王國迪 陳瑞* 汪彥欣 趙麗 張宇

（1 杭州市植保土肥服務(wù)總站，杭州310020；2 浙江農(nóng)林大學(xué)，杭州311300；第一作者：893772886@qq.com；

*通訊作者：chenrui0307@126.com）

水稻惡苗病是危害水稻地上部分，主要由種子傳播的一種常見的真菌性病害，引起該病的病原菌為藤倉鐮刀菌[1-3]。近年來，隨著浙江省水稻集中育秧的推廣，水稻惡苗病的發(fā)生日趨加重，嚴(yán)重威脅早稻的安全生產(chǎn)[4]。當(dāng)前防治水稻惡苗病的主要措施是采用化學(xué)藥劑對種子進(jìn)行消毒處理，25%氰烯菌酯懸浮劑作為防治水稻惡苗病的適宜藥劑在浙江稻區(qū)大量使用，長期單一使用化學(xué)殺菌劑極易產(chǎn)生抗藥性[5-6]。已有報道在浙江紹興地區(qū)分離到對氰烯菌酯高抗的惡苗病菌，田間試驗發(fā)現(xiàn)單獨使用氰烯菌酯浸種處理對水稻惡苗病的防效較差[7-8]。2019 年杭州市錢塘新區(qū)河莊街道早稻用25%氰烯菌酯懸浮劑對種子進(jìn)行浸種消毒處理，水稻秧苗惡苗病仍大量發(fā)生，發(fā)病率嚴(yán)重的達(dá)到100%，造成大量的經(jīng)濟損失。為此我們開展了一系列試驗，一方面測定了種子帶菌率和惡苗病菌對氰烯菌酯的抗藥性，另一方面從生產(chǎn)實踐出發(fā)篩選了有效的種子浸種處理藥劑，通過研究力求科學(xué)防控水稻惡苗病的發(fā)生，保障糧食生產(chǎn)安全。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試水稻品種：中早39 號（浙江勿忘農(nóng)公司）；供試藥劑：96%氰烯菌酯原藥（江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司）、25%氰烯菌酯懸浮劑（江蘇省農(nóng)藥研究所股份有限公司）、25%咪鮮胺乳油（江蘇輝豐生物農(nóng)業(yè)股份有限公司）、4.23%甲霜·種菌唑微乳劑（愛利思達(dá)生物化學(xué)品有限公司）。

1.2 種子帶菌率測定

圖1 惡苗病菌對氰烯菌酯的抗性測定及濃度設(shè)置

將稻種用無菌水清洗后，先用70%酒精浸泡1 min，再用3%（有效氯）次氯酸鈉溶液浸泡3 min，最后用無菌水清洗3 遍，將種子在超凈臺中晾干后接種到加有100 μg/mL 鏈霉素和100 μg/mL 卡那霉素的馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基平板上，每張平板均勻接種7 個稻種，25℃黑暗培養(yǎng)3 d，觀察稻種表面及周圍的菌落情況。

1.3 惡苗病菌對氰烯菌酯的抗藥性測定

1.3.1 惡苗病菌分離

選取錢塘新區(qū)水稻育秧基地表現(xiàn)明顯惡苗病癥狀的水稻秧苗，從莖基部剪取約2～3 cm 的莖段，用自來水沖洗干凈，先用70%酒精浸泡消毒1 min，再用3%（有效氯）次氯酸鈉溶液浸泡消毒3 min，無菌水沖洗3次，超凈臺中晾干，將莖段切成約5 mm 的小塊，接種在含100 μg/mL 鏈霉素和100 μg/mL 卡那霉素的PDA培養(yǎng)基平板上，25℃黑暗培養(yǎng)5 d 后，根據(jù)菌落顏色、形態(tài)判斷為鐮刀菌的菌株轉(zhuǎn)接到新的PDA 培養(yǎng)基平板上，25℃黑暗培養(yǎng)，備用。

1.3.2 抗藥性測定

采用區(qū)分劑量法測定惡苗病菌對氰烯菌酯的抗藥性。將氰烯菌酯原藥用丙酮配制成100 000 μg/mL 的母液，然后配制成含氰烯菌酯質(zhì)量濃度為0 μg/mL、0.25 μg/mL、1 μg/mL、50 μg/mL 和200 μg /mL 的PDA平板。將分離菌株用打孔器切成直徑5 mm 的菌餅，將菌餅接種至含氰烯菌酯的PDA 平板上，每個平板接種7 個菌餅，每個菌株每濃度處理重復(fù)3 次。25 ℃培養(yǎng)4 d 后觀察菌落生長情況，具體設(shè)置見圖1。不能在含0.25 μg/mL 氰烯菌酯的培養(yǎng)基上生長的為敏感菌株；能在0.25～1 μg/mL 氰烯菌酯的培養(yǎng)基上生長的為低水平抗藥性菌株；能在1～50 μg/mL 氰烯菌酯的培養(yǎng)基上生長的為中等水平抗藥性菌株；能在200 μg/mL 氰烯菌酯的培養(yǎng)基上生長的為高水平抗藥性菌株[5]。

