趙曉芳 王麗麗 楊梅

【摘要】 目的 觀察P16蛋白和液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)（TCT）及人乳頭瘤病毒（HPV）基因分型或高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）聯(lián)合檢測(cè)在宮頸病變篩查中的應(yīng)用效果。方法 559例宮頸病變患者， 均應(yīng)用病毒學(xué)聯(lián)合細(xì)胞學(xué)進(jìn)行檢查。對(duì)比其診斷效果， 選出最有意義的方式。結(jié)果 患者經(jīng)檢查后可知， HPV分型陽(yáng)性+TCT異常、HR-HPV陽(yáng)性+TCT異常、HPV分型陽(yáng)性+P16TCT異常、HR-HPV陽(yáng)性+P16TCT異常為宮頸病變的好發(fā)人群， 應(yīng)用P16TCT+HPV分型對(duì)高度宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）的檢出率更高（48.33%）。結(jié)論 宮頸疾病人群中， HPV感染率較高， 且以高危型、單一和二重感染居多;隨著宮頸病變程度的加重， HPV的感染率和P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高。采用P16TCT+HPV分型在宮頸病變篩查中的篩查效果略優(yōu)于其他方式。

【關(guān)鍵詞】 P16蛋白;液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè);人乳頭瘤病毒基因分型;聯(lián)合檢測(cè);宮頸病變;篩查

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.21.090

宮頸病變是臨床婦科科室中經(jīng)常遇到的疾病， 其中像慢性宮頸炎等都有可能導(dǎo)致宮頸病變的發(fā)生。其中最值得警惕的情況便是宮頸上皮內(nèi)病變， 該癥狀與宮頸癌存在直接聯(lián)系， 即為宮頸癌的癌前病變， 若不盡早對(duì)宮頸上皮內(nèi)病變進(jìn)行確診并治療， 則可能會(huì)發(fā)展為宮頸癌， 對(duì)患者的生命安全造成重大威脅[1]。有關(guān)患者宮頸病變的檢查， 現(xiàn)今主要采用病毒學(xué)和細(xì)胞學(xué)聯(lián)合檢查， 其中病毒學(xué)包括HPV分型檢查與HR-HPV檢查， 細(xì)胞學(xué)則包括普通TCT與P16蛋白表達(dá)-TCT（P16TCT）聯(lián)合檢查， 以上診斷方式雖能夠起到較好的檢出作用， 但也存在一定差異[2]。本研究對(duì)4種不同的檢測(cè)方式進(jìn)行分析和對(duì)比， 以選出最具有價(jià)值的檢測(cè)方式， 研究流程及結(jié)果如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取559例本院于2018年1月～2020年1月收治的宮頸病變患者， 為其提供4種聯(lián)合檢測(cè)方式， 以上患者中選擇TCT+HPV分型的有331例、TCT+HR-HPV的有156例、P16TCT+HPV分型的有60例、 P16TCT+HR-HPV的有19例， 其中7例患者同時(shí)選擇TCT+HPV分型、TCT+HR-HPV檢查?；颊吣挲g25～77歲， 平均年齡（48.31±9.72）歲。納入患者經(jīng)TCT診斷后病癥分級(jí)均為意義不明的不典型鱗狀細(xì)胞（ASC-US） 及以上。該研究已通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)、所有患者均已簽署知情同意書。

1. 2 方法

1. 2. 1 儀器及試劑 美國(guó)ABI-2720 PCR儀及系統(tǒng)、潮州凱普生物化學(xué)有限公司HBHM-9000A組合型分子雜交儀， 廣州江元醫(yī)療科技有限公司全自動(dòng)細(xì)胞免疫標(biāo)記染色系統(tǒng)（ICC）JY-6000;HPV基因分型試劑由凱普生物提供， P16蛋白試劑、TCT試劑由江元醫(yī)療提供。

1. 2. 2 TCT檢查 患者入院后立即應(yīng)用宮頸刷插入其宮頸管中大概1 cm位置處， 繞順時(shí)針的方向旋轉(zhuǎn)大概5～6圈， 對(duì)宮頸外口和宮頸管處被刷下來的脫落細(xì)胞進(jìn)行收集， 并將細(xì)胞置入保存液當(dāng)中， 應(yīng)用TCT制片機(jī)制片， 并用濃度為95%酒精進(jìn)行固定， 完成染色。

1. 2. 3 P16蛋白表達(dá)檢測(cè) 采用JY-6000系統(tǒng)制作液基薄片， 95%酒精溫室固定72 h， 晾干。將每張液基薄片劃分為兩半， 一半做P16蛋白表達(dá)檢測(cè)， 另一半作陰性對(duì)照。采用免疫組化 Elivision法檢測(cè)P16蛋白的表達(dá)， 并按照試劑盒說明書進(jìn)行相關(guān)操作。

1. 2. 4 HPV基因分型檢測(cè) 同1.2.2采集樣本完畢立即放入保存液中， 裂解后提取DNA， 試劑盒購(gòu)自潮州凱普生物化學(xué)有限公司， 采用ABI-2720 PCR儀， 以細(xì)胞內(nèi)基準(zhǔn)物質(zhì)β-globin DNA為對(duì)照， 在4種熒光檢測(cè)通道下， 同步進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增與導(dǎo)流雜交基因分型檢測(cè)， 根據(jù)系統(tǒng)自帶軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。操作及結(jié)果判讀參考試劑盒說明書。

本次研究為其提供4種聯(lián)合檢測(cè)方式， 分別為TCT+HPV分型、TCT+HR-HPV、P16TCT+HPV分型、P16TCT+HR-HPV， 患者按照自己意愿自行選擇檢測(cè)方式， 并對(duì)聯(lián)合檢測(cè)方式進(jìn)行分析。

1. 3 判定標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)2006年制定的TBS分級(jí)系統(tǒng)對(duì)TCT異?；颊哌M(jìn)行分級(jí)， 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)按照從輕至重的順序分為正常范圍（WNL）， ASC-US， 低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）， 不典型鱗狀細(xì)胞、不除外高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（ASC-H）， 高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）以及宮頸癌（SCC）;P16TCT結(jié)果判定方式：P16蛋白表達(dá)陽(yáng)性（細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒， 每一玻片隨機(jī)觀察10個(gè)視野， 陰性細(xì)胞（-）未被著色或著色不明顯;陽(yáng)性細(xì)胞（+）著色較深， 多以黃棕色為主）或TCT異常定義為P16TCT異常。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 4種檢測(cè)方案CIN敏感度對(duì)比 納入患者采用TCT+HPV分型檢測(cè)的共有331例， 其中檢測(cè)出高度CIN的患者有142例， 占總監(jiān)測(cè)患者數(shù)的42.90%;采用TCT+ HR-HPV檢測(cè)的共有156例， 其中檢測(cè)出高度CIN的患者有63例， 占總監(jiān)測(cè)患者數(shù)的40.38%;采用P16TCT+HPV分型檢測(cè)的共有60例， 其中檢測(cè)出高度CIN的患者有29例， 占總監(jiān)測(cè)患者數(shù)的48.33%;采用P16TCT+ HR-HPV檢測(cè)的共有19例， 其中檢測(cè)出高度CIN的患者有9例， 占總監(jiān)測(cè)患者數(shù)的47.37%。4種檢測(cè)中P16TCT+HPV分型檢測(cè)的高度CIN檢出率最高， 4種檢出率對(duì)比， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。