要集中在創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙發(fā)病后的管理上，很少有關(guān)于預防相關(guān)研究報道。對于PTSD高危人群，如經(jīng)常目睹或遭受災(zāi)難性事件的消防員、軍人等，應(yīng)有必要采取干預措施來增強其壓力閾值，降低創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的發(fā)病率。

SPS動物模型可以模擬創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙患者對創(chuàng)傷后情景和類似焦慮行為的恐懼反應(yīng)。它是國際公認的創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙建模方法之一。僵住行為檢測，本研究中模型組大鼠的僵住時間較正常對照組明顯延長，提示SPS方法能誘發(fā)大鼠發(fā)生創(chuàng)傷后行為異常。EPM實驗，利用動物對新環(huán)境的探究和對高懸臂的恐懼形成沖突，并對實驗動物的焦慮品質(zhì)進行評價[11-12]。本研究中模型組大鼠在 EPM實驗中表現(xiàn)為開臂進入次數(shù)和開臂停留時間比較正常對照組顯著降低。這表明，當單一的長時間應(yīng)激作用大鼠后，再被放置在EPM的中心區(qū)域時，其探究和好奇的性質(zhì)減弱，與外部世界連接的開臂引起的威脅增強，焦慮和恐懼的水平顯著增加[13-16]。大鼠迅速從中心區(qū)域跑開，手臂縮回成閉合狀態(tài)。而空白對照組大鼠在開臂上停留的時間更長，對開臂的探究次數(shù)明顯增多較多。提示SPS可引起大鼠的長期焦慮反應(yīng)，而大鼠探索行為抑制、回避和恐懼，并增加焦慮水平[17-18]。

葛根素又稱為葛根黃素，是一種從中藥葛根素中分離得到的具有擴冠作用的異黃酮衍生物[19-22]。葛根素存在于豆科植物和葛根中。葛根素具有鎮(zhèn)靜解熱作用，能增加冠狀動脈血流，對垂體引起的急性心肌出血有明顯的保護作用[23]。本研究中，在造模完成后，對小鼠進行僵住行為檢測，結(jié)果顯示葛根素組僵住行為時間明顯較模型組縮短，提示葛根素具有逆轉(zhuǎn)小鼠創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙僵住行為的作用，對創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的僵住行為有明顯抑制作用。在EMP試驗中，結(jié)果顯示葛根素組開臂進入次數(shù)及開臂停留時間均顯著高于模型組。提示葛根素具有改善創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙后大鼠焦慮癥狀的作用。

綜上，葛根素對SPS建成的創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙大鼠行為及異常精神狀態(tài)具有一定的改善作用，證實葛根素具有有效預防創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙大鼠焦慮樣行為，能增強大鼠對創(chuàng)傷后應(yīng)激的適應(yīng)能力。葛根素能減少SPS模型大鼠的僵立行為時間，說明葛根素對于預防創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙大鼠恐懼樣行為具有一定的作用。