表1 惡苗病菌對氰烯菌酯的抗性水平及抗性頻率

表2 不同藥劑處理對水稻惡苗病的防治效果

1.4 藥劑篩選試驗

試驗在杭州市錢塘新區(qū)河莊鎮(zhèn)進(jìn)行，試驗作物為早稻，品種為中早39。試驗設(shè)7 個處理：處理1，清水浸種（CK）；處理2，4.23%甲霜·種菌唑微乳劑400 倍液浸種；處理3，4. 23%甲霜·種菌唑微乳劑600 倍液浸種；處理4，25%氰烯菌酯懸浮劑2000 倍液浸種；處理5，25%氰烯菌酯懸浮劑750 倍液浸種；處理6，25%咪鮮胺乳油2 000 倍液浸種；處理7，25%咪鮮胺乳油2 000 倍液+25%氰烯菌酯懸浮劑2 000 倍混液浸種。

2019 年4 月8 日浸種，每個處理用水量2 000 mL，用種量1 500 g，各處理按設(shè)計濃度配制好藥液并充分?jǐn)嚢韬蟮谷敫煞N子，撈去秕粒，浸種48 h 后催芽，催芽1 d 后播種，每個處理播9 個秧盤，每個秧盤用種量166 g；播后4 d 擺盤灌水。分別于播種后11 d、18 d調(diào)查水稻秧苗惡苗病發(fā)病情況，記錄發(fā)病株數(shù)，并計算各處理的病株率和防治效果。

病株率（%）=病苗數(shù)/調(diào)查總苗數(shù)×100；

防治效果（%）=（對照區(qū)病株率-處理區(qū)病株率）/對照區(qū)病株率×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 種子帶菌率

在供試的66 粒稻種中，長出惡苗病菌的種子52粒，帶菌率為78.79%。

2.2 惡苗病菌對氰烯菌酯的抗藥性

由表1 可見，共分離得到51 株惡苗病菌，其中氰烯菌酯高抗菌株49 株，抗藥性頻率為96.08%，為優(yōu)勢致病菌株；另2 株為氰烯菌酯中高抗菌株，頻率為3.92%；本次樣品中未檢測到低抗和中抗菌株，也沒有檢測到敏感菌株。

2.3 藥劑篩選

從表2 可以看出，不同藥劑處理對水稻惡苗病的防治效果存在顯著差異，25%氰烯菌酯懸浮劑對水稻惡苗病的防治效果最差，2 000 倍液和750 倍液處理的水稻秧苗病株率分別為62.01%和38.47%，防治效果僅37.44%和61.10%；而25%咪鮮胺乳油2 000 倍液、25%咪鮮胺乳油2 000 倍液+25%氰烯菌酯懸浮劑2 000 倍液混配、4.23%甲霜·種菌唑微乳劑400 倍液和600 倍液對水稻惡苗病的防治效果好，播種后18 d 的防效均達(dá)到99.00%左右，這3 種藥劑浸種處理間差異不顯著，均極顯著高于25%氰烯菌酯懸浮劑2 000 倍液和750 倍液處理。

3 小結(jié)與討論

從供試惡苗病株分離的惡苗病菌已經(jīng)對氰烯菌酯產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性，而且供試稻種的帶菌率也非常高，是導(dǎo)致該地2019 年早稻惡苗病大發(fā)生的主要原因。因此，應(yīng)該加強稻種帶菌以及惡苗病菌對主要浸種藥劑抗藥性的早期檢測與預(yù)警，科學(xué)選用藥劑，從而實現(xiàn)水稻惡苗病的有效防控。本試驗表明，4.23%甲霜·種菌唑微乳劑400 倍液和600 倍液、25%咪鮮胺乳油2 000 倍液、5%咪鮮胺乳油2 000 倍液+25%氰烯菌酯懸浮劑2000 倍液混配液浸種48 h 對惡苗病防效較好，顯著優(yōu)于25%氰烯菌酯懸浮劑750 倍液和2 000倍液浸種處理，適合在老（重）病區(qū)和對氰烯菌酯抗性較高的地區(qū)輪換使用來控制惡苗病的發(fā)生為害